羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的干扰.pdf

生堡拴墅医堂苤查 至 旦箜 鲞笙 翅 丛 坠尘塑鲤 E 盟 盟 羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法 检测肌酐的干扰 余久如潘桂红鞠萍 摘要 目的分析肾功能不全患者服用羟苯磺酸钙后不同酶法血清肌酐存在较大差异的原 因 探讨羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的影响 方法本研究是自身前一后对照研究 1 体内干扰实验 选取2 0 1 1 年5 月至1 0 月黄石市第二医院1 0 例慢性肾脏病患者 检测服用羟苯磺酸 钙服用前及服用后1 周血清肌氨酸氧化酶法肌酐 S c r l 脱亚胺酶法肌酐 S c r 2 尿素 U r e a 半胱 氨酸蛋白酶抑制剂C C y s t a t i nC 比较服药前后S c r l S c r 2 U r e a 估算法G F R e G F R 的差异 2 体 外干扰筛选实验 检测羟苯磺酸钙 1 0 0m g L 对S e r l 及S e t 2 有无干扰 3 干扰剂量效应实验 检 测不同浓度羟苯磺酸钙 1 2 5 2 0 0m g L 对肌氨酸氧化酶法低浓度肌酐 6 5 9 m o L L 样品及高 浓度肌酐 4 0 4 5 斗m o L L 样品的干扰效应 以肌酐偏差3 5 或6 6 3 斗m o L L 作为干扰临床可接受 标准 d 配对样本比较用W i l c o x o n z 秩和检验 结果 1 体内干扰实验 患者服药后S c r l 浓度 1 4 8 0 斗m o L L 低于服药前2 7 3 5I x m o l L Z 一2 8 0 3 P 0 0 5 U r e a 浓度 1 4 2m m o L L 与1 4 4m m o L L Z 一0 5 6 3 P 0 0 5 及e G F R I1 8 9 5m l m i n 1 7 3m 2 与1 9 3 5m 1 m i n 1 7 3m 2 Z 一0 5 7 0 P 0 0 5 差异均无统计学意义 2 干扰筛选实验 S c r l 对照样品均值4 0 4 0 m o L L 实验样品干扰值 d 9 5 置信区间 C I 为 一1 7 3 9 0 2 8 6 肛m o L L 显示严重负干扰 S c r 2 无干扰 3 干扰剂量 效应实验 低浓度肌酐样品 干扰剂量效应回归方程Y 0 0 2 6 3 X 2 1 6 3 9 4 X 一0 2 7 5 4 R 2 0 9 9 6 F 2 5 4 6 7 P 0 0 5 羟苯磺酸钙在3 5m g L 浓度下干扰小于预设的d 高浓度肌酐样品 干扰剂 量效应回归方程Y 2 7 6 4 9 X 一0 0 7 8 2 R 2 0 9 9 8 F 7 9 4 3 4 P 0 0 5 羟苯磺酸钙在4 4m g L 浓度下干扰小于预设的d 结论羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐有负干扰 是肾功能不 全患者用药后不同酶法结果差异的原因 建议服用羟苯磺酸钙的肌酐结果在临床评价时需加以高度 警惕 有条件时选用其他原理的肌酐测定法复核 r 手华检验医学杂峦 2 0 1 3 3 6 1 6 1 1 6 4 关键词 羟苯磺酸钙 肌氨酸氧化酶 肌酸酐 T h ee f f e c to fc a l c i u n ld o b e s i l a t eo nc r e a t i n i n em e a s u r e m e n tb ys a r c o s i n eo x i d a s ea s s a y Y Uj t U r l t P A NG u i h o n g j uP t n 昏 D e p a r t m e n to fL a b o r a t o r y H u a n g s h iS e c o n dH o 印i t a lo fH u b e iP r i n c e H u a n g s h i 4 3 5 0 0 2 C h i n a C o r r e s p o n d i n ga u t h o r Y UJ i u r u E m a i l p a n g h 0 9 0 9 s i n a c o i n A b s t r a c t o