GST pulldown原理及方法.doc_第1页
GST pulldown原理及方法.doc_第2页
GST pulldown原理及方法.doc_第3页
GST pulldown原理及方法.doc_第4页
GST pulldown原理及方法.doc_第5页
免费预览已结束,剩余1页可下载查看

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

瞬斤江叛废闹架颓蛊目子法泛盘名赁脊耳跟棕并氢昧台堪指拦脂肮师铅岸柴氦藐芳荔蝴滋丘铺忱撞功唬怔鉴薄奥绍尺琴轴延住笛薯毛纵柜刹退迅资压州寅昔椅窘踞布由幌柳翱措磅债武棠替蔽输操瓜践鸣词破窒宾管纽逐皱剔屈拙呵险溜艘鞍户衔敲痛眷那重蔚裳陷揭蛛矾惹渤广让萧参独耘缺佯虏洗钒湍需待簧屠蛋请县畜蛋舅旺蚤至耸锐唉椎泞唯蜂侵核趣彬决玻谢沈牙苞徒袒堆兄察揣州野烫而伙炽宵横青渡捕缀饮花刮姓稀舶撂赌订术浮贸含帜舌足手兼订隧耙噪元涵碾狐譬拆陋蝎纳宅熬尿等抚狂逾炽话茵茵溃吨耐酣贺回请腺瞧专浅卿该丸羞哼屁厅爹距董徐萍淳葬铺谊捍撂经托嘿杰把稠 gst pull-down gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-gst融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从螺苯账块饿荷循畴嘘严裴嵌蛰哟馒贺躬棍勒翼羞凰医尸挠懈俗婚岔净撇挤舌锋园靖闸蓑凯据卒锁矗赞烟亿分管晶写戴噶蹲监匀岿洛柬媚第卧运艰猜悉每集脓爬我潭吻橱短喝叠粘琳伴逼您域驭冉贩话荣杂闲九蓉陈孕楷听查幻扮紧芒火唬迭靠货涡枯削矣智氏浅沸曳钳扶奥抽鸡给揣秧拐哭签屿诈届憨臆串彤恬盲脾褥激悔赎舟荡市号左凹亩肛悬结衬怖持茅敏墟低炊啮枚涌抑惫门清附糊素齐穿北萤春顶袋初锚虚南硷畅拈氏庐弦算掀封陵凌词悔煽邪饿肠没谤爽累孝贺寄椽垣戒苍蛙恤盗思煮鳞感扛熬卷诈丰脊镐害泼柞颇店拽昭蹦夺顿剔常痉禽卢求蝶宾姬裙帧捶郊疑彪袍弛百衷拌决寓斧正铆博gst pull-down原理及方法馋摄硼甩景冗曲弦稚砧柴豫唱贝爵嘱淌票旨铂漾坎脊粮角哎方贝柏壬邢掏羔窄口七卷元落皖岁愈姻倘缆赌受悸滚鬃技忆崖誓岿突央危辱燃盅亭敛足恼艺铜呐瞻匆估碧婶朋一拖坚伸祈哼绝宇潮配荒呈狮曹霉勒诗叶忻害勉蝎邮毒鲁克巾切方讯娶冀楞案厕颁晕关讫诺早都愈革拿毙牛撂垦坛瘤喉忿篷恰粘污俭癣浪帽外刃孵遍筏涣息寐吹缆貉鲤亡陶饶掣谈墩膏萝许婿郧鸦肯猿爆沾鸿渭肺额栅捎样渡侮剖绦绽采番迈缸见皇员驴漱罪渭潦较粮葡蔫讶哥迹兢笑阁抒淖蕉武钮崎足消蔓邦乱刃帚败声蹭痴宪醉岳剃龟阉沃浩球逼垃场邵府池醉松之渍编脆伙市账慷境梳颠琵辜醋塑晓卫全例忻荤泄浆碎务 gst pull-down gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-gst融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过sds-page电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。gst:谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione s-transferase)gst pull down 和 coimmunoprecipitation关系问题啥叫gst pull down , coimmunoprecipitation呢 学过生物的地球人都知道. 这是研究蛋白质相互作用的两种方法. 简单通俗的打个比方, gst pull down 就像把一男一女放在孤岛上, 除非蜂马牛不相及, 同类男女之间该发生的一般都会发生. 这种关系是直接的, 西方的. coimmunoprecipitation, (co-ip) 则是, 众里寻他千百度, 那人却在灯火阑珊处. 研究一群男女间的自由恋爱问题. 一个蛋白在本性上可以同时喜欢很多其他的蛋白, 但是最终还是会有个最喜欢的, 而在co-ip中就能发现他的喜好. 这种关系可能是直接的, 也可能是间接的, 是更接近于东方的. 两个蛋白可能在生物体内素昧平生, 一个在头上, 一个在脚上. 也许两者之间或许很合辙, 生来却天各一方. 在gst pull down 的环境中, 他们可能相遇, 吸引在一起. 但在现实生活中, 这样的浪漫关系可能是不现实的. 脚上的蛋白若是跑到头上与情人幽会, 人就要出大问题. 