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水产生物基础实验实验一 上皮组织一、目的要求：1、通过观察各种类型的上皮组织的结构，掌握上皮组织的共同特点。2、了解各种类型上皮组织的结构与机能的关系。3、了解上皮组织细胞之间的联系二、实验内容及方法步骤：（一）被覆上皮1、单层上皮组织：（1）单层扁平上皮蛙肠系膜镀银装片低倍镜观察，可见细胞呈多边形，彼此紧密相接，细胞之间有黑色或黑棕色的波纹线，这是被银染色的细胞间质，细胞中可见染淡黄色的椭圆形的细胞核。（2）单层立方上皮肾髓质切片，H.E染色低倍镜观察，可见到许多含有胶体的滤泡。换高倍镜观察滤泡壁多数都是由单层立方上皮构成，细胞高度与宽度相等，呈立方形，核圆形，位于中央。（3）单层柱状上皮胆囊切片，H.E染色低倍镜观察，可见胆囊壁的一侧有大小不等的突起，突起的表面衬有单层柱状上皮。将上皮移至视野的中央，转换高倍镜，可见细胞呈柱状，细胞排列成单层，细胞核呈椭圆形，位于细胞的基部。（4）假复层纤毛柱状上皮气管横切片，H.E染色低倍镜观察气管内表面上皮，移至视野中央，转换高倍镜观察，可见细胞排列紧密，有一游离面和一基底面，胞核椭圆形，偏于基底面，分布于不同的水平面上，似乎细胞排列为23层，但每一个细胞都和基膜相连，故实为单层。仔细观察细胞的形态，其中主要为高柱状的细胞，其游离面有纤毛，另一端附着于基膜上，胞核位置较高。其次是梭形和锥形的细胞，均附着于基底面上，无游离面，胞核位置较低。2、复层上皮（1）复层扁平上皮食管横切，H.E染色低倍镜观察，可见管壁内表面衬有复层扁平上皮。转换高倍镜观察，可见表层细胞较厚，排离紧密，为扁平形，胞质染成较深的红色，胞核也扁，呈深紫色。中层细胞大，多为椭圆形，胞核为圆形或椭圆形，细胞排列较疏松。深层细胞为矮柱状，排列较紧密，细胞界限不甚清楚，与基底膜紧密相连。（2）变移上皮膀胱上皮，H.E 染色显微镜观察，可见膀胱壁内表面为变移上皮。上皮由数层排列紧密的细胞组成，有游离面和基底面，基底面与其他组织相连。细胞的形态和层数因器官机能状态而异。观察收缩状态的膀胱上皮，上皮细胞层数较多，细胞变高，表层细胞呈倒置的梨形，核大呈圆形，深层细胞为不规则的多角形，基部为低柱状细胞，当观察舒张状态的膀胱切片时，可见细胞层数较少，表层细胞较扁，深层细胞为不规则的立方形。（二）腺上皮小肠切片，H.E染色低倍镜观察，可见小肠内表面为单层柱状上皮。柱状上皮凹陷入肠壁，形成小肠腺，即单管状腺，管壁上皮细胞具分泌功能，即为腺上皮。转换高倍镜观察小肠内表面上皮，可见在柱状上皮细胞之间，夹有一些顶部宽大，下部狭细，呈杯状的细胞，此细胞被称为杯状细胞，此即为单细胞腺。三、思考题：1、上皮组织可分为哪几类？2、上皮组织有何一般特性？3、腺上皮与被覆上皮有何异同。四、绘图：1、单层扁平上皮结构2、单层柱状上皮结构实验二 结缔组织一、目的要求：1、掌握结缔组织的结构特点。2、认识各种结缔组织的主要特点。二、实验内容及方法步骤：1、间充质鸡胚标本，H.E染色可见有多突起的星状细胞，细胞突起互相连接成网，细胞分界不清，胞核较大，染色较浅，核仁明显。胞质少，呈嗜碱性。