HBV检测的应对与挑战课件.ppt

HBV检测 挑战及应对 1 2020 3 21 亚洲是乙肝病毒肆虐的重灾区 全球2 3以上的慢性乙肝患者生活在亚洲 而根据1992年全国乙肝血清流行病学调查的结果 中国的乙肝病毒携带者近1 3亿人 平均每10个人中有一个 感染率更高达57 6 2 2020 3 21 我国的HBV人群感染率 HBsAg阳性率7 18 中华人民共和国卫生部 全国人群乙肝血清流行病学调查结果 R 北京 卫生部 2008 远高于美国 0 3 CentersforDiseaseControlandPrevention NationalHealthandNutritionExaminationSurvey 2008 citedOctober20 2008 Availableat http www cdc gov nchs about major nhanes nhanes2005 2006 lab05 06 htm 1992 1994年调查HBsAg阳性率为9 7 2000年调查HBsAg阳性率为9 1 2007年调查HBsAg阳性率为7 18 3 2020 3 21 表面抗原 HBsAg 是怎样被发现的 1963年Blumberq在两名多次接受输血治疗的病人血清中 发现一种异常的抗体 它能与一名澳大利亚土著人的血清起沉淀反应 1967年才明确这种抗原与乙型肝炎 简称乙肝 有关 1970年在电子显微镜下观察到HBV的形态 1986年将其列入嗜肝DNA病毒科 BaruchBlumberg因发现HBsAg荣获1976年诺贝尔医学奖 1976 是HBV感染的标志被称为 澳大利亚抗原 即人们一直说的 澳抗 HBsAg的历史始于1965年 4 2020 3 21 HBsAg HBV感染后绝大多数感染者外周血中可出现HBsAg 含量在5ng 600 g ml之间 最低含量为0 2ng ml以下 高者可达2000 g ml以上HBV的前S S基因编码HBsAg 构成病毒外膜 根据所带亚型决定簇的不同分为adw adr ayw和ayr 我国绝大多数地区以adr为主 adw次之HBsAg不仅存在于血液中 而且还存在于许多体液和分泌物中 如唾液 尿液 乳汁 精液等 HBV的传染性很强 据报道 接种0 00004ml含病毒的血液足以使人发生感染 输血或注射是重要的传染途径 也可口感染 外科和口腔手术 针剌 使用公用剃刀 牙刷等物品 皮肤微小操作污染含少量病毒的血液 均可成为传染源 5 2020 3 21 HBV感染后血液中指标的出现 6 2020 3 21 YimHJ LokASF Hepatology 2006 43 S173 S181 HBV感染标志 认识和改变对HBV感染控制的历史 7 2020 3 21 中国乙肝控制策略 新生儿乙肝疫苗计划免疫 1992 阻断母婴传播 HBIg HBV疫苗 血制品以及其它HBsAg筛查 20年 相关从业人员健康体检慢性乙肝患者的抗病毒治疗预防 减缓肝硬化进程预防 减缓肝癌进程 8 2020 3 21 检测的灵敏度检测的特异性检测的精密度 尤其是cutoff处的精密度表现 乙肝血清学标记物检测面临的挑战 9 2020 3 21 HBsAg测定中可能存在的挑战 假阴性 HBsAg含量低于所用方法的测定下限之下 如感染的 窗口期 急性期后或恢复期 自限性感染末期的携带者等编码HBsAg的HBVS基因的突变HCV HDV重叠感染对HBV复制和 或HBsAg的表达的抑制作用测定方法所用抗体对HBV不同基因型检测敏感性的不同 10 2020 3 21 低浓度HBsAg的准确检测对于临床确诊和流行病学监控具有重要意义 血清HBsAg是诊断HBV感染的直接证据所谓 HBsAg阴性 的HBV感染者中 有相当一部分为血清HBsAg呈低水平而被漏检的假阴性对于输血安全 院感控制具有重要意义对于流行病学 病原学研究具有重要意义 11 2020 3 21 8089例非肝炎病区住院患者血清共检出HBsAg阳性816例 10 09 HBsAg浓度在5ng mL以下的有189例 占总数的2 34 占HBsAg阳性人群的23 16 1ng mL以下的有84例 44 40 1 2ng mL的有33例 17 5 2 5ng mL的有72例 38 10 低浓度HBsAg不容忽视 12 2020 3 21 1ng mL以下者 占总数的1 04 占HBsAg阳性人群的10 3 陈瑜等 中华检验医学杂志 2001 第3期楼滨等 中华临床感染病杂志 2009 第3期 0 5ng mL以下者占HBsAg阳性人群的约5 低浓度HBsAg不容忽视 13 2020 3 21 JMedVirol79 S59 S64 2007 ICBS对于全球不同HBsAg的灵敏度的评估ElecsysHBsAg的灵敏度在0 023IU ml 14 2020 3 21 Scheiblauer Hetal VoxSang 2010 98 403 414 全球70种HBsAg的灵敏度表现从0 021IU ml到5IU ml 相差显著 15 2020 3 21 不同的分析灵敏度带来的相应的临床灵敏度的差异巨大 Scheiblauer Hetal VoxSang 2010 98 403 414 16 2020 3 21 突变原因 自发突变 HBV聚合酶链反应的高出错率 选择性压力下的突变治疗抑制 拉米夫定 疫苗接种 高效价免疫球蛋白的应用疫苗的广泛应用 促使HBV发生变异的免疫压力逐渐增大 变异的机会增加 