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朝阳区科技计划项目 朝阳区科技计划项目可行性报告a立题的背景和意义女性生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染主要经性生活传播，大部分HPV感染无临床症状或为亚临床感染，但严重者可发展为宫颈癌，HPV感染使宫颈癌的相对危险增加250倍。 宫颈癌有较长的癌前病变过程，高危型HPV的持续感染是必需的致病原因，因此目前认为它是一种可预防和可治愈的肿瘤，关键在于对癌前病变（即宫颈上皮内瘤变，cervical intraepithelialneoplasia,CIN）和早期宫颈癌的诊断、治疗和监测。 研究表明HPV感染、CIN和早期宫颈癌的自然病程中，决定患者转归（病变进展或退缩）的主要因素是HPV的基因型和病人免疫防御体系之间的平衡。 事实上，HPV感染是一种很常见的事件，甚至有资料表明妇女一生中感染HPV的机会高达80%，但多数妇女可在数月之内清除病毒,仅少数演变为持续性感染，进而发展成为CIN甚至宫颈癌。 这一现象表明，大多数妇女具备完善的防御机制对抗和清除HPV，仅在少数妇女中防御机制存在缺陷。 越来越多的证据表明，在HPV感染、CIN进展和宫颈癌的发生进程中，患者的细胞免疫功能缺陷是一件具有决定意义的免疫学事件，但其意义尚无明确。 国外的动物实验和为数不多的人体试验提示CD4+T细胞所主导的Th1反应在HPV感染过程中非常重要，也有争议显示CIN患者宫颈组织中CD4+T细胞主要表现为Th2表型和相应的细胞因子微环境。 对HPV感染患者进行细胞免疫功能的动态监测以及预后的评估，目前国际存在争议，国内研究尚属空白。 因此对我国HPV感染患者进行细胞功能的动态评价，包括对CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群和功能进行深入研究，为探讨细胞免疫机制在HPV感染以及宫颈癌相关性，以及探寻有效的干预措施具有重要意义。 必要性HPV患者持续感染可发生宫颈病变或宫颈癌，细胞免疫功能可能参与其发病机制。 动态监测HPV感染人群的细胞免疫功能变化，对及早发现宫颈癌高危人群，探寻预防宫颈病变及宫颈癌的发生的有效策略，提高疾病治愈率具有重要意义。 b国内外研究现状和发展趋势HPV感染是妇女发生宫颈癌重要的原因之一，研究证实HPV感染是宫颈癌前期病变-宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的主要病因。 HPV是一组病毒的总称，目前已经确定的HPV型别大约有130余种，依其感染的上皮所在部位分为皮肤型HPV和生殖道上皮HPV，大约40种型别可感染妇女生殖道，约20种与肿瘤相关。 依据不同型别HPV导致细胞恶变程度不同分为低危型和高危型，低危型HPV包括HPV 6、 11、 42、 43、44等，常引起外生殖器湿疣等良性病变包括宫颈上皮内低度病变(CINI)，高危型HPV包括HPVl 6、 18、3l、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、68等，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CIN IICIN III)的发生相关，尤其是HPVl6和18型。 HPV主要通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。 病毒侵入人体后，停留于感染部位的皮肤和粘膜中，不产生病毒血症。 有报道认为HPV多型感染易导致宫颈病变。 HPV感染与宫颈癌的关系最初在19世纪70年代提出，此后许多流行病学和分子学研究均毫无疑问的证明了HPV与宫颈癌的病因学联系。 有报道通过收集22个国家的宫颈癌活检标本作PCR检测，发现99.7的肿瘤中都可以检测到HPVDNA，而且各国间无显著差异。 这是迄今为止所报道人类肿瘤致病因素中的最高检出百分数，同时表明HPV感染与宫颈癌的相关具有普遍意义。 如HPVl6，13，33等型与宫颈癌的发生关系密切，用核酸杂交方法检出癌组织中HPV DNA阳性率60以上。 关于女性生殖道感染HPV的流行情况，据xxxx年美国国家健康和营养研究课题的考察结果显示，1459岁的HPV总感染率为26.8，所以HPV感染给女性带来的威胁超出之前的估计。 