2、疏松结缔组织经过活体注射染料的小家鼠的皮下疏松结地组织铺片，H.E染色低倍镜观察选择组织较薄、纤维分布均匀，细胞不重叠，轮廓较清晰的部分，转换高倍镜观察，根据细胞和核的形态特征、染色反应、胞质内的颗粒等区分为以下几种细胞：（1）成纤维细胞细胞数量最多，胞体大而多突起的扁平细胞，细胞质染色很浅，因此细胞轮廓不清。细胞核大并呈椭圆形，可见核仁一个或多个，胞体界限不清。（2）巨噬细胞细胞形状不一，近圆形或不规则形，具有很多的突起，胞质染色较深，轮廓明显。胞核小，染色较深，核内结构不清。（3）肥大细胞细胞常成堆的分布在血管的附近。细胞呈圆形或椭圆形，细胞质中充满大小一致的染成蓝紫色的颗粒。颗粒均匀分布在核周围。核小，呈圆形或椭圆形，染色浅，位于细胞的中央。（4）浆细胞细胞呈椭圆形，细胞核在细胞的一端，核内含有丰富的染色质，聚集在核的周围，向核中心呈辐射状排列。近核处有一着色浅而透明的区域，胞质嗜碱，染成蓝色。除上述细胞外，尚有以下纤维：（1）胶原纤维被伊红染成粉红色，呈带状，它由许多平行均细的原纤维组成，纤维粗细不等，有时呈波浪形。（2）弹性纤维被雷镀辛复红染成棕褐色,单条分布而不成束，纤维粗细不等，有分支，并交织成网。3、致密结缔组织（1）规则致密结缔组织腱组织切片，H.E染色可见大量紧密平行排列的纤维成分和少量的细胞。纤维染成粉红色，为胶原纤维。（2）不规则致密结缔组织皮肤切片，H.E染色低倍镜观察，可见皮肤的表面为复层扁平上皮，即表皮。表皮下可见大量排列不规则的胶原纤维束，纤维束粗大，染成粉红色。细胞成分较少，散在于纤维之间。4、网状组织淋巴结镀银切片可见镀染成黑色的网状纤维，粗细不等，分支交织成网。网状细胞呈多角形与临近细胞的突起相连，突起顺延纤维的方向。5、脂肪组织脂肪组织切片，H.E染色显微镜观察，因切片在染色过程中脂肪被酒精和二甲苯溶解，故脂肪细胞呈空泡状，呈椭圆形或多角形，胞质和胞核位于细胞的外周，呈一狭窄的指环形。三、思考题：1、比较上皮组织与疏松结缔组织的异同。2、联系机能比较疏松与致密结缔组织结构的异同。四、绘图：疏松结缔组织实验三 软骨和骨一、目的要求：1、以透明软骨为主，了解软骨的基本构造。2、通过骨的构造了解其功能及营养转递。二、实验内容及方法步骤：1、软骨（1）透明软骨肋软骨切片，H.E染色低倍镜观察，可见软骨外周有一条染成红色的结缔组织，此为软骨膜。转换高倍镜观察，软骨膜由致密结缔组织组成，软骨细胞形态不一，表层细胞为梭形，深部细胞逐渐变为椭圆形或圆形，细胞由24个成群组成，这些细胞称为同族细胞群。细胞周围染色深，称为软骨囊。细胞之间淡蓝色的均质组织为软骨基质，其中含有胶原纤维，因折光率与基质一致，故不明显。细胞存在的部位称为陷窝。（2）弹性软骨狗耳廓火棉胶地衣红染色弹性软骨的结构基本上和透明软骨相似。注意：主要区别在于基质中含有被地衣红染色的弹性纤维，纤维形成网状结构，在软骨腔隙的周围较致密。软骨边缘的纤维直接与软骨膜中的弹性纤维相连。（3）纤维软骨狗膝盖半月板，H.E染色注意：基质中粉红色的胶原纤维成束平行排列。软骨细胞成行的夹杂在纤维之间。2、骨组织也是由细胞、纤维和基质组成。由于骨组织本身排列的紧密与疏松可分为两种：骨松质和骨密质。骨密质羊长骨横断磨片，美蓝染色先用低倍镜观察骨磨片。