200例男性不育症患者精子质量及形态学分析.doc

200例男性不育症患者精子质量及形态学分析【摘要】目的探讨男性不育症患者精子质量及形态学的临床应用价值。方法采用CASA系统对200例男性不育症精液标本进行分析，并随机选其中30例同时与人工分析对照。结果CASA系统检测数据具有良好的可重复性和准确性，且方便、快捷；200例精液检测发现：精子活力低下率占本组的82.5%，远远高于其它各项因素。结论精子质量及形态学是婚前检查必要项目，精子质量及形态学严重影响着生育能力。 【关键词】 男性不育症；精子质量Analysis of sperma quality and morphology in 200 infertility male patients.LI Guang-ting, YUAN Han-rao, HUANG Han-zhou.（Laboratory Department of Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, Guangdong, P. R. China）在泌尿外科、生殖医学和计划生育的临床和科研工作中，经常需要了解男性生育能力。计算机辅助精子质量分析（Computer auxiliary spermatozoa analysis，CASA）将计算机技术和先进的图像处理技术应用于精子质量的检验，通过对精子动（静）态图像分析精子的特性，为临床提供有关精子质量各项指标的准确数据，检测过程迅速，项目齐全。我们采用SQIAS-1000彩色精液质量图文分析系统系统对200例男性不育症精液标本进行了分析。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 精液标本 精液标本200例由广东医学院附属医院男性不育专科门诊提供。1.1.2 检查仪器 SQIAS-1000彩色精液质量图文分析系统（同济医科大学千屏影像工程公司和武汉清平影像工程公司共同研究生产），该系统由一台计算机（联想天琴PentiumII）、高速图像采集卡、CCD敏通摄像头、MACRO标准精子计数板（南京源程提供）、OLYMPUSCH30型显微镜、显微摄像系统和相应软件组成。人工分析用血细胞计数板。1.2 方法1.2.1 精液标本的准备 受试者禁欲57d，手淫法或体外排精法获取精液，将所有精液收集到20ml的一次性无菌痰塑料杯内，置于37温箱内，60min内液化后待用。1.2.2 CASA系统检测1.2.2.1 检测方法 全份精液标本液化后取20μl样品于玻片上，由显微镜初检，如果精子密度过高（80×109L）,则将精子做相应的稀释处理，稀释液为生理盐水，取10μl处理后精液，置于南京源程提供的标准精子计数板上，注意标本量太少会有气泡。精液标本、精子计数板的温度控制在37为宜。于100×倍镜下观察510个视野，取精子密度相对均匀的视野进行检测。调至400×倍镜下，选取中35个视野，通过摄像头、图像采集卡传入CASA|SS3.0系统进行精子静态特征分析处理。调至250×倍镜下，选取（2）中35个视野图像采集轨迹图，几幅图采集的精子数应100，轨迹图分析结果反映被检测精子的动态特征。结果报告，由计算机自动处理检测结果，报告可输出和储存。1.2.2.2 检测项目 （1）静态特征精子密度、畸形率及分类、白细胞或圆细胞检测。（2）动态特征精子活性检测：直线速度（VSL）、曲线速度（VCL）、平均路径速度（VAP）、直线性（LIN）、摆动性（WOB）、前向性（STR）、精子头侧摆幅度（ALH）等；精子活率及活力分级：测定活动精子的百分率；活力分4级：4级或A类 （快速前向运动）、3级或B类（慢速或呆滞前向运动）、2级或C类（非前向 运动）、1级或D类（极慢或不动），各级精子数百分比及关键精子数百分比。（3）一般特征精液排泄量、气味、颜色、pH值等。1.2.3 统计学分析 CASA可重复性分析，对连续5次测得的精子密度、活率及活力（特别是A+B类精子）各参数的变异情况进行统计分析；CASA和人工精液分析各项指标对比t检验及相关性分析；CASA对200例男性不育症精液特性进行比较分析，探讨男性不育症的病因及精子动态特征检测的重要性。