四螨嗪-联苯肼酯液相色谱.doc

四螨嗪联苯肼酯30%悬浮剂高效液相色谱分析李静，张晓婉，段元红，姜士聚（山东省农药检定所，山东 济南 250100）Analysis ofClofentezineandBifenazate 30% SC by HPLCLi Jing，Zhang Xiaowan，Duan Yuanhong，Jiang Shiju(Institute for the Control of Agrichemicals of Shandong Province，Shandong Jinan 250100，China)Abstract：A method for separation and quantitative analysis of Clofentezine and Bifenazate by HPLC，with methanol-water（80:20 V/V）as mobile phase，HypersilC18 2504.6(i.d)mm 10m column，diode array detector（DAD）at 270nm wavelength was described. The result showed thatthe liner correlation coefficientswere 0.9999 and 0.9998，the standard deviationswere0.01 and 0.02，the variation coeffi-cients were 0.08% and 0.15% and the average recoverieswere 99.8% and 99.8%.Key words：clofentezine；bifenazate；HPLC；analysis摘 要：本文采用高效液相色谱法，以甲醇+水=80+20（V+V）为流动相，使用Hypersil C18 2504.6(i.d)mm 10m为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器，在270nm波长下对四螨嗪联苯肼酯30%悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明分析方法的线性相关系数分别为0.9999、0.9998；标准偏差分别为0.01、0.02；变异系数分别为0.08%、0.15%；平均回收率分别为99.8%、99.8%。关键词：四螨嗪；联苯肼酯；高效液相色谱；分析1 前言四螨嗪是一种新型高效杀螨剂,对叶螨的卵和幼、若螨触杀效果好,不能触杀成螨,但成螨触药后产卵量减少,卵的孵化也受到抑制；联苯肼酯是一种新型选择性叶面用喷雾药剂，其对螨的各个生活阶段有效,且持效期长。二者均为农业部2014年版种植业生产使用低毒低残留农药主要品种名录中推广使用的产品，发展前景较好，目前已有不少企业有两种成分混剂的登记，但都是分别进行测定有效成分含量。为了提高检测速度，拓宽分析方法，我们经过严格地分析条件筛选，采用高效液相色谱法对四螨嗪与联苯肼酯混剂同时进行分离测定，方法简便易行，适于生产质量控制。2 试验部分2.1试剂和溶液 甲醇：HPLC级；水：新蒸二次蒸馏水；四螨嗪标准品：已知质量分数98.0%；联苯肼酯标准品：已知质量分数98.0%；30%四螨嗪联苯肼酯悬浮剂（由某企业提供）。2.2仪器 高效液相色谱仪：岛津20AT，具二极管阵列检测器；色谱工作站；微量进样器：100L；色谱柱：250mm4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装Hypersil C18、10m填充物。2.3高效液相色谱操作条件 流动相：甲醇+水=80+20（V+V），经滤膜过滤，并进行脱气；流量：1.0mL/min；柱温：35；检测波长：270nm；进样量：5L；保留时间：联苯肼酯4.0min,四螨嗪5.6 min；以上操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。2.4测定步骤2.4.1标样溶液的制备 分别称取四螨嗪、联苯肼酯标准品0.02g(精确至0.0002g)，置于同一50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声振荡10min冷却至室温后，再用甲醇定容至刻度，摇匀，备用。2.4.2试样溶液的制备 称取试样0.13g（精确至0.0002g），置于50mL容量瓶中，先加入少量水溶解，再加入甲醇稀释，超声振荡10min冷却至室温后，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45m滤膜过滤，备用。2.4.3测定 在上述条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针响应值的重复性，待相邻两针的相对响应值变化1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。 图 1四螨嗪和联苯肼酯混剂液相色谱图 2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中的四螨嗪和联苯肼酯峰面积，按下式计算。 式中： A1标样溶液中四螨嗪（联苯肼酯）的峰面积； A2试样溶液中四螨嗪（联苯肼酯）的峰面积； m1标样的质量，g； m2试样的质量，g； P标样中四螨嗪（联苯肼酯）的质量分数，%。3 结果与讨论3.1色谱条件的选择3.1.1检测波长的选择 利用二极管阵列检测器对四螨嗪和联苯肼酯分别进行扫描的光谱图（图2），从图中可以看出四螨嗪在194nm,联苯肼酯在200nm处有最大吸收，考虑到分离好、且避免溶剂及杂质干扰和峰面积、峰高的比例，故选用270nm作为检测波长。图 2 四螨嗪和联苯肼酯混剂光谱图 3.1.2色谱柱和流动相的选择 分离柱采用常用的C18柱，从分离时间和效果考虑，选定250mm4.6mm(id) C18不锈钢柱。分别选用甲醇和水配成不同的流动相，反复筛选进样，得到不同的分离效果图。经过多种分离情况对比，选定流动相为甲醇+水80+20(V+V),流速为1.0mL/min时，有效成分与杂质能够互不干扰分离，峰形对称，基线平稳，保留时间适宜。 3.2方法的线性相关性 分别移取2.4.1中1、3、5、7 、9L标样母液于10L容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，各自配成5个不同浓度的标准溶液，在选定的操作条件下进样，分别得出5个相应的峰面积。当四螨嗪标准溶液的浓度分别是0.05、0.14、0.23、0.32、0.41 (mg/mL)时，峰面积分别为1165396、3411452、5591058、7835492、9941430；当联苯肼酯标准溶液的浓度分别是0.06、0.17、0.29、0.40、0.51 (mg/mL)时，峰面积分别为621036、1813205、3018677、4204158、5289525。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图3)，得出四螨嗪线性回归方程为y = 2.4E+7x -27151,线性相关系数为0.9999，联苯肼酯线性回归方程为y = 1.0E+7x +21127,线性相关系数为0.9998。图 3 四螨嗪与联苯肼酯线性关系图3.3 方法的精密度测定 按上述处理方法，同样的仪器条件，取同一样品，进行5次平行测定，计算标准偏差和变异系数。结果统计四螨嗪和联苯肼酯的标准偏差分变为0.01、0.02，变异系数分别为0.08%、0.15%（表1）.表明该分析方法精密度良好。表1四螨嗪联苯肼酯30%悬浮剂精密度测定结果表编号12345平均值(%)标准偏差变异系数(%)四螨嗪（%）15.1315.1515.1315.1215.1415.130.010.08联苯肼酯（%）15.0215.0515.0115.0014.9915.010.020.153.4方法的准确度 称取已知含量的四螨嗪联苯肼酯30%悬浮剂样品和已知量标准品配成5个已知样品，按分析条件和操作方法进行定量回收率测定。测得四螨嗪和联苯肼酯的平均回收率分别为99.8%和99.8%（表2）。 表2 回收率测定数据表 组分序号样品中有效成分质量（mg）加入标准品质量（mg）理论质量（mg）实测质量（mg）回收率（%）平均回收率（%）四螨嗪（15.13%）115.1510.0525.2025.1199.6499.8219.9114.8634.7734.79100.06325.3720.0245.3945.3299.85423.5425.2048.7448.6799.86521.7829.9151.6951.5699.75联苯肼酯（15.01%）115.0310.1225.1525.1199.8499.8219.7514.9334.6834.5599.63325.1720.5445.7145.6699.89423.3424.8548.1948.0899.77521.6130.4752.0