可见骨的外面和内面有平行于骨面的数层骨板。骨外面的称外环骨板，骨内面的称内环骨板。在内外环板之间，可见许多骨板以同心圆形式排成的哈弗氏系统。每个哈弗氏系统有粘合线与周围部分隔开。在圆形的哈弗氏系统之间还存在着一些骨板，彼此也互相平行排列，但不成同心圆，即间板，另外在圆形的哈弗氏系统中央的圆孔称哈弗氏管，与哈弗氏管相通或横过内外环骨板的管道称伏氏管。换高倍镜观察环绕着哈弗氏管的同心圆排列的环板，其上有许多蚂蚁形的空腔，称骨陷窝。骨陷窝又有无数的微细突起的小管称作骨小管。骨陷窝彼此靠骨小管相通。三、思考题：1、软骨基本结构与硬骨的主要区别。2、联系机能说明硬骨的结构特点。四、绘图：一部分透明软骨实验四 血液一、目的要求：1、以人血为例，认识哺乳动物血液的基本有形成分。2、了解血涂片的制备方法。二、实验内容及方法步骤：1、制备血涂片，方法如下：（1）准备两张干净的载玻片（2）用70%的酒精消毒指腹（3）用消毒过的针刺破指腹或耳垂的皮肤，用载片的一端与血液接触，取另一张载片，斜置血滴左缘，角度以45为宜，将沾有血液的载片向前推进，速度要一致，否则血膜形成波浪形，厚薄不均。（4）待干后，选较薄的均匀的血膜用蜡笔在它的四周划线，作为堤防。（5）滴入菜氏染液，盖满血膜即可，静放一分钟，然后，用等量的蒸馏水或缓冲液稀释染液，染2-3分钟，如液面浮现一层金黄色金属物质，表示染液起了染色作用，否则染色失败。（6）用蒸馏水冲去过剩的染料，血膜呈粉红色，晾干即可镜检。如要保留，可滴树胶封固。染色结果：红血球细胞质染粉红色，淋巴细胞质天兰色。细胞核兰紫色，嗜碱性颗粒兰紫色，嗜酸性颗粒粉红色，嗜中性颗粒细小淡紫色。2、人血涂片的观察先用高倍镜再用油镜观察，辨识血液中的三种有形成分红细胞、白细胞和血小板（1）红细胞：小而圆、染粉红色的无核细胞。（2）白细胞：粒细胞：细胞质中有特殊染色颗粒，根据颗粒对染料选择性的不同可分为：中性粒细胞：是白细胞中数量最多的，体积稍大于红细胞，细胞质染粉红色，胞质中充满细小的兰紫色的颗粒，核紫色，形状变化很大，常分叶，二叶到五叶之间。嗜酸性粒细胞：数量少，只占白细胞总数的2 4%，较中性大，胞质中充满红色的大小一致的粗大圆形颗粒。细胞核淡紫色，分成1-3叶 ，一般为两叶。嗜碱性粒细胞：数量极少，只占白细胞总数的1%以下，细胞质淡紫色，颗粒大小不一，染成紫色或深蓝色，分布不均，细胞核形状不定，圆形或分叶，染色浅。淋巴细胞与单核细胞是无颗粒的白细胞。正常血液中一般看不到大淋巴细胞，主要是小淋巴细胞和一定数量的中淋巴细胞。小淋巴细胞：稍大于红细胞，核大，细胞质极少只有一薄层，核的一侧有缺痕，核染深蓝色，胞质染成淡兰色，胞质内有时含有染成深红色的嗜天青颗粒。中淋巴细胞：二倍于红细胞，核圆形或卵圆形，染成深蓝色，细胞质较小淋巴细胞稍多。单核细胞：细胞体积较大，胞质较多，呈灰蓝色，有时含有细小的嗜天青颗粒 ，胞核圆形、肾形或马蹄形。（3）血小板：形状不规则的染淡蓝色的原生质小体。内有紫色颗粒聚集，经常成堆分布在红细胞之间。三、思考题1、 血液中有哪些有形成分？2、如何区分三种白细胞？四、绘图人血的有形成分实验五 肌肉组织一、目的要求：1、掌握肌肉组织的特点，并能区分三种不同的肌肉。