叶绿素及蓝绿藻二合一在线监测仪验收方案.doc

产品名称：叶绿素在线监测仪型号：TETHYS400量程：0-400ug/L检验项目：（1）重复性（2）准确度（3）直线性（4）最低检出限标准样品：叶绿素a标准样品，蓝绿藻标准样品（推荐使用荧光藻蓝蛋白标准提取样品）；零点校正液：测试叶绿素a时推荐使用50%乙醇溶液作为零点校正液（也可使用重蒸馏水），测试蓝绿藻时使用重蒸馏水作为零点校正液。量程校正液：使用80%F.S标准溶液。试验条件：环境温度：在（535）之间，试验期间的温度变化在5以内。相对湿度：相对湿度在85%下。大气压：在（95106）kPa压力下，其变化幅度在5%以内。电源电压：（22022）VAC。电源频率：（500.5）Hz。 现场测试时，确保无外界强光直射仪器。一、仪器现场调试方案：1、实验准备 实验器具：1L棕色容量瓶，量筒，漏斗，1L试剂瓶，天平，洗瓶、药匙 试剂：叶绿素a标准样品、荧光藻蓝蛋白标准样品溶剂：95%乙醇溶液、去离子水（或者重蒸馏水），5%硫酸溶液50%乙醇溶液准备： 在1L试剂瓶中加入95%乙醇溶液500ml，在加入500ml去离子水，稀释至刻度、摇匀。2、标准样品的准备叶绿素a标准试剂推荐使用由“和光纯业株式会社”出品的，标准试剂在运输过程中做好低温贮藏和避光措施。蓝绿藻采用的是激发波长为590nm，发射波长为650nm左右的单一波长的荧光分光光度计的原理。 由于现行国家对水中蓝绿藻的测量没有任何标准，所以截止到本公司制定此企业标准为止，暂无用于测量水中蓝绿藻的标准物质。通过本公司实验测试后，使用藻蓝蛋白的荧光特性符合试验要求。藻蓝蛋白（C-PC）晶体是从螺旋藻中分离纯化的，为具强烈荧光的蓝色冻干粉末能发出强烈的荧光，具有很好的吸光性能和很高的量子产率，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围。藻蓝蛋白晶体在4可稳定保存一年。不能冷冻。根据郎伯-比尔定律：C = K * F式中： C 荧光物质浓度； K 物质荧光系数； F 荧光强度。K一般为常数，可见，荧光强度和荧光物质浓度呈正比，所以仪器测定的蓝绿藻浓度及与荧光强度成正比，因此校正仪器本身实际是校正仪器测定荧光物质荧光强度的过程。 3、标准溶液的配置 3.1 叶绿素a标准溶液的配置将冰冻存放的10mg叶绿素A标准物晶体用无水乙醇溶解并定量移至500mL棕色容量瓶中，用95%的乙醇溶液稀释刻度、捣匀。存放于-20的冰箱中。此储备液叶绿素a的浓度为20mg/L。（叶绿素a由“和光纯业株式会社”出品）。调试液的配制：（在对叶绿素a溶液进行稀释配置时乙醇溶液可根据实际情况适当增高） 空白溶液（用于仪表调零）50乙醇溶液或者用二次蒸馏水； 80ug/L的叶绿素a溶液：取上述浓度为20mg/L的溶液4.0mL，于1000mL棕色容量瓶中，用50乙醇溶液稀至刻度、摇匀。 200ug/L的叶绿素a溶液：取上述浓度为20mg/L的溶液10.0mL，于1000mL棕色容量瓶中，用50乙醇稀释至刻度、摇匀。 320ug/L的叶绿素a溶液：取上述浓度为20mg/L的溶液16.0mL于1000mL棕色容量瓶中，用50乙醇稀释至刻度、摇匀。 400ug/L的叶绿素a溶液：取上述浓度为20mg/L的溶液20.0mL于1000mL棕色容量瓶中，用50乙醇稀释至刻度、摇匀。 50ug/L的叶绿素a溶液：取上述浓度为20mg/L 的溶液0.25mL于1000mL棕色容量瓶中，用50乙醇稀释至刻度、摇匀。在深色的容量瓶中贮存高浓度的标准溶液。溶液应避光、低温、密封保存。稀释的标准溶液应现用现配。浓溶液储存在-20的密闭环境下有效期时间为半年。3.2 蓝绿藻标准溶液的配置将干燥存放的50mg荧光藻蓝蛋白标准物晶体用蒸馏水溶解并定量移至1000mL棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此时储备液的浓度为50mg/L。（荧光藻蓝蛋白由“美国sigma aldrich公司”出品）调试液的配制： 空白溶液（用于仪表调零）：蒸馏水5mg/L的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为50mg/L的溶液100mL于1000mL棕色试剂瓶中，加900mL蒸馏水稀释至刻度、摇匀。 10mg/L的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为50mg/L的溶液200mL于1000mL棕色试剂瓶中，加800mL蒸馏水稀释至刻度、摇匀。15mg/L的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为50mg/L的溶液300mL于1000mL棕色试剂瓶中，加700mL蒸馏水稀释至刻度、摇匀。20mg/L的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为50mg/L的溶液400mL于1000mL棕色试剂瓶中，加600mL蒸馏水稀释至刻度、摇匀。荧光藻蓝蛋白储备液和调试液应现用现配，配制在1000mL棕色试剂瓶中。 