分解尿素的细菌的分离与计数.doc

荥阳市实验高中高二生物导学案 荥阳市实验高中高二生物导学案课题：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学号： 姓名： 编写人： 审核人： 审批人： 使用时间： 【考纲要求及解读】考纲要求考纲解读达成情况微生物的利用1.微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定3.培养基对微生物的选择作用【阅读教材，基础检测】1.培养基根据功能可分为 培养基和 培养基。类型实例选择培养基培养基中加入 用于分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入 用于分离得到金黄色葡萄球菌以 作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌不添加 的培养基用于分离固氮微生物 是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的鉴别培养基 培养基可以鉴别大肠杆菌（菌落呈 ）；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变 。2.筛选菌株（1）原则： （2）土壤中分解尿素的细菌筛选原理a.选择培养基的成分： 作为唯一氮源b.鉴定方法：在培养基中加入 指示剂，若pH升高，指示剂变红，说明细菌能分解尿素。3.统计菌落数目的方法（1） 法（计活菌、间接计数）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个 ，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中菌株数= ，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。值得注意的是：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 。（2）显微镜直接计数法（不能区分死菌和活菌）原理：利用特定细菌计数板或 ，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。（3）实例：土壤中分解尿素的细菌的计数项目详细内容实验原理（1）能合成 的细菌才能分解尿素；（2）配制以 为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌数量统计（1） （间接，只统计活菌）（2） （直接，不区分活菌和死菌）实验流程土壤取样配置土壤溶液和制备培养基 涂布平板与培养菌落计数【提炼精讲】1.易混淆选择培养基与鉴别培养基（1）选择培养基：允许特定的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。土壤中分解尿素的细菌的分离利用的是选择培养基。（2）鉴别培养基是在培养基加入某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来的培养基。用于筛选纤维素分解菌的培养基就是鉴别培养基。2.微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红，说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物【当堂检测】1（2016.四川）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。（1）图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较。（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。2.（2017.全国）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_ _ （答出两点即可）。（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是_ 。（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_ _ 。（答出两点即可）3. （2018.衡水十模）“贵州茅台”被誉为我国的国酒，虽然工艺并不复杂，但是大家公认其独特品质的关键是当地的独特气候、水质、以及当地空气或环境中存在独特的微生物。为了提取当地环境中的独特菌种，某研究小组以优质高粱、上等小麦为原料，制作培养基，搜集、分离空气中的微生物。回答下列问题:（1）该培养基按成分分类，属于_（“天然”或“合成”）培养基，培养基在接种微生物前，必须先进行_ 灭菌。（2）将上述培养基暴露在空气中培养一段时间后，取10g该培养基用无菌水制成 100ml 样品溶液，再将样品溶液稀释 104倍后，各取样品溶液 0.1 mL 在5个细菌培养基平板上接种，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178 和 191。该过程采取的接种方法是_，每克培养基样品中的细菌数量为_个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较实际值_，原因是_ _。（3）生产酒的主要微生物是酵母菌，其代谢类型是_ ，其产物乙醇与_试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验。4. （2018.山东菏泽一模）为探究大肠杆菌CV101菌株和CV103菌株的营养需求，某团队在营养成分相同的含醋酸盐的培养液中分别接种CV101菌株和CV103菌株，并置于相同且适宜的环境中培养，每隔一段时间统计两种菌株的生长状况。实验数据如下图所示，回答下列问题：（1）醋酸盐培养基从物理性质上来看属于 培养基，该培养基主要应用是 ；从功能上来看属于 培养基。（2）由图可知:更适应醋酸盐培养基环境的菌株是 ，其依据是 ，原因是 。（3）若要统计培养30小时后醋酸盐培养基中的CV101活菌数，可采用 法；为保证能在固体培养基上获得单个菌落，接种前，需取1mL该菌液进行 处理。5. （2014.郑州三模）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。（1）大肠杆菌的同化类型为 ，从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于 。（2）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是 ，因此需对培养基和培养皿进行 （填“消毒”或“灭菌”），操作者的双手需要进行清洗和 。空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使 ，还能破坏DNA的结构。（3）根据用途划分，该培养基属于 （填“选择”或“鉴别”）培养基，若要分离能分解尿素的细菌需将培养基中 换成 ，若要鉴定分解尿素的细菌还需将伊红美蓝换成 。（4）培养大肠