2、了解肌肉组织与结缔组织的关系。二、实验内容及方法步骤：1、平滑肌肠横切片，H.E染色肉眼观察小肠壁，可见肠壁外染成红色的部分为肌层，衬在小肠内面的紫红色的带状组织是粘膜，二者之间的粉红色部分是粘膜下层。低倍镜观察肌层，可见基层分为二层，内层为环形肌，外层为纵形肌。转换高倍镜观察纵形肌层的细胞，细胞的断面是大小不等的圆形，相互交织存在。观察外层的环形肌层，可见细胞呈长梭形，纵形平行排列，细胞的两端尖细，而中央部分粗大，有染成兰紫色的椭圆形的细胞核。2、骨骼肌骨骼肌纵切片，铁矾苏木精染色先用中倍镜选择染色较均匀的部分进行观察，横纹肌纤维呈长圆柱形，具有明暗相间的横纹，肌纤维表面有肌膜，肌膜内有多个染为蓝黑色的卵圆形核，位于纤维的周围。用高倍镜观察肌原纤维及其横纹结构，每条肌原纤维都有明带和暗带，明带染色浅，暗带染色深。选择较清楚的部分在油镜下观察，在暗带中央区的透明线为H线，明带中央的暗线是Z线，Z线与Z线之间即所谓一个肌节。骨骼肌横切，铁矾苏木精染色在高倍镜下观察横切的肌纤维是圆形，卵圆形或多角形，细胞核靠近肌膜，每一肌纤维的外面都包有极薄的疏松结缔组织，称肌内膜，很多肌纤维又被肌束膜包围形成肌束。3、心肌心脏切片，铁矾苏木精染色低倍镜观察，由于心肌纤维走向不同，因而在切片上可以看到各种不同的切面，选择典型的纵切面，置视野中央。转换高倍镜可见心肌纤维有分支，细胞核卵圆形，染成兰黑色，位于细胞的中央，肌纤维的横纹呈兰黑色，但不如骨骼肌明显，闰盘呈深兰黑色，较骨骼肌明显。三、思考题：1、骨骼肌纤维如何形成一块肌肉？2、联系机能说明肌肉组织有何共同特点？ 四、绘图：1、高倍镜下绘制骨骼肌的纤维结构。2、高倍镜下绘制心肌纤维的结构。实验六 神经组织一、目的要求：1、掌握神经元的结构。2、识别神经胶质细胞。二、实验内容及方法步骤：1、神经元脊髓切片，H.E切片肉眼观察组织呈椭圆形，左右对称，中央呈蝶形，染深红色，为脊髓的灰质。灰质周围部分染色浅，称为白质。低倍镜观察脊髓灰质，可见在灰质内有散在的染成紫红色、形态较大而有突起结构的细胞，即神经细胞。有些神经细胞内有圆形的细胞核，有的没有。选择一典型的神经细胞，置视野中央，转换高倍镜观察，可见胞体较大，呈三角形，胞质染成紫红色，内含许多大小不一的深紫色颗粒，此为尼氏小体。此外，尚能见到一个至数个突起的断面，但树突和轴突不易区别，胞质内有大而圆的胞核，位于胞体的中央，染色质较少，呈泡状，核仁较明显，圆形，染红色。观察脊髓横断面切片，苯胺兰染色，可见胞质中染兰蓝色块状物，此为尼氏小体，其形态大小不一，树突内含尼氏体，而轴突于接近胞体处消失。观察脊髓横断面镀银切片。可见神经细胞的胞质内含有染成棕色有等的纤丝，纤丝在胞体内交织成网，而在树突和轴突中则平行排列，此即为神经元纤维。2、神经神经切片，H.E染色低倍镜观察，可见神经组织中有大小不等，疏密不定的圆形或不正形的团块，此即神经纤维束。神经纤维束内的少量结缔组织，即神经内膜，围绕在神经束外面的薄层结缔组织为神经束膜，位于神经外围的结缔组织称为神经纤维。转换高倍镜观察，可见到不正圆形的结构，此为神经外膜，神经纤维中央有一红色小点，此为轴索。在轴索外周，神经内膜的空隙即为髓鞘。3、神经末梢低倍镜观察环层小体，环层小体呈椭圆形。