4、仪器调试 仪器出厂前已经过性能测试并合格，现场本公司售后调试工程师可按照以下方法进行仪器的二次调校： 4.1 叶绿素a测量通道的调校 1）首先通入5%的稀硫酸清洗仪器流通池，仪器清洗完毕后（如果清洗不干净可换用10%的稀硫酸溶液），通入二次蒸馏水对仪器进行调零。 2）调零稳定后，可以通入浓度为320ug/L叶绿素a标准样品溶液，进行手动测量，计算其测量值是否在仪器性能指标范围内，如果在范围内则无需在对仪器进行线性调校。3）对仪器进行多点调校。依次通入浓度为80ug/L、200 ug/L、320 ug/L、400ug/L的叶绿素a标准样品溶液进行手动测量，在仪器线性调校界面输入每种浓度的测量平均值，及完成仪器的线性调校（可以根据现场要求增加不同的浓度点）。4）仪器线性调校完毕后，通入不同浓度的标准溶液，进行线性验证。4.2 蓝绿藻测量通道的调校 1）首先通入5%的稀硫酸清洗仪器流通池，仪器清洗完毕后（如果清洗不干净可换用10%的稀硫酸溶液），通入二次蒸馏水对仪器进行调零。 2）调零稳定后，可以通入浓度为15mg/L藻蓝蛋白标准样品溶液，进行手动测量，计算其测量值是否在仪器性能指标范围内，如果在范围内则无需在对仪器进行线性调校。3）对仪器进行多点调校。依次通入浓度为5mg/L、10 mg/L、15mg/L、20mg/L的藻蓝蛋白标准样品溶液进行手动测量，在仪器线性调校界面输入每种浓度的测量平均值，及完成仪器的线性调校（可以根据现场要求增加不同的浓度点）。4）仪器线性调校完毕后，通入不同浓度的标准溶液，进行线性验证。当两个测量通道都验证合格并测量稳定后，即可对仪器进行性能测试试验。二、仪器性能测试1、叶绿素a测量性能测试考虑到叶绿素a溶液的不稳定性，推荐在仪器现场调试正常完毕后，立即用标准溶液对仪器进行性能试验。11 准确度（示值误差）单参数零点和量程校正后，分别用满量程80ug/L、320ug/L浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量的浓度平均值。求出每次平均值与对应标准液的浓度之差相对于标准溶液的百分率。12 直线性依次测量下面表1中的各质量浓度叶绿素a标准溶液。表1 叶绿素a标准溶液标准溶液编号1234标准溶液质量浓度（ug/L）80200320400分别对表1中4种质量浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量值的平均值。用最小二乘法对4种标准溶液的质量浓度和测量平均值进行处理，得到线性相关系数，即为测量线性的检定结果。13 重复性:： 测定零点校正液6次，将各次显示值的平均值作为零值。在相同的条件下，测定量程校正液 6 次，将各次测定值扣除零值后计算相对标准偏差。标准偏差sc： 式中：为第i次显示值（i=1、2、3 6），n=6； 再求出其相对标准偏差RSD（%）：1.4 最低检出限 选取质量浓度为50ug/L 叶绿素a标准溶液。对空白溶液与标准溶液进行连续交替11次测量。如果在测量中，有1次数据确认是由外界干扰或操作引起的粗大误差，应将该次数据剔除。由下式计算每次测量的荧光强度： Ci = Ci1 Ci0 (2)式中：Ci1 标准溶液的测试值； Ci0 空白溶液的测试值。测量值的平均值为： （3）式中：n 测量次数。检出极限指二倍于标准偏差读数的物质浓度。用符号DL来表示； （4）式中： 11次测量的平均值；c 标准溶液的质量浓度；s 单次测量的标准偏差。2、蓝绿藻测量性能测试21 准确度（示值误差）单参数零点和量程校正后，分别用满量程5mg/L、15ug/L浓度藻蓝蛋白工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量的浓度平均值。求出每次平均值与对应标准液的浓度之差相对于标准溶液的百分率。22 直线性依次测量下面表1中的各质量浓度藻蓝蛋白标准溶液。表2 藻蓝蛋白标准溶液标准溶液编号1234标准溶液质量浓度（mg/L）5101520分别对表2中4种质量浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量平均值。用最小二乘法对4种标准溶液的质量浓度和测量平均值进行处理，得到线行相关系数，即为测量线性的检定结果。23 重复性:： 测定零点校正液6次，将各次显示值的平均值作为零值。在相同的条件下，测定15mg/L的藻蓝蛋白标准样品溶液 6 次，将各次测定值扣除零值后计算相对标准偏差。标准偏差sc： 式中：为第i次显示值（i=1、2、3 6），n=6； 再求出其相对标准偏差RSD（%）：三、现场对比实验：由于叶绿素受外界环境因素影响大，所以在做现场水样对比试验时，务必按照下列方案实施。对比实验条件： 环境温度：在（535）之间，试验期间的温度变化在2以内。最好选择在一个固定时间段进行对比实验。电源电压：（22022）VAC；电源频率：（500.5）Hz。（电气环境稳定） 现场测试时，确保无外界强光直射仪器，对比实验时，确保在一个相对比较稳定的天气情况下进行。 对比实验方案：多取一些现场水，取出一部分作为现场水样，剩余水作为储备样品，并做好储备样品的遮光、恒温措施；将