青阳参总甙抗癫痫作用的分子机理研究.doc

青阳参总甙抗癫痫作用的分子机理研究【摘要】：青阳参总甙(Qingyangshenylycosides,QYS)是萝摩科鹅绒属植物青阳参(CynanchumOtophyllumScheid)根粉提取物,已有动物实验表明QYS对大鼠听源性惊厥(audiogenicseizure,AGS)发作、“点燃”效应(kindlingeffect)以及硫酸亚铁诱导的癫痫发作具有明显的对抗作用,表现出显著的抗癫痫效应(antiepilepticeffect).以往研究表明QYS对中枢神经系统(CNS)中乙酰胆碱浓度、5HT、c-fos、神经肽浓度以及GABA能都有一定的影响,但对QYS抗癫痫作用的分子生物学机理到目前为止还知之甚少。DBA/2J小鼠是一种先天性对强噪音敏感的小鼠,在受到高强度的声音刺激后便会相继出现狂奔(wildrunning)、阵挛(colus)、强直性痉挛(tonus)等异常行为。因此,DBA小鼠成为研究癫痫发生机制和筛选新型抗癫痫药物(antiepilepticdrugs,AEDs)较好的实验动物。本实验就以DBA小鼠为实验动物,运用动物药理学方法考察QYS对强噪音诱导的听源性惊厥和PTZ(pentylenetatrazol)诱导的全身性癫痫(PTZ-inducedgeneralizedepilepsy)发作的影响;运用高密度基因芯片技术、实时定量PCR技术以及Westernblot等分子生物学技术,分别考察强噪音诱导的小鼠AGS发作后基因表达的变化,分析AGS发作相关的基因差异表达;考察QYS对中脑下丘基因表达谱的影响以及QYS抑制AGS发作后基因表达谱的变化,对QYS抗癫痫作用的分子生物学机制进行初步探讨,同时为筛选新型抗癫痫药物提供一些理论基础。1.青阳参总甙对听源性惊厥发作和PTZ诱导的癫痫发作的行为学研究连续两天腹腔注射方式给予动物不同剂量的QYS后,考察QYS对强噪音(113.5dBSPL的电铃声)诱导的听源性惊厥发作的影响。结果显示对照组(Con组)动物和给予75mg/kg组动物(QY75)中AGS发作的潜伏期分别为2.210.25秒和2.200.36秒,两组间不存在显著差异(studentt-test,P0.05),而且两组动物都出现了明显的强直痉挛,即Tonus%为100。而给予100mg/kg以上剂量的QYS可以非常明显地延长强噪音诱导的AGS发作的潜伏期(Kruskal-Wallisone-wayANOVA,P【关键词】：青阳参总甙听源性惊厥戊四氮抗癫痫作用促癫痫作用基因表达中脑下丘【学位授予单位】：华东师范大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2005【分类号】：R285.5【目录】：中文摘要10-16英文摘要16-22第一章青阳参总甙影响听源性惊厥和PTZ诱导癫痫发作的行为学研究22-36摘要22-23前言23-24材料与方法24-25结果25-271青阳参总甙对强噪音引起的听源性惊厥发作的影响25-262青阳参总甙对DBA小鼠PTZ诱导的癫痫发作的影响26-273青阳参总甙对大鼠PTZ诱导癫痫发作的影响27讨论27-301青阳参总甙具有抗惊厥作用27-282青阳参总甙的促癫痫作用283青阳参总甙的双重特性(biphasicproperty)28-30版图与说明30-36第二章青阳参总甙诱导小鼠中脑下丘基因表达谱分析36-57摘要36-37前言37材料与方法37-41结果41-471组织总RNA412基因芯片技术揭示青阳参总甙诱导的基因表达谱变化41-462.1离子通道基因422.2神经递质受体基因42-432.3代谢酶基因43-442.4其它参与细胞通讯的基因44-452.5其它生理过程中的基因45-463荧光定量PCR技术显示QYS诱导的基因表达差异46-47讨论47-501青阳参总甙对离子通道基因表达的影响472青阳参总甙影响神经递质受体基因表达47-483青阳参总甙影响新陈代谢过程484青阳参总甙对细胞因子的影响48-50版图与说明50-57第三章听源性惊厥发作诱导的中脑下丘基因表达谱变化57-69摘要57-58前言58-59材料与方法59结果59-631组织总RNA592听源性惊厥诱导的基因表达图谱分析59-632.1离子通道基因59-602.2神经递质受体基因60-612.3代谢酶基因61-622.4其它参与细胞通讯的基因622.5其它生理过程中的基因62-63讨论63-671离子通道基因与听源性惊厥的发生63-642神经递质受体基因表达异常与听源性惊厥形成64-653谷氨酸代谢失衡与听源性惊厥654能量代谢异常参与了听源性惊厥发作过程655细胞因子、细胞凋亡以及细胞发生与听源性惊厥发生65-67版图与说明67-69第四章青阳参总甙抑制听源性惊厥发作后中脑下丘基因表达谱分析69-77摘要69前言69-70材料与方法70结果70-741离子通道基因702神经递质受体基因70-713其它参与细胞通讯的基因71-724代谢酶基因72-735其它生理过程中的基因73-74讨论74-77第五章青阳参总甙抗癫痫作用的分子机理研究77-98摘要77-78前言78材料与方法78-81结果81-861基因芯片实验显示与青阳参总甙抗癲痫效应相关基因81-842荧光定量PCR技术检测基因的差异表达84-86讨论86-90版图与说明90-98第六章差异表达差异揭示青阳参总甙促癫痫和抗癫痫两重性98-109摘要98前言98-99材料与方法99-100结果100-1021Scnlb和Kcnal在两种癫痫模型中的差异表达100-1012Glns和Camk2b和在两种癫痫模型中的差异表达101-1023Pcx在两种癫痫模型中的差异表达102讨论102-106版图与说明106-109第七章综述：癫痫产生的分子机理以及抗癫痫药物的研究进展109-122癫痫动物模型109遗传性癫痫动物模型109“点燃”模型(kindlingmodel)109化学致癫剂诱导的癫痫动物模型109癫痫发作的分子机制研究进展109-115离子通道基因与癫痫发作110神经递质受体基因与癫痫发作110-112代谢酶基因与癫痫发作112-114生长因子和细胞因子与癫痫发作114-115细胞凋亡基因蛋白与癫痫发作115听源性惊厥形成机制的研究进展115-116抗癫痫药物及其作用机