（4） 精液检查正常参考范围是：正常的精子包括：密度≥20×109L，活动力：快速直线运动精子数≥25% 或快速和慢速直线活动精子数≥50%，形态：精子头形态正常的精子数≥30%，精子体形态正常的精子数≥40%，精子尾形态正常的精子数≥40%，包被抗体且无凝集的活动精子≤10%。2 结果2.1 CASA可重复性的测定 见表1，表1所示：CASA检测的精子密度、活率及活力A+B参数数值的变异性都很小，变异系数分别为4.916、2.185、4.016,说明检测系统具有良好的可重复性。2.2 200例男性不育症CASA检测结果分类构成比 见表2。按世界卫生组织（WHO）精液参数标准，CASA可评价少精症、弱精子症、少弱精子症。少精子症：精子密度少于2千万/ml；弱精子症：前向运动的精子（A类或B类）少于50%或A类运动的精子少于25%；少弱精子症，即符合少精子症和弱精子症两项标准。200例精液计算机检测发现：精子活力低下率（弱精子症、少弱精子症）占本组的82.5%,远远高于其它各项因素。表1 CASA可重复性测定的统计学分析（略）表2 200例男性不育症精液CASA检测结果分类构成比（略）注：精子活力低下率：76.5%+6%=82.5%2.3 200例男性不育症精子形态检查结果 见表3。表3 200例男性不育症精子形态检查结果（略）3 讨论精液分析是判断男性生育力的最基本和最重要的常规检查方法。CASA系统对精子分析的价值在于对精子头运动的详细描述中的一系列运动参数进行计算机处理1。将现代计算机技术和先进的图像处理系统运用于精子质量的分析，经临床验证表明：CASA系统不但能够替代人工精液分析方法，而且能快速准确地测定精子密度、活率、活力等参数，重复性好，可比性强，为临床工作提供科学的诊断依据。除常规项目外，它还可以提供描述精子运动状态的多种参数，图像输出更清晰直观，显示了精子的运动轨迹情况，减少了人工检测的误差，并且可以进行报告的打印、存储、查询，便于临床和科研的比较、分析。CASA系统还配置有精子形态学软件，适用范围广，可用于不育症、婚前检查、优生优育等，在同样的操作平台上，还配置了染色体分析软件。CASA系统测定精子密度的准确性和活动精子的百分率受精液中细胞成分和非精子的颗粒物质的影响，因此，为取得准确的检测结果，必须将标本稀释，稀释剂最好是同源精浆1。 CASA系统检测的静态图采集设置于400×倍镜下，此状态下精子形态、精液中各种细胞成分和非精子的颗粒物质清晰可辨，提高了检测准确率，也有利于人机检测对照；轨迹图即精子动态特征图，设置于250×倍镜下采集处理，此状态既可避免非精子颗粒物质和各种细胞成分的影响, 又使一个视野中有足够多的精子及精子有足够大的运动空间，使轨迹图清晰，分析结果快捷、准确。CASA系统对200例男性不育症精液检测结果分类显示：精子活力低下率（占男性不育82.5%，）远远高于少精子症、液化时间过长、无精子症、死精子症等因素。精液各项参数对男性不育影响程度的文献报告结果不一，在精液参数中精子活力比密度更为重要，在精子数少的情况下，对精液参数综合评价相当重要2；据报道应用分类回归树CART对5 147例男性不育症精液检测结果分析指出：精子活力是影响男子生育力的最重要参数3。我们采用CASA系统对200例男性不育症精液检测的结果，也说明精子活力低下是引起男性不育的重要原因。精子形态检查结果显示：正常精子60例，占30%，畸形精子为140例，占70%，其中头部缺陷精子52例，占26%，颈中段缺陷精子42例，占21%，尾部缺陷精子46例，占23%，人的精子形似蝌蚪，长约60um，分头、体、尾三部。正常形态的精子头是椭圆形的，如果精子头过大、过小或呈锥形、不规则形、双头等均属不正常。除了观察精子头部，还要检查体部和尾部。中部原生质小滴过大或尾部卷曲、断折也属形态异常。如果在精液中发现大量畸形精子或不成熟的精子细胞，则说明睾丸生精功能发生障碍。所以，精子形态也是造成不育原因之一。【参考文献】 1 世界卫生组织. 人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册M.第3版