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文档简介

邻单胞菌分离、鉴定作业指导书 邻单胞菌分离、鉴定作业指导书 一、操作步骤 1、分离培养以无菌操作取检样25g(mL)，加225mL碱性蛋白胨水，于37培养16h18h，用均质器打碎或用乳钵磨碎，取增菌液上层培养物划线接种麦康凯、SS或改良去氧胆酸钠枸橼酸钠（DC）琼脂平板，置37培养过夜。 2、鉴定类志贺邻单胞菌在选择性琼脂平板上的菌落特征，在麦康凯上形成圆形，无色半透明的中等大小的光滑型菌落；在SS平板上，菌落较小，不产生硫化氢的菌落；在DC平板上，形成2mm大小，圆形、光滑、湿润、较扁平的蓝色菌落，菌落周围颜色较浅，中心颜色较深。 挑取上述可疑菌落，接种三糖铁斜面和肌醇各一支，37、1824h观察结果。 如三糖铁培养基反应可疑者（底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜面不变乳糖蔗糖不分解，不产生硫化氢）且发酵肌醇产酸，则进行氧化酶试验，如氧化酶阳性，涂片革兰氏染色为阴性杆菌，即初筛试验为阳性，再作进一步生化试验确定。 3、生化试验初筛试验为阳性的菌株，经纯培养后进行下列生化试验。 若葡萄糖（+）、蔗糖（）、阿拉伯糖（）、靛基质（+）、硝酸盐还原（+）、赖氨酸脱羧酶（+）、鸟氨酸脱羧酶（+）、精氨酸双水解酶（+）、苯丙氨酸脱羧酶（）、枸橼酸盐（）、明胶液化（）、尿素（）、动力（+），可确定为类志贺邻单胞菌。 4、血清分型经生化鉴定符合本菌后，取纯培养物直接与10个多价血清进行玻片凝集试验，凝集阳性者，再用所属的单价血清进行玻片凝集定型。 如与O多价不凝集时，可与单价O17再做玻片凝集，仍不凝集可视为未定型的菌株。 二、生物安全注意事项 1、接种样品时，应在进无菌间前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净，接种细菌时必须穿工作服，戴工作帽。 2、试验所用玻璃器皿、吸管、试管、等必须是完全灭菌的，金属用具应用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 3、 4、稀释液和用于倾注平皿的培养基，每批都要有空白对照。 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边。 5、接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 6、接种环或针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环或针
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