细胞凝集反应实验报告01270.doc

_细胞生物学实验报告一 实验名称：细胞凝集反应二 实验原理：细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。三 实验用品： 土豆块茎显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2.4.2%的红细胞四 实验步骤：1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充分混匀。4. 同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右孔内，充分混匀，做对照实验。5. 摇晃510min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。五 实验结果：试剂土豆凝集素PBS缓冲液现象在振荡过程中，溶液中的红细胞渐渐凝集成颗粒状，逐渐聚拢，最后在液滴中形成一大块血红色血块。在振荡过程中，红细胞不断向中间靠拢，最终形成中间颜色较深，边缘颜色较浅的红细胞浑浊溶液。结果红细胞发生凝集红细胞未发生凝集说明结论土豆凝集素可使血液发生凝集，PBS缓冲液不能使血液发生凝集。图左为PBS缓冲液对照 图右为土豆凝集素 图一 图二 土豆凝集素（*4）图一中为在振荡了11min后，细胞凝集的现象，中间凝结成血块，周围叫澄清，边缘为干涸的红细胞凝结成的颗粒附着在玻片上。在低倍镜（*4）下观察，可以看到红细胞凝结成块状，周围液体近乎透明，说明红细胞发生了凝集。 图三 图四 PBS缓冲液（*4）图三中为在振荡了之后，红细胞并没有聚集成颗粒状，只是由于向心力左右而聚拢在一起呈透明凝胶状。在低倍镜（*4）下观察可见到均匀的透明液体，没有红细胞凝结而成的颗粒。六 实验分析： 实验所得结果可见，红细胞并没有如预期那般在中央凝结成大血块，而周围近乎透明，分析其原因可能为：（1） 在滴加土豆凝集素时，没有加入半滴，而是加入了一滴，反而导致了细胞凝集效果下降。（2） 在晃动过程中，速度过慢，且晃晃停停，导致红细胞凝结成的颗粒状在