黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法.doc

黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb一、样品的准备/萃取 1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v）， 振荡或均质3分钟。3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。例如，将50L待检滤液加入50L分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。二、检测步骤1 将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。2 将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。3 按照240 L/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。使用8道移液枪移取100L酶联偶合物至每个稀释孔中。4 使用单道移液枪，移取50L标准品和样品至已装有100L酶联偶合物的稀释孔中。用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。注意确保最后将吸头中的液体排空。5 使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100L至相应的有抗体包被的微孔中。室温下放置15分钟。注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。6 将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。如此方式反复冲洗5次。注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。7 冲洗完毕后，将几张吸水纸巾放置在平整的桌面上，使微孔板倒置扣击纸面，以尽可能地将残留的水分排出。用干布或纸巾擦干微孔板底反面的水珠。8 按照120 L /孔或1 mL/条的体积计算所需的底物用量。从蓝色瓶盖的瓶内量取所需用量的底物至一个底物试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪移取100L底物至每个微孔中，室温下放置5分钟。9 按照120 L/孔或1 mL/条的体积计算所需的终止液用量。从红色瓶盖的瓶中量取所需用量的终止液至一个终止液试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪依序（顺序与加入底物的顺序相同）向每个微孔中加入100L终止液终止反应。颜色应由蓝变黄。10用酶标仪在450nm滤镜及示差滤镜630nm下读取结果，记录每个微孔的吸光度OD值。 注意在读取数据前，微孔中应没有气泡，否则将影响分析结果。三、试剂盒提供材料96孔（12 X 8）抗体包被的微孔板（铝箔袋封装） 96孔（12 X 8）绿色稀释微孔板（标记颜色） 5瓶黄曲霉毒素标准品，各1.5mL (0, 2, 5, 20 & 50ppb)1瓶25mL 黄曲霉毒素酶联偶合物（绿色瓶盖） 1瓶15mL 底物溶液（蓝色瓶盖） 1瓶15mL 反应终止液（红色瓶盖）1瓶15mL