染深蓝色，中央有一棒状物，此即内轴，内轴周围有很多呈同心圆排列的被囊。每层由结缔组织胶原神经纤维及一层扁平形核、染成深蓝色结缔组织细胞组成。小体的一段有染色较深的带状物与内轴相连，此即感觉神经入口处。低倍镜观察运动终板切片，可见横纹肌染为红色，平行排列成束，其中有染紫色的传出神经纤维。转换高倍镜仔细观察，有髓神经纤维近肌组织时再次分支，伸向肌纤维，形成末短粗大爪形的分支，与肌纤维共同形成运动终板。4、神经胶质低倍镜观察大脑镀银切片，可见有呈菊花形的细胞，细胞突起多而短，此积原浆性星形细胞。低倍镜观察小脑镀银切片，可见纤维性星形细胞。细胞突起长而直，但突起数量少，分支不多，少突神经胶质细胞为球形细胞。胞体较小，突起少而细小，呈串珠状，分枝不多，细胞排列成行，小胞质细胞的胞体最小呈梭形，胞质少，核杆状，突起亦少，且短而细，突起上有小刺。低倍镜观察脊髓中央管，可见中央管腔面衬有单层柱状上皮，细胞游离面有纤毛，此即室管膜细胞。三、思考题：1、神经元和神经纤维有何结构特点。2、神经细胞和神经胶质细胞有何差异。四、绘图：神经元的形态结构。实验七生殖细胞的发生一、目的要求：通过精巢切片的观察，了解精子和卵子的发生过程。二、材料：鼠精巢切片、猫卵巢切片。三、内容：（一）精子的发生取鼠精巢切片于低倍镜下观察，可见精巢外有一层结缔组织膜称为鞘膜，此膜最外层由单层扁平上皮覆盖，上皮下的致密组织称为白膜，白膜下为富含血管及疏松结缔组织的血管膜；精巢实质具有许多园形或椭圆形的小管，即曲细精管，由复层上皮细胞构成，管间由白膜伸入的结缔组织隔膜（精巢小隔）所分隔。曲细精管复层管壁由以下几种细胞构成：1、各期精细胞：幼稚的在基膜上，逐渐成熟的细胞即位于管腔内。（1）精原细胞：靠近管壁基部的12层细胞，呈立方形或园形，细胞核内染色质较多，有分裂现象。（2）初级精母细胞：在精原细胞内侧，为23层园形或椭圆形的细胞，是曲细精管中最大的细胞，核大，多处于不同的分裂期。（3）次级精母细胞：较初级精母细胞小，且位于内侧，近管腔，核呈园形，内有染色质团，因很快地进行成熟分裂，故不易见到。（4）精细胞：在次级精母细胞内侧，核园形，染色深，呈各种颗粒或纤维状的染色质分散于核内，大部子细胞埋于支持细胞的细胞质陷窝内。（5）精子：多聚集在支持细胞的一端，分头、颈和尾三部分。头部卵园形，前面有一个帽状物称为顶体，顶体后部为精子核，外有细胞质膜包围；颈部很短，介于头尾之间，其长度由前中心粒至后中心粒；尾部分为中段、主段和尾部三部分，但光镜下不能区分。2、支持细胞：是曲细精管上的一种柱状细胞，分散在各期精细胞之间，与基膜成垂直排列，体积大，细胞着色浅，胞质呈网状，细胞界限不清，核椭圆形或在角形，表面有许多凹陷和突起，核仁明显。精子头部往往附着在细胞的游离端。其作用是营养，支持生精细胞，并可能起调节精子发生周期的作用。（二）卵子的发生低倍镜下可见卵巢实质分皮质、髓质两部分，髓质在中间为疏松结缔组织，其中含有大量血管，神经及平滑肌，包在髓质外的疏松组织，其中含有各种不同发育程度的卵泡。这就是皮质。卵巢最外面为低立方形的生殖上皮，上皮下为致密结缔组织，其中无卵泡，称为白膜。