液相提高灵敏度的方法.ppt

液相增加柱效 提高灵敏度的小诀窍 资料收集 cbjcn1985 生化 多肽 5988 6316EN升温对于反相HPLC分离强疏水肽的影响 B27 Polypeptide 流动相 A 含0 05 三氟乙酸的水B 含0 05 三氟乙酸的乙腈2 B min进样量 100 L 50 g的6M脲 5 乙酸 UV 210nm流速 1mL min室温 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x250mm5 m 室温300C400C500C600C700C 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 环保 样品 除草剂流动相 52 480 1M乙酸钠 甲醇 pH6流速 0 45mL min温度 40 90 检测 UV 除草剂 柱温的影响Herbicides EffectofColumnTemperature 1 西玛津2 敌草隆3 扑灭津4 扑灭净5 异丙甲草胺 1 Simazine2 Diuron3 Propazine4 Prometryn5 etolachlor 液相色谱柱 ZorbaxStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x150mm 5 m 40 90 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 Zorbax300StableBond C3色谱柱尺寸 4 6x150mm 5 m 肽类 蛋白质 升温对分离的影响Peptides Proteins EffectofElevatedTemperature 样品 多肽流动相 A 5 95 乙腈 水 0 10 三氟乙酸 V V B 95 5 乙腈 水 0 085 三氟乙酸 V V 梯度 在20min内15 53 后运行时间12min流速 l 0mL min温度 室温 60 检测 UV215nm 1 亮氨酸脑啡呔2 血管紧张素II3 核糖核酸酶A4 牛胰岛素5 细胞色素C6 溶菌酶7 肌红蛋白8 碳酸酐酶 1 LeucineEnkephalin2 AngiotensinII3 RnaseA4 Insulin BOV 5 CytochromeC6 Lysozyme7 Myoglobin8 Carbonicanhydrase 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 ZorbaxStableBond C8色谱柱尺寸 150mm 5 m 减小毛细管内径来提高低浓度样品的检测灵敏度ReducingCapillaryIDtoImproveSensitivityforConcentration LimitedSamples 流动相 60 乙腈 40 水流速 内径0 3mm 4uL min内径0 5mm 10uL min内径1 0mm 50uL min内径4 6mm 1 0uL min温度 室温检测器 UV254nm样品 200ng联二苯 100nl 减小柱径 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6454EN使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 TE32 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x15mm3 5 m 流动相 乙腈 1 甲酸 32 68UV 254nm流速 1 0mL min 30 C进样量 5 L 响应时间 4 0秒响应时间 2 0秒响应时间 1 0秒响应时间 0 5秒响应时间 0 1秒 1 尿嘧啶2 乙酰水杨酸3 N 乙酰苯胺 1 Uracil2 Acetylsalicylicacid3 Acetanilide 缩短检测器响应时间 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 不同硅胶类型比较 TE1 流动相 含0 05 甲醇的二氯甲烷 液相色谱柱 toluenebenzanilidephenolbenzylalcohol ZorbaxSilSpherisorbZorbaxRx Sil 甲苯N 苯甲酰苯胺苯酚苯甲醇 使用高纯硅胶 可增加柱效 提高灵敏度 有机化学 5988 6366ENpH对苯胺取代物分析的影响 ORCH1 流动相25mM磷酸 甲醇 58 42流速 1mL min22 C 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m 对位甲氧基苯胺间位苯甲胺3 氨基 苯甲腈对位氯苯胺间位氯苯胺邻位氯苯胺 pH 2 5pH 7 0 改变流动相pH 可增加柱效 提高灵敏度 生化 肽 5988 6293EN三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 B10 Peptide 流动相 A 水和三氟乙酸B 乙腈和三氟乙酸0 30 B 30min 内 流速 1mL minUV 254nm进样量 6uL十肽菌素标样S1 S5 疏水性有略微差异 40 C 液相色谱柱 ZORBAX300SB C8色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m 1 0 三氟乙酸 0 05 三氟乙酸 0 25 三氟乙酸 改变流动相pH 可增加柱效 提高灵敏度 食品分析 5988 6360EN流动相强度对单糖和二糖分离的影响 FD4 流动相 乙腈 水如图流速 1mL min示差折光检测器 液相色谱柱 ZORBAXNH2色谱柱尺寸 4 6x250mm5 m 果糖葡糖蔗糖Palatinose海藻糖异麦芽糖 乙腈 水70 30乙腈 水75 25 改变有机相 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6468EN有机改性剂和pH对于选择性的影响 TE5 流动相 25mM磷酸缓冲液流速 1 0mL min 22 C 液相色谱柱 ZORBAXStableBond CN色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m anisidinem toluidine4 cl aniline3 aminobenzonitrile3 cl aniline2 cl aniline 甲氧基苯胺间位苯甲胺4 氯 苯胺3 氨基苯甲腈3 氯 苯胺2 氯 苯胺 42 甲醇 58 缓冲液30 甲醇 70 缓冲液 pH2 6 pH3 0 改变有机相 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6453ENZORBAXEclipse系列色谱柱的选择性 TE31 液相色谱柱 ZORBAXEclipseXDB Phenyl色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m 流动相 甲醇 水 70 30UV 254nm流速 1 0mL min 室温 ZorbaxEclipseXDB 苯基ZorbaxEclipseXDB C8ZorbaxEclipseXDB C18 1 尿嘧啶2 苯酚3 4 氯 硝基苯4 甲苯5 萘 1 Uracil2 Phenol3 4 Cl nitrobenzene4 Toluene5 Naphthalene 改变键合相 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 ZorbaxExtend C18色谱柱尺寸 2 1x150mm 5um 三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类RP HPLC ESI MS分离的选择性比较SelectivityComparisonofTFAandNH4OHforPeptideRP HPLC ESI MSAnalysis 流速 0 25mL min 温度 25 梯度 5 60 Bin20min LC MS 正离子 ESI Vf70V Vcap4 5kV N2 35psi 12L min 300 样品 4 L 各50ng 三氟乙酸条件 A 0 1 三氟乙酸水溶液B 0 085 三氟乙酸80 的乙腈溶液 NH4OH条件 A 20mMNH4OH水溶液B 20mMNH4OH80 的乙腈溶液 改变有机添加剂 可增加柱效 提高灵敏度 生化 肽 十肽菌素 5988 6299EN酸对于反相肽的分离的影响 B16 decapeptide 液相色谱柱 ZORBAX300SB C8色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m 十肽菌素S1十肽菌素S2十肽菌素S3十肽菌素S4十肽菌素S5 decapeptideS1decapeptideS2decapeptideS3decapeptideS4decapeptideS5 0 1 三氟乙酸 0 025MH3PO4 改变有机添加剂可增加柱效 提高灵敏度 流动相 A 含相应的酸的水相B 含相应的酸的乙腈0 30 B 30min 内 进样量 6 L肽标样UV 254nm流速 1mL min40 C 色谱柱技术 流动相对色谱的影响 TE40 液相色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C8色谱柱尺寸 4 6x50mm3 5 m UV 254nm流速 1mL min 室温 UracilButylparabenNaphthaleneDipropylphthalateAcenaphthene 尿嘧啶尼帕尔金丁酯萘二丙基邻苯二甲酸酯苊 刻度混合 Dial a MixA 水B