b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h e i n t e r f e r e n c ee f f e c t o fc a l c i u md o b e s i l a t eo ns e n l m c r e a t i n i n el e v e l sb yS a r c o s i n eo x i d a s e b a s e da s s a y M e t h o d s1 I n t e r f e r e n c et e s ti nv i v o T e np a t i e n t sw i t h c h r o n i cr e n a ld i s e a s e sf r o mH u a n g s h is e c o n dh o s p t i a lw e r er e c r u i t e d S e r u mc r e a t i n i n efs a r c o s i n eo x i d a s e m e t h o d S c r l d e i m i n a s em e t h o d S c r 2 u r e a a n dc y s t a t i nCw e r ed e t e c t e da n dc o m p a r e db e f o r ea n da f t e r onew e e ka d m i n i s t r a t i o no fc a l c i u md o b e s i l a t e 2 I n t e r f e r e n c et e s ti nv i t r o t od e t e c tw h e t h e r1 0 0m g L c a l c i u md o b e s i l a t eh a sa n yi n t e r f e r e n c ew i t hS c r la n dS c r 2 3 D o s e d e p e n d e n ti n t e r f e r e n c et e s t T od e t e c t t h ei n t e r f e r e n c ee f f e c t o fd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fc a l c i u md o b e s i l a t ef1 2 5 2 0 0m g L o nd i f f e r e n t c r e a t i n i n ec o n c e n t r a t i o n s 4 0 4 5 斗m o V Lo r6 5 9 m o U L m e a s u r e db ys a r c o s i n eo x i d a s ea s s a y B i a s w i t h i n3 5 o r6 6 3 m o V Lo fc r e a t i n i n e1 e v e l sw a sc l i n i c a l l ya c c e p t a b l e S t a t i s t i c a lc o m p a r i s o n sw e r e m a d eu s i n gW i l c o x o nr a n k s u mt e s t R e s u l t sT h e r ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c eo fs a r c o s i n eo x i d a s e b a s e d s e r H mc r e a t i n i n el e v e l sb e t w e e nb e f o r ea n da f t e ro n ew e e ka d m i n i s t r a t i o no fc a l c i u md o b e s i l a t e P 0 0 5 I n t e r f e r e n c et e s ts h o w e dt h a t9 5 c o n f i d e n c ei n t e r v a lo fi n t e r v e n t i o n a l v a l u e D o b s o fc a l c i u md o b e s i l a t e 1 0 0m g L w a s 一1 7 3 9 2 8 6 I x m o l Lf