我国HPV感染的流行病学筛查逐渐引起关注，目前感染HPV妇女有逐年上升的趋势，以香港为例，以前的研究提示，5妊娠妇女检测出HPV感染，参加香港社会卫生临床的妇女的HPV的感染率1993年为12.6，xx年为30.6。 由HPV感染造成的性病尖锐湿疣的发病率也在迅速上升，且因存在大量的漏报和不报，估计其发病率应该是性病中最多的。 我国每年新发现的宫颈癌患者约有13.15万，发病率和死亡率有增加趋势，且宫颈癌发病年龄呈现年轻化趋势，可以预见，HPV感染造成的损失也相应增大。 HPV感染生殖道是一个长期的过程，可潜伏在细胞内若干年，一旦机体免疫力降低，潜伏的病毒可恢复活动。 HPV感染过程通常分为潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期和HPV相关的肿瘤期。 宫颈癌也有一系列的前驱病变，即宫颈上皮不典型增生，病理上称宫颈上皮内瘤交(CIN)，通常又根据严重程度分成三级宫颈上皮内轻度瘤变(CIN I)、宫颈上皮内中度瘤变(CIN II)和宫颈上皮内高度瘤变(CIN III)，这些癌前病变均有可能发展为宫颈浸润癌。 有关HPV感染和CIN对象转归的研究有很多。 一些前瞻性研究显示，HPV感染阳性的妇女在2年内有1528发展为宫颈鳞状上皮内病变，尤其是HPV16和18型感染危险性更高。 HPV阳性妇女能否进展到宫颈上皮内高度病变和癌症，与HPV的型别有很大联系，有研究显示在宫颈低度病变的妇女中，高危型别HPV感染阳性的妇女宫颈病变进展的危险性大于低危型HPV感染或HPV阴性的妇女。 此外，HPV DNA剂量水平、HPV首次感染的时间等也很重要。 国外的动物实验和为数不多的人体试验提示CD4+T细胞所主导的Th1反应在HPV感染过程中非常重要，也有争议显示CIN患者宫颈组织中CD4+T细胞主要表现为Th2表型和相应的细胞因子微环境。 对HPV感染患者进行细胞免疫功能的动态监测以及预后的评估，目前国际存在争议，国内研究尚属空白。 c拟承担单位的技术优势和条件我科为宫颈病变诊治基地，在科主任的领导下，先后完成多项关于宫颈方面相关课题研究，我院病源多，在宫颈病变及宫颈癌的诊治已形成规范，在临床及科研方面都打下良好基础，具有明显优势。 课题指导者苏光主任为主任医师，教授，医学博士，研究生导师，多次主持并完成多项科研课题并多次获奖，在核心杂志发表多篇论文，为课题的发展提供强有力的核心支持，课题主要实施者刘阳副主任医师，医学硕士，多次参与课题研究，并在核心期刊发表论文，课题其他参与人员，亦有丰富的临床经验及科研能力，为课题的完成打下了基础。 前期我们对宫颈相关病变患者做过临床观察及随访，HPV感染与宫颈相关病变患者的预后有相关性。 动态监测HPV具有非常重要的意义。 动态的细胞免疫监测在协和医院检测。 北京协和医院感染科细胞免疫实验室为国内进行细胞免疫功能研究的领先单位，建立了国内第一个研究T细胞免疫功能平台，率先开展了流式细胞仪检测HIV感染者CD 4、CD8及功能亚群、激活亚群的方法，并率先建立了ELISpot及流式细胞仪检测细胞内因子、CFSE测定等国际先进的细胞免疫分析技术，获得国家资质认证，并广泛应用于HIV、SARS、病毒性肝炎、CMV感染、肺结核、自身免疫性疾病等多种疾病的细胞免疫功能研究，为目前国内首家完成正常人的T细胞免疫功能测定的单位，建立了不同疾病谱的细胞免疫功能评价体系。 我室目前拥有P3实验室、多参数流式细胞仪（六色八参数）、bDNA仪、ELISpot分析仪等先进仪器设备以及训练有素、技术熟练的科研技术梯队。 承担了国家 十一五、十二五科技重大专项、863项目、国家自然科学基金、北京市科委等多项科研课题。 主要参与者简历吕玮，女，40岁，1998年毕业于中国协和医科大学，获博士学位。 现任英国医学杂志中文版（BMJ）通讯编委和中华临床医师编委。 1998年-xx年北京协和医院内科住院医师；xx年至今北京先后担任协和医院感染内科主治医师、副主任医师。 从事对各种感染性疾病和传染病的临床诊治工作，并主要致力于艾滋病的临床和科研工作。 xx年-xx年于法国巴黎六大PITIE医院细胞免疫室完成了中欧艾滋病疫苗项目（CHIVAC III）两年的博士后培训任务，主要学习了ELISpot、多色流式细胞仪技术和细胞内介素染色技术，参与欧盟多国艾滋病疫苗实验室标准化质量控制流程的培训和操作。 独立完成HIV感染后长期无进展者（LTNP）的CTL应答的研究以及急性HIV感染应用QUEST疫苗后的HIV特异性细胞免疫研究，其研究结果先后在xx年美国CROI大会、xx年美国CROI大会、欧洲第十六届免疫学研讨会（ECIxx）以及欧洲艾滋病疫苗大会(AIDS VACCINExx)交流。 