小鼠衰老检测.doc

。小鼠全体实验记录1，全身拍照 衰老 治疗 正常组 正常组 衰老 治疗组2， 全身称重寿命1. 对平均寿命（mean lifespan）/最大寿命（maximum lifespan）的影响2、 衰老性心脏肥大1. 心室中部横截面染色，观察截面大小情况，年轻小鼠较小，老年小鼠肥大。2. 心脏重量/胫骨长度（mg/mm），表征肥大状况，数值越大，衰老程度越高。（选择原因：胫骨长度在小鼠发育成熟后不再有变化，可作为量化对比标准）3. 左心室（left ventricle，LVs）PAS染色（过碘酸雪夫染色，periodic acid Schiff stain），观察细胞横截面积大小。（心脏肥大是因为细胞个体变大还是细胞数量变多）4. 心肌细胞（cardiomyocyte，CM）横截面积（crosssectional area，CSA）测定。雌雄分组，每个动物选5个独立切片，结果根据平均值计算，测量方法：选取一定面积区域，数区域内细胞数量，计算出心肌细胞横截面积。5.小鼠心脏部位取材，RT-PCR测量心房利尿钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）,脑钠素（brain natriuretic peptide，BNP）,肌浆网钙ATP酶（sarcoplasmic reticulum calcium ATPase，SERCA-2）的表达量。6. Western测生长分化因子11 （growth differentiation factor 11，GDF11）在血浆的水平。老年小鼠少，年轻小鼠多。3、 认知功能1. Morris水迷宫实验（Morris water maze，MWM）。学习逆转阶段评估短期学习记忆能力、探索阶段评估长期记忆、对象偏好评估识别记忆、对新伙伴的认可能力。2. 海马裂解物中，免疫印迹定量突触蛋白I（synapsin I）、突触素（synaptophysin）、突触后密度蛋白（postsynaptic density protein 95，PSD95）。3. 测定整个海马的基因表达谱，2090个可变表达基因分层聚类。156个最上调和76个最下调的转录物进行基因本体富集分析的网络可视化。4. RT-PCR评估Klotho（KI）甲状腺素转运蛋白（transthyretin ，Ttr）、Bdnf5. 来自海马裂解物的免疫印迹定量分析，包括CREB/ERK/Akt的磷酸化和总cAMP，组蛋白 H3, H4 ，H2A。4 生殖能力1. 足月妊娠成功的比例/数量（雌性小鼠）2. 后代存活数量3. 卵巢部位切片，对EGFP表达免疫分析。5 骨质疏松1. 小鼠BMSCs中衰老标记物53BP1和c-H2AX的表达。表达量大表示干细胞衰老。2. 左图是小鼠胫骨三维（3D）图像，中间图像是X射线图像，右图像小鼠胫骨样本的3Dmicro-CT重建图像，计算骨体积分数BV/TV6 其他1. 衰老抑制剂加入后21天，测定SA-半乳糖苷酶活性，活性降低，表示抗衰老效果好2. 加入后21天，测定细胞增殖量（与对照组比较），细胞增殖量多，抗衰老效果好3. 降低ATM磷酸化水平，以及其下游目标p-CHK2, p-p53, 和p21。衰老相关的p16marker也在治疗后下降4. 流式细胞仪测定线粒体膜电位（与年轻小鼠对照）5. 氧消耗量（OCR）（与年轻小鼠对照）6. 细胞外酸化速率（ECAR）（与年轻小鼠对照）7. 糖酵解/氧化磷酸化ATP的生成量（与年轻小鼠对照）8. 对活性氧ROS监测，其中DHR123对羟基自由基、过氧化氢染色，MitoSOX对超氧阴离子染色9. 细胞核形态观察（与年轻小鼠对照）10. 肝、脑组织中单胺氧化酶MAO-B活性，活性越低越年轻。11. 全血谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性和心肌脂褐素含量，GSH-Px活性高年轻，心肌脂褐素含量低年轻。12. 皮肤中羟脯氨酸Hyp的含量，含量越高越年轻。窗体底端13.各组织、脏器（皮肤，心肝脾肺肾脑等）中脂质过氧化物MDA（丙二醛）的含量，含量低年轻，超氧化物歧化酶SOD活性，活性越高越年轻。参考文献：Loffredo F S, Steinhauser M L, Jay S M, et al. Growth Differentiation Factor 11 is a Circulating Factor that Reverses Age-Related Cardiac HypertrophyJ. Cell, 2013, 153(4):828-39.Bilkeigorzo A, Albayram O, Draffehn A, et al. A chronic low dose of 9-tetrahydrocannabinol (THC) restores cognitive function in old mice.J. Nature Medicine, 2017.Selesniemi K, Lee H J, Niikura T, et al. Young adult donor bone marrow infusions into female mice postpone age-related reproductive failure and improve offspring survival.J. Aging, 2009, 1(1):49.Shen J, Tsai Y T, Dimarco N M, et al. Transplantation of mesenchymal stem cells from young donors delays aging in miceJ. Scientific Reports, 2011, 1(6045):67.Kang H T, Park J T, Choi K, et al. Chemical screening identifies