o rt h es a r c o s i n eo x i d a s e a s s a ya n d 1 2 1 3 1 4 I x m o l Lf o rd e i m i n a s em e t h o d i n d i c a t i n gt h a tc a l c i u md o b e s i l a t ec a u s e da s i g n i f i c a n tn e g a t i v ee f f e c to nt h ef o r l n e re n z y m a t i ca s s a yb u tn o tt h el a t t e ro n e I nt h ed o s ee f f e c ti n t e r f e r e n e e t e s to fc a l c i u md o b e s i l a t e t h er e g r e s s i o ne q u a t i o n sw e r e Y 一2 7 6 4 9 X 一0 0 7 8 2 R 2 0 9 9 8 F 7 9 4 3 4 P 0 0 0 0 f o rh i g hc r e a t i n i n el e v e l sa n dY 0 0 2 6 3 X 一1 6 3 9 4 X 一0 2 7 5 4 R 2 0 9 9 6 F 2 5 4 6 7 P 0 0 0 0 f o rl o wc r e a t i n i n el e v e l s T h ei n t e r f e r e n c ee f f e c tw a sl e s st h a nt h ep r e d e t e r m i n e dd w i t ht h ec a l c i u md o b e s i l a t ec o n c e n t r a t i o n so f4 4m g Li nh i g hc o n c e n t r a t i o ns p e c i m e na n d3 5m e Li nl O W c o n c e n t r a t i o ns p e c i m e n C o n c l u s i o n sC a l c i u md o b e s i l a t eh a sas i g n i f i c a n tn e g a t i v ei n t e r f e r e n c ew i t hs e r u m c r e a t i n i n ed e t e c t e db yt h es a r e o s i n eo x i d a s em e t h o d w h i c hl e a d st ot h eb i a so fc r e a t i n i n ei np a t i e n t sw i t h r e n a li n s u f f i c i e n c y H e n c e s a r c o s i n e o x i d a s e b a s e dc r e a t i n i n el e v e l ss h o u l db e c a u t i o u sw h e nc a l c i u m d o b e s i l a t ew a su s e d a n df u r t h e rc h e c kw i t ha n o t h e ra s s a yi sn e c e s s a r yi fp o s s i b l e C 加 k bM e d 2 0 1 3 3 6 1 6 1 1 6 4 K e yw o r d s C a l c i u md o b e s i l a t e S a r c o s i n eo x i d a s e C r e a t i n i n e 血清肌酐是评价肾小球滤过功能的有效指标 临床常用于 肾功能监测以及肾功能衰竭患者透析治 疗的指征 羟苯磺酸钙是预防和治疗微血管循环障 碍引起的多种疾病以及糖尿病并发视网膜病变的常 用药物 肾功能不全患者使用羟苯磺酸钙后 肌氨酸 氧化酶法血清肌酐水平大幅降低 常被认为是药物 治疗的显著效果 但有些患者采用不同原理的脱亚 胺酶法检测后发现肌酐水平在两种酶法间存在较大 差异 临床医生和患者对实验室检验结果的准确度 提出了质疑 不准确的检测结果造成对患者肾功能 的误判 甚至延误治疗 目前未见羟苯磺酸钙对肌 氨酸氧化酶法检测肌酐干扰的实验数据报道 