科研上担任了国家十一五重大专项“艾滋病DNA疫苗-天坛重组痘苗的I期临床试验”子课题负责人和国家十二五重大专项“免疫抑制治疗HIV/AIDS以及病毒储存库研究”子课题负责人。 并主要参与了李太生教授牵头的国家十一五重大专项的“成年艾滋病患者治疗和免疫重建研究工作”和xx-xx年度国家自然科学基金“HIV-1高暴露持续血清阴性者与感染后长期无进展者HIV-1特异性免疫应答规律研究”等工作。 获得奖励情况xx年报道的“疑诊SARS的艾滋病合并卡式肺孢子菌感染2例”获得北京协和医院临床成果特等奖。 xx年参与的“成人艾滋病免疫重建和适宜性治疗研究”获华夏科技奖一等奖。 论著目录 1、Xie J,Lu W,Samri A,Costagliola D,Schnuriger A,Da SilvaBCM,Blanc B,Almeida M,PellO,Larsen M,Theodorou I,Rouzioux C,Autran B,and theALT-ANRS-CO15study group.Distinct differentiationProfile betweenHIV-Gag andNef specificCD8+T cellswith preservationof CD27+central memoryT cellsis dictatedby HLAB57/5801and associatedwith viruscontrol.AIDS.xxSep24;24 (15):2323-2329.（作为共同第一作者）2.Fuping G,Wei L,Yang H,Zhifeng Q,Lingyan Z,Yanling L,Taisheng Li.Impact ofHepatitis CVirus Coinfectionon HAARTin HIV-infected individuals:Multicentric ObservationCohort.J AcquirImmune DeficSyndxx54 (2):137-42. 3、吕玮，弓孟春。 美国传染病学会xx年HIV感染者初级诊疗指南解读。 中国全科医学，xx，58-10。 4、吕玮。 浅谈上呼吸道感染的抗生素合理使用。 中国全科医学，xx，524-26。 5、杨华夏，吕玮，范宏伟，刘晓清。 系统性红斑狼疮合并结核性脑膜炎病例分析。 基础医学与临床，xx，234-236。 6、经血液（非静脉吸毒）和性传播的HIV合并HBV和HCV感染的研究。 吕玮,韩杨，邱志峰，刘正印，范宏伟，左玲燕，李雁翎，李太生。 中华传染病杂志,xx,546-49。 7、普通变异性免疫缺陷综合征12例病例分析和文献复习。 吕玮，刘正印，李太生。 中华内科杂志，5387-391。 8、普通变异性免疫球蛋白缺乏症5例病例报道并文献复习。 吕玮，孙钢。 疑难病杂志，xx，7402-405。 9、误诊为重症急性呼吸综合征的艾滋病合并卡氏肺孢子虫肺炎一例。 吕玮，刘正印，李太生。 中华内科杂志，xx，43 （3）222。 10、发热、呼吸困难、肺多发阴影SARS局部流行期间艾滋病并发卡氏肺孢子虫肺炎2例报道。 吕玮，李太生，盛瑞媛。 世界医学杂志,7 (17),18-20。 11、严重急性呼吸综合征病人血浆细胞因子水平的动态改变。 谢静，韩扬，李太生，邱志峰，马小军，范宏伟，吕玮，刘正印，王仲，王焕玲，邓国华。 中华内科杂志，xx；42 （9）643645。 12、严重急性呼吸综合征急性期T淋巴细胞亚群异常改变.李太生,邱志峰,韩扬,张宏伟,王仲,刘正印,范宏伟,吕玮,于莺,王焕玲,张惠媛,谢静,周宝桐,马小军,倪安平,王爱霞,邓国华。 中华检验医学杂志，xx，26:297-299。 13、HIV免疫重建策略。 吕玮，李太生。 中国医学论坛报，xx,844。 d项目目标、研究内容和关键技术总目标建立HPV感染患者队列，评估患者随访动态的细胞免疫功能变化，评估与早期宫颈癌的相关性，探讨参与HPV感染的细胞免疫机制和干预措施。 考核指标 1、建立HPV感染患者队列 2、完成患者细胞免疫功能评估 3、结果分析，完成论文1-2篇关键技术HPV感染患者免疫监测高危人群干预e进度安排和目标 1、门诊筛查HPV感染患者30例，CIN患者20例，宫颈癌20例。 对照组为正常人群。 每3个月抽取外周血进行淋巴细胞亚群检测。 定期监测随访；3-6个月进行HPV病毒定量以及抗体检测，标本留取xx.1.1-xx.6.30追踪文献、收集病例。 2、xx.7.1-xx.12.31监测患者免疫