第三章 基因芯片的制作方法.ppt_第1页
第三章 基因芯片的制作方法.ppt_第2页
第三章 基因芯片的制作方法.ppt_第3页
第三章 基因芯片的制作方法.ppt_第4页
第三章 基因芯片的制作方法.ppt_第5页
已阅读5页，还剩35页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

第三章基因芯片的制作方法 3 1概述 1 基因芯片是以Southern印迹杂交技术为基础发展起来的 反向杂交技术 2 基因芯片的制作方法 原位合成法 Affymetrix公司直接点样法 合成后点样 Stanford大学 1995年 1 常见的载体类型膜玻片三维基质包被玻片 3 2芯片载体的制作 1 膜优点 与核酸亲和力强 缺点 单位面积上点样密度低 背景较高 灵敏度低 2 玻片优点 耐受高温和高离子强度 具有不浸润性 提高点样密度 背景低 缺点 二维的平面结构 与DNA杂交时会有空间位阻 3 三维基质包被玻片具有三维孔性结构 更适合做蛋白质芯片的支持物 可以保持蛋白质的空间构象 不影响它的活性 2 玻片的修饰类型氨基修饰玻片同型双功能偶联剂修饰的玻片硫醇基修饰的玻片环氧硅烷化修饰的玻片等 图3 3APS修饰玻璃表面反应示意 1 氨基修饰的玻片 羟基 氨基 对苯乙异硫氰酸 2 同型双功能偶联剂包被修饰的玻片 异硫氰基 醛基 戊二醛 连接分子 手臂分子 特异性探针 图3 7SMPB连接硫醇基核苷酸和氨基玻片 3 连接硫醇基修饰的玻片 硫醇基 图3 8环氧硅烷化玻片修饰示意 4 环氧硅烷化修饰的玻片 环氧硅烷基 1 cDNA探针2 寡核苷酸探针3 基因组DNA探针 很少用 4 RNA探针 3 3探针的制备 cDNA探针 主要来自cDNA文库 从细胞或组织中提取RNA后逆转 寡核苷酸探针 根据数据库中的基因序列人工合成的 通常在5 末端进行氨基修饰 并加入一段不直接参与杂交的重复序列 称为手臂分子 通常用polydT 10 手臂分子 特异性探针 探针分子与基片表面的作用方式化学偶联 探针分子与基片表面活性基团发生化学反应 生成新的共价键 物理吸附 探针分子与基片表面通过次级键相连接 3 4点样仪及点样过程 接触式点样非接触式点样 1 接触式点样点样针 基本过程 点样针接触探针溶液 通过浸润现象或毛细现象 使液体转移到针尖或针的狭缝中 针尖再接触基片 样品在基片上留下斑点 完成一次点样 点样针的种类 实心针 solidpin 裂隙针 splitpin 毛细管针 capillarytube 针与环 pinandring best 2 非接触式点样 自学 1 微螺线阀 2 压电元件 接触式 非接触式 图3 10当前59家芯片设备生产商使用的点样针分布情况 图中的数字代表使用各点样针的厂家数目 3 5原位合成法 操作平台 Affymetrix芯片的特点 光导原位合成的寡核苷酸芯片高密度的点阵技术独特的PM MM探针设计 1 光导原位合成原理 2 高密度的点阵技术 1平方厘米的面积至少可排列上百万个探针合成区 点 3 Affymetrix独特的PM MM探针设计 图3 11PM MM探针设计方案 高灵敏度 图3 12仅用PM探针与联合应用PM MM探针检测靶序列的灵敏度比较 芯片结果准确可靠 图3 13PM MM的多个探针的结果与单个探针的结果比较 4 光导原位合成法的缺
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论