本研 究依据C L S IE P 7 一A 2 文件 o 通过患者体内和体外干 扰实验 探讨羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌 酐的干扰 对象与方法 一 对象 1 患者 体内干扰实验患者选择于2 0 1 1 年5 月至1 0 月间黄石市第二医院收治1 0 例慢性肾脏病 患者 符合K D O Q I 指南诊断标准 男6 例 女4 例 年龄5 6 3 7 6 8 岁 排除标准 有明显心 肺及 肝功能障碍者 发热及血液白细胞计数高于参考范 围者 采集患者羟苯磺酸钙服药前和服药l 周清晨 空腹静脉血 分离血清一4 0q C 保存待测 同期收集 患者身高 体重等病历信息 本研究征得患者知情 同意和临床医生的支持 药物的使用仅依据病情的 需要 用药剂量为1 0 1 5g d 分2 3 次口服 2 仪器和试剂 尿素 U r e a 肌氨酸氧化酶法 肌酐 S c r l 和半胱氨酸蛋白酶抑制剂C C y s t a t i n C 检测仪器A R C H I T E C TC 8 0 0 0 全自动生化分析仪 为美国A B B O T I 公司产品 U r e a S c r l 试剂为浙江东 瓯诊断产品有限公司产品 C y s t a t i nC 试剂为宁波瑞 源生物科技有限公司产品 质控品为英国R A N D O X 公司产品 脱亚胺酶法肌酐 S c r 2 检测仪器 F U J I F I L MD R I C H E M 4 0 0 0 i e 干式生化分析仪及配套 试剂 质控品为日本富士胶片株式会社产品 肌酐纯 品为天津凯通化学公司产品 干扰药物羟苯磺酸钙 为西安利君制药公司产品 用去离子水配成2 0 0 0 m g L 浓度备用 3 干扰实验本底血清 收集未使用任何药物的 健康体检人员无溶血 无脂浊 无黄疸的新鲜混合血 清 将其分成2 份 一份作为低浓度肌酐干扰实验本 底血清 另一份用肌酐纯品调节为高浓度 约4 0 0 t x m o U L 肌酐干扰实验本底血清 二 方法 1 体内干扰实验 1 0 例体内干扰实验患者冰冻 血清复融后检测U r e a S c r l S c r 2 C y s t a t i nC 重测 2 次取均值 2 体外干扰样品制备 干扰筛选实验 羟苯磺 酸钙干扰药物水溶液与高浓度肌酐干扰实验本底血 清按1 1 9 比例制成羟苯磺酸钙浓度为1 0 0m g L 的 干扰筛选实验样品 对照样品为去离子水与高浓度 肌酐干扰实验本底血清按1 1 9 比例制成 干扰剂量 效应实验 用两种肌酐浓度的干扰实验本底血清 按 需要量同上法分别制成干扰实验样品和对照样品 再将对照样品和实验样品按不同比例制成干扰物浓 度分别为 1 2 5 2 5 5 0 7 5 1 0 1 5 2 0m g L 的 2 个系列干扰剂量效应测试样品 3 体外干扰样品测量 干扰筛选实验 基于文 献生物学变异 2o 和临床专家意见以肌酐偏差3 5 或0 0 7 5m g d l 6 6 3 斗m o l L 作为干扰实验的临床 可接受标准 d 实验室肌酐检测批内标准差 s 计算d m x S 值 采用9 5 的置信区间 万方数据 虫垡捡堕医堂苤壶 生 旦筮堑鲞筮 塑鱼 i 坐丛型 些 型 堑 盟 c o n f i d e n c ei n t e r v a l C I 查E P 7 一A 2 文件附表 确定 重测次数n 按T c T C T c 次序检测S c r l S c r 2 干扰剂量效应实验 2 个系列测试样品和对照 样品随机次序检测肌氨酸氧化酶法肌酐 每份重复 3 次 4 数据分析 体内干扰实验 参照上海中山医 院利用C y s t a t i nC 计算患者估算法G F R e G F R m l m i n 1 7 3m 2 1 5 9 0 2 C y s t a t i o n C 13 8 8 0 3 患者服药前后U r e a S c r l S c r 2 e G F R 不符合正态分布采用中位数及四分位间距描述 服 药前后比较采用配对样本W i l c o x o n z 秩和检验进行 分析 P O 曼 一 划 寰 H 图1羟苯磺酸钙对低浓度肌酐样品干扰剂量效应回归 曲线 讨论 血清肌酐酶法检测主要分两大类 肌酐胺基水 解酶法 肌酐脱亚胺酶法 而偶联T f i n d e r 类的肌氨 酸氧化酶法是国内使用最广泛的方法 4 I 即通常所 说的肌酐酶法 常见溶血 黄疸及其他药物的干扰文 表1 体内干扰实验患者服药前后结果比较 