卵巢皮质中可见到的结构：1初级卵泡：经细胞核的系列成熟分列前期结束时，卵原细胞彼此分开，并在其外由一层扁平或立方的小细胞，即卵泡细胞所包围，而构成初级卵泡。2初级卵泡：在初级卵泡内侧，体积较大，卵泡细胞变为多层，在卵细胞（此时称为初级卵母细胞）与卵细胞之间有染成红色且较厚的膜，称为透明带，结缔组织环绕卵泡所形成的卵泡膜也越明显，在卵泡细胞层中，常见有大小不等，数量不定的卵泡腔，腔中充满液体（卵泡液在切片中为红色），以后卵泡液越来越多，卵泡腔越来越大，迫使卵细胞居于卵泡之一侧，该处卵泡细胞群隆起，包围在卵细胞外，并突入泡腔，形成卵丘,同时卵细胞群排列成数层，构成颗粒层。3.接近成熟的卵泡为数较多，大小不等，次级卵细胞发育至最后阶段时成为成熟卵泡，这时卵泡的体积增长很大，凸向皮质的表面，卵细胞外可见透明带处的放射冠，卵泡膜可为两层，内层富含血管，细胞较多，外层纤维较多，在颗粒层及卵泡膜间有透明的基膜。4.闭销卵泡:为数较多，大小不等，卵泡闭锁后，失去园形，核也变形，最后消失，只剩下染成红色而且形状不规则的透明带。5.黄体:粒层卵泡细胞增殖增长，同时卵泡膜的血管和结缔组织侵入粒层，最终形成临时性的腺体6.白体：黄体组织萎缩退化，并逐渐由结缔组织代替，最后形成白色的瘢痕。四、作业：（一）绘鼠精巢中曲细精管复层管壁上各期精细胞详图，并注明各构造名称。（二）绘猫卵巢切片中初级卵泡，次级卵泡，成熟卵泡和闭销卵泡详图，并注明各构造名称。实验八、组织切片的一般制作方法一、目的要求通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片、苏木精伊红（HE）染色等实验操作，了解石蜡切片的基本过程，掌握石蜡切片的制作方法。二、实验准备：1用具小标本瓶，镊子，蜡杯，载玻片，毛笔，蜡铲，刀片，量筒（10）毫升，酒精灯，小木块，切片木框，切片盒，吸水纸，标签纸，切片刀，熔蜡箱，展片台，染色缸等。2器皿的清洗载玻片的清洗：切片所用的载玻片必须洗得很干净，否则切片容易脱落。新的载玻片用洗液浸泡半天取出，用自来水冲洗后，用纱布擦干净，放入盒内备用。擦拭时应捏住玻片两端的边缘操作，手指勿与玻片的表面接触，以免手指上的脂肪沾污玻片。盖玻片的擦洗：新的盖片可放入95%酒精内浸泡数十分钟，或用洗液浸泡。注意盖片要一片片投入，使盖片的二面都接触到液体，浸泡后，水冲洗干净后再放入95%酒精中浸泡，然后用干净白布擦拭。擦拭时应注意，手指不能接触玻面，应以左手拇指和食指夹持盖片，右持布趁酒精未干时，一一擦拭之。3实验需用药品及其配制50、%70%、80%、95%、100%的酒精，二甲苯， 中性树胶，固定液， 石蜡。三、制作方法（一）取材：从人体或动物身上取出所需要的器官材料。材料要求新鲜。材料大小一般在33-35mm。（二）固定：将取出的材料立即投入固定液内，目的是防止组织腐败和自溶，使它保持原有的结构。常用的固定液有10%福尔马林，Bouin氏液等。固定时间需24小时左右。（三）石蜡包埋：1脱水：从低浓度酒精逐渐递升到高浓度酒精，即由50%、70%、80%、95%酒精各置1224小时，因100%酒精有脆化组织作用，故放置时间不宜太长，放23小时即可。然后放入二甲苯加酒精内半小时。2 放入二甲苯，直至标本透明为止，时间约半小时