突变的重要原因 17 2020 3 21 S基因的突变的发现 1988年意大利研究2 0 的接种疫苗的人会感染HBV 确认是感染突变病毒株这些患者的血清学表现为表面抗原和表面抗体同时阳性其中最重要的突变是G145R 这个突变可以保持非常高的复制性其中发现的免疫接种的婴儿被感染多是由于这个突变造成的家庭间的水平传播 根据数学模型计算 100年后这个世界上就不会存在现在的HBV了 18 2020 3 21 最常见的HBsAg突变位点 19 2020 3 21 目前的商品试剂盒对HBsAg突变株的测定能力 可归为三类 突变HBsAg和野生型均可检出 不能检出突变HBsAg 与野生型抗原相比 突变HBsAg的检出能力明显降低 使用多克隆抗体的商品试剂 大多数可归为第一和第三类 20 2020 3 21 S S 122 124 138 147 HBsAg a 表位突变 HBsAg野生株 HBsAg突变株 year 选择压力 I Cheminetal JClinVirol2005 Diagnosis 21 2020 3 21 HYHsuetal Gut 2004 HBsAg的突变率 22 2020 3 21 99 121 124 107 137 138 139 147 149 G D E D 164 R E 145 144 F Y 158 s s s s s s s s M I 195 S W M I 196 198 210 Loop1of a determinant Loop2of a determinant Carman W JViralHepatitis19974 11 20 modified 疫苗逃逸突变株 T126ST131NM133LK141ED144EG145R 126 141 131 133 诊断逃逸突变株 P120T A QD144AT131KG145R 抗病毒耐药突变株I195MW196SM198I 120 23 2020 3 21 对于ELISA检测 变异株的检出能力面临挑战 24 2020 3 21 在变异株检测能力上考验试剂的性能 JMedVirol79 S59 S64 2007 25 2020 3 21 变异株的检出能力与试剂的设计模式有关 检测模式假阴性风险 捕捉抗体 信号抗体 单克隆 单克隆单克隆 多克隆双单克隆 多克隆 26 2020 3 21 ElecsysHBsAgII通过使用多克隆抗体和多种单克隆抗体家心法来提高变异株的检出能力 27 2020 3 21 HBVS基因变异所致HBsAg假阴性的最大的问题 医学安全性尤其是逃逸突变株流行较广的地区 在HBV高流行区域 突变株的流行率也高导致疫苗免疫的失败要在进行人群HBV分子流行病学的基础上 研制针对主要流行HBsAg变异株的乙肝疫苗 保证免疫的有效性 临床检测中 两对半 异常模式的出现 28 2020 3 21 准确检测对临床至关重要 2010年版慢性乙型肝炎防治指南中明确指出 对于因其他疾病而接受化疗 免疫抑制剂治疗的患者 应常规筛查HBsAg 若为阳性 即使HBVDNA阴性和ALT正常 也应在治疗前1周开始服用拉米夫定或其他核苷 酸 类似物 对HBsAg阴性 抗HBc阳性患者 在给予长期或大剂量免疫抑制剂或细胞毒药物 特别是针对B或T淋巴细胞单克隆抗体 治疗时 应密切监测HBVDNA和HBsAg 若出现阳转则应及时加用抗病毒治疗 29 2020 3 21 真的安全吗 挑战 30 2020 3 21 疫苗接种完成后一个月抗体浓度达到高峰可以用于接种后监测 31 2020 3 21 表面抗体 anti HBs 监控具有重要意义 10被视为阳性 但是 100才具备保护意义 32 2020 3 21 为什么需要HBsAg定量检测 HBsAg是监控慢性乙型肝炎治疗的指标 对于HBeAg阳性和HBeAg阴性的患者 理想的治疗终点是实现HBsAg的消失 伴随或者不伴随Anti HBs的出现 EASLClinicalPracticeGuidelines ManagementofchronichepatitisB JournalofHepatology50 2009 HBVDNA 病毒学标志 HBsAg 免疫学应答标志 33 2020 3 21 HBsAgQuant是监控治疗和判断预后有效工具 Week 0 24 48 BrunettoMR EASL AASLD2008 InternationalRocheInfectiousDiseasesSymposium2009 12 Follow up随访 Pegasystreatment治疗监控 Year 1 2 3 HBsAgQuant HBsAgQuant HBsAgIU ml HBsAgQuant HBsAgQuant HBsAgQuant HBsAgQuant HBsAgQuant 34 2020 3 21 在治疗早期HBsAgQuant比HBVDNA有更好的预示价值 35 2020 3 21 HBsAg定量值提示不同治疗转归HBsAg的浓度和HBeAg的血清转换呈相关 PiratvisuthT LauGKK MarcellinP BrunettoMR 2010 20thconferenceoftheAPASL Beijing China 36 2020 3 21 ElecsysHBsAgII的线性范围更广泛 Elecsys线性范围0 05 52 000IU mL Boninoetal APASL2011 PEGASYSPhase3studydata