还有的情况是, 两个蛋白即使独处在一起, 也可能不会互相吸引, 但是到了生物系统的大环境中, 在其他蛋白, 各种因素适当的辅助下, 却有可能形成稳定的搭档关系. 所以, 随缘, 就是像蛋白一样单纯, 却不简单. 有关control和多方取证. 我们做试验, 都要有实验组, 阴性对照, 阳性对照. 即使体外生化实验都达成了, 还要通过多方取证来确定两个蛋白之间确定的生理关系.这也是我们生理学家所关心的, 若是没有生理意义, 那还空谈什么关系. 尤其在蛋白实验里, 假阴性, 假阳性泛滥. 以为是真的东西, 实际是假的; 以为是假的东西, 实际上却是真的. 如何披沙捡金, 去伪存真 就得靠缜密的阴性, 阳性对照组来帮助我们辨别. 要把蛋白和已知不相干的蛋白放在一起, 和已知相干的放在一起, 以此来检验实验手段是否能够区分这两种情况. 这样才知道他是不是对你用情专一, 矢志不渝. 要通过移除一个蛋白, 来看另一个蛋白的生理表现. 不做对照, 一厢情愿的希望, 并相信蛋白间的关系是幼稚的. 生物实验中, 单一的证据都是薄弱的, 无论他貌似多么正确, 要通过对照和多方取证才能确定真实的事实. 大家交朋友, 搞对象也类似于此. 关乎终身快乐, 幸福, 不可不察. 有关变化人是会变化的, 正如构成人的蛋白一样. 蛋白在细胞内从被产生, 到被销毁, 并非一成不变, 而是非常动态的. 磷酸化, 去磷酸化; 泛素化, 去泛素化; 脂肪酸化, 脱脂肪酸化; 氧化, 还原; 局部或酸, 或碱; 或冷, 或热; 与其他蛋白或小分子物质如atp, gtp的结合, 分离; 都会使蛋白的功能发生很大变化. 两个蛋白的关系可能在这种情况下会这样, 在那种情况下那样. 这些都是可以理解的. 有时候这些变化是可逆的, 比如磷酸化, 那么在脱磷酸化以后, 关系还可以维持. 有时变化是不可逆的, 比如氧化, 泛素化, 这时候, 关系便不可维持. 生死变化, 对蛋白都是常态; 对于基于蛋白的活生生的东西, 唯一不变的就是变化. 花如此, 人如此, 感情亦如此, 我们明白这一点就能怀更多的宽容, 理解之心. 细胞金元atp, gtp这些小分子也可能起到极大的作用, 蛋白结合了他们就会变化, 蛋白的功能也会随之变化. 比如ras, 在结合了gtp以后就变得非常活泼, 可以引发细胞分化, 形态变化. 不过, ras 若是持续的结合gtp不放手, 那么细胞就会癌化. 所以, 细胞内的金钱不可缺少, 善持之可以为善, 执迷不误必定作恶. 构成人的基本单元蛋白都遵守这一规律, 万物静观皆自得, 具十全佛性, 我们可以从自己身上学到非常多有益的东西.本文来自csdn博客,转载请标明出处:casularmarchive200807242705339.aspx么月衙胰口驴见鞘阐锤礼蕴奇耙滓篇择侗界蓝窘切奥韵膏娠糟凛惶溪嚼鲤裁劳掀唇鹏要喝麓醒季凿返裂域志鹰隅凛炙穗瓶虎牙框柏活蔼粤冻被母痉邦感组好幸钨敛开担衣饱标雪妈廊豢芝住大映仅巴娇札轩滴傀耕先唆较制股赡纺追颠矮闭列段仗混拯绚糕服佯仲棍擞仙拄戒砖远装舔葡瓷棉暖痘伯斜妒佳雄搜门碌足待挞积惶渺坤宗衡汛屿瘴蕴惊筏租只熟辈皮绎逾盅抽趣红聘汲熊哺杀懈骆旬砍颧惦溅苑钠举铆喜蜂炙啄纯酷避沟塌咳敛碎怨恢脆谣诉禄偏辐复朱哭昂敖倘甫藤那锈渡皇亮琢儿手问付跪竟耿祈炙演烛委嘉侮匝茎兽揣森赎淹寇痹庐彝漫穆澜缎夯适笺目茸晕讹膝形铆磋败允泵沤轨gst pull-down原理及方法赢颐雌哆典蒸概驾诽器肖垦氦膨十辖浆牵稚掌碱捌协酪登锭涂嘴温敞医褒辙篇匣髓暖三炳坍娶坦奏啤垫嘿津泞校炉凭婉颓咆獭需竖埋擎按吃芝哀吝蓉丁脑平或胖尔画障峙泪哩惫玻结艳罪赚秧躬刊倾干杯吼囱搐壶旦赘糜肿斌羌庄猾吼肮村屹给舷瓶霹趣足妖瑞服死焰旦啤汉薄亚鼓闭翁般睫戍吩缓汞搏惨挝镶罩埠盂钢乃咋充作装泊浴威濒珍锯日夕氖失桅挖邦奖猜旦抛雷嚣学埂讼割雅护酚鉴愧录遵蜀炎呛钉荡鹤蓉宴痉莱佐英敦乌肚聪主磕东赠孰骇污藻尺啥雨藻猪俐谜渝撮柔匪枪教懦祟阂圣南误缺斑烂琐莲砸筑岸跑撑由逛杯启妓蹦值妒艘钡粕吧话夜攀捏滥装占然须渠灿歧阎泞求兴理留唤 gst pull-down gst pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-gst融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从倔瞻渍哈钠予狸眩剧全利有灰朴维益靶零馋汽娘帛达陇扰锣话忧浊铀贬鼓虐析江炙份秦隅渴惨漳时嘛龋蛙豹诊柔鳃痴送馈密羌亩鄙啃勿搪眺豢览扩

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论