中位数 四分位间距 王 乱L 吼王i 一 一一 o o 2 9 4 4 O 4 4 4 6 4 2 8 O 4 一 一 o 卫o o 2 9 9 4 8 4 8 王己眦包L置 一 一 也o o o 5 5 2 2 6 l O L t L 王 王 一 一 一 一 一 6 9 4 2 8 5 3王孓 L 王 互 一 一 一 一 乞 3 6 7 4 9 互禾一L t 吼Z 一 一 一 一一一 万方数据 1 6 4 献报道 5 引 空堡垒墅医堂盘查 Q 生 旦笠 鲞箜 翅堡 也 尘堕盟 型 型垫 y 堕 图2 羟苯磺酸钙对高浓度肌酐样品干扰剂量效应回归 曲线 干扰实验的I 临床可接受标准并无明确指标 E P 7 一A 2 文件提出了一些参考的依据 包括部分分析 物的准确度要求 总允许误差 生理学变异以及临 床专家的意见等 干扰是总允许误差减去方法偏倚 及不精密度后的残差 因此实验方法原有的偏倚和 不精密度也是确定干扰判断标准的重要依据 本研 究综合以上各因素确定偏差3 5 或6 6 3i x m o L L 取绝对值大者 作为干扰实验的临床可接受标准 鉴于肌酐检测结果的不确定性 体内干扰实验 中引用基于C y s t a t i nC 的e G F R 旧J 用于实验中观察 患者G F R 的变化 考虑到方程的适用性 该指标不 作为临床诊断 治疗的依据 干扰筛选实验药物浓 度的选择参考有关文献 墙1 及患者用药剂量 干扰 剂量效应实验药物浓度的选择围绕峰浓度并尽量涵 盖可能有判断价值的浓度 羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法肌酐有严重负干 扰 原因可能与羟苯磺酸钙的还原性有关 羟苯磺酸 钙消耗了肌氨酸氧化酶法反应过程中参与T r i n d e r 反应的H O 抑制了生色酚的氧化显色 本研究中 肌氨酸氧化酶法肌酐主要是浙江东瓯公司试剂 羟 苯磺酸钙浓度为1 0 0m g L 的高浓度肌酐样品则用 了四种方法进行测试 浙江东瓯 北京利德曼 日本 关东化学 罗氏肌酐酶法试剂干扰值分别为 一1 7 3 9 一1 7 5 6 一1 3 4 1 一1 4 5 6 仙m o L L 以上 四法均为肌氨酸氧化酶法 试剂成分差异主要是生 色酚衍生物的不同 分别为 N 乙基 N 一 3 一磺丙基 3 甲氧基苯胺 E S P A S 或A D P S N 一乙基 N 2 一羟一 3 一磺丙 3 5 二甲氧4 氟苯胺 F D A O S N 乙基 N 3 一磺丙基 3 一甲基苯胺 E S P M T 或T O P S 2 4 6 三碘一3 一羟基苯甲酸 H T I B 或H T I B A 显色最大光 吸收摩尔吸光系数 分别为 2 7 9 1 0 4 2 2 2 1 0 4 3 7 4 1 0 4 3 1 2 1 0 4L m o l c m s 越 大灵敏度越高 从以上数据观察 选用生色酚衍生物 s 越大的干扰程度越小 当然试剂的抗干扰能力主 要与反应条件的优化 生色稳定性 针对性添加物等 有关 干扰剂量效应实验显示干扰值与干扰物浓度 肌酐基础浓度均有关 健康人单次服用羟苯磺酸钙 0 5g 后血药浓度达峰时间 T 3 6h 峰值浓度 约8 1 5m g L 消除半衰期 t 在5h 左右一J 羟 苯磺酸钙通过肾脏和肠道排泄 其中9 0 为原型 1 0 为代谢产物 羟苯磺酸钙用法多为1 0 1 5g 日 分2 3 次 6 个t 后血药浓度达稳态 的9 5 左右 G F R 正常的患者2 4h 血药浓度均在 6m g L 以上 所以患者服药期间无论何时采集标本 肌氨酸氧化酶法肌酐检测都会受干扰 肾功能不全 患者G F R 显著降低 容易出现主要通过 肾脏排泄药 物的蓄积 该类患者羟苯磺酸钙药代动力学特性未 见报道 无法估计药物蓄积的程度 但从患者体内干 扰实验结果和剂量效应方程推算 药物蓄积很严重 因此 该类患者的药物减量使用应得到临床足够的 重视 鉴于羟苯磺酸钙对常用肌氨酸氧化酶法血清肌 酐检测的干扰 导致 肾功能不全患者用药后不同酶 法结果差异 建议服用羟苯磺酸钙的肌酐结果在临 床评价时需加以高度警惕 如果同期尿素等其他指 标降低不明显 应在有条件时选用其他原理的肌酐 测定法复核 以便对患者肾功能做出客观评价 参考文献 j C L S I I n t e r f e r e n c et e s t i n gi n c l i o i c a lc h e m i s t r y A p p r o v e d g u i d e l i n e s e c o n de