高效液相色谱仪使用方法及管理维护.doc

高效液相色谱仪使用方法及管理维护一 操作流程：1) 打开计算 机 后 自 动 弹 开 CAG Bootpserver 菜单通信成功。2) 打开色谱仪开关， 进入在线工作站。( 红色: 未就绪)3) 预热 30 min 即可。( 黄未就绪， 绿已就绪， 蓝采集数据， 红报警)4) 设置泵。点击 泵 检测器 开关， 左键点击 泵 Solvent bottles Solvent Bottles Fillng: Instrument 1 设置每瓶中实际液体量、最低液体量及瓶容量。5) 排气泡。若新换流动相或长时间没开机， 应向左旋开排气阀， 逐个流动相瓶排气泡， 排气时应逐渐升高流速( 1 2 mL/min) ， 再逐渐降低流速。 ( 1) 在对话框中点击相应瓶 A、B、C、D 图标 Set up Pump 。( 2) 出现 Set up Pump: Instrument 1 设置 Flow 流速为 1. 0 和瓶 B、C、D 的百分比( 例如: A 为 100、B 为 0、C 为 0、D 为 0) 即排 A 内的空气) Pressure Limits ( 压力) 0 200之间; Timetable ( 设置梯度洗脱) 。 ( 3) 改变流速为 1. 5OK ! ( 当没有气泡即洗脱完毕， 向右旋关闭排气阀， 最后将流速调至使用流速大约1. 0 mL/min。) 依次排 B、C、D 的气泡。6) 编辑检测方法。( 1) 首先编辑方法前将排气阀门关闭， 将流速逐渐降至 1. 0 mL /min。( 2) 点击 Method Edit Entire Method 。( 3) 弹出对话框 Edit Method: Instrument 1 a 方法信息; b参数设置( 可设置流量、波长、溶剂配比) ; c 数据分析、报 告 处 理 ( 一 般 不 选) ; d 运 行 时 间 表。 ( 4) 点击 OK 进入 Method Comments ， 可输入实验名称， 也可不选， 在后面也会提示输入。7) 参数设定。点击 OK 进入参数设定( 根据文献或实验方法设定) 。( 1) Control ( 流速) :一般为 1 2 mL /min。( 2) Solvents ( 溶剂名称及配比) 。( 3) Presswre Limits ( 压力限) Max:300 bar ( 压 力 保 护 限， 默 认 ) ; Min: 0 bar。( 4) Timetable ( 洗脱梯度) 一般为: 一种溶剂配比递 增 或 递 减。( 5 ) 点 Display 选 择 显 示 方 式。( 6) 点 OK VWD Signal: Instrument 1 ( 检测器设置) 对话框， Wavelength ( 波长) ， Peakiwidth ( 检 测 器 响 应 时 间) : 默 认为 0. 1min( 2 s) 。( 7) 点击 OK un Time Checklist: Instrument 1 对话框， 选中 Data Aequistion 和 Standard Data Analysis 。( 8) 点击 OK ( 存储检测方法) : 点 Save Method as 进入对话框， 可输入名称和注释， 也可不输， 然后点 OK 结束方法存储。8) 基线调节。( 1) 点击界面左下角“三箭头”显示 Online Plot 对话框， 观察基线是否平稳( 波动在 0. 05 个单位之间) Adjust ( 复位) ， Balance ( 强制使基线归零) 。( 2) 点击 Change ( 调节) : 基线走速( x 轴) 、吸收单位( y 轴) 、图表显示曲线数量， 点 OK 结束进样前设置。9) 样品信息。点击 un Method ( 运行方法) Simple Info Sample info: instrument 1 : Operator Name ( 操作者姓名) 、 Data File 中选 Manual File Name : ( 输入文件名) ( 必须每次输入新名， 否则覆盖前一次测试结果 ) ， Subdirectory: ( 文 件 存 储 名 ) ， SimpleName: ( 样品名) ， Simple Amount: ( 进样量) ， 点 OK 结束样品信息输入。10) 开始进样。进样量一般 5 25 L。( 仪器配有自动进样器) 。11) 停止采样。峰出完后按 F8 或者 stop 停止( 也可在 un control 下拉菜单中关闭) ， 自动出现图表。可直接打印， 也可进行峰型优化后再打印。12) 峰优化。打开 offline ( 离线) ， 点击 File Load signal 调出文件( 或者点击界面图标打开) : ( 1) 打开文件保存的所在位置。( 2) 点击 Graphics Signal Options 可以进行优化处理。( 3) 选择 Autoscale 可以进行自动谱图优化。( 4) 点击 Interqration Interqration Event 进行人为峰筛选。( 5) 设置峰高域和峰面积域进行峰的筛选。( 6) 退出峰优化。13) 打印报告: ( 1) 点击 eport Specfy eport 进行打印格式和内容设置。( 2) 选择 Printer 为直接打印， 选择 Screen 为显示到屏幕后再打印。选中 File 可选择文件存储格式( File Type) ，一般为 . TXT 格式， 其他项为打印内容可选项。( 3)点击 eport Print eport 打印报告。14） 关机步骤：停止检测器和泵， 退出色谱工作站; 关闭液相色谱仪电源， 关闭计算机。二 维护1） 认真维护色谱柱样品的分析是在色谱柱里进行的，色谱柱是液相色谱分析的的核心，一根色谱柱若正确地使用，可以使用很长时间，若使用不当很快就会坏掉，因此维护好色谱柱非常重要。维护好色谱柱，除以上讲的对流动相的要求，还要认真地冲洗色谱柱。1 走完样品，要马上冲洗色谱柱，否则杂质滞留在里面，就会导致色谱柱性能降低，以至很快报废。2 用与流动相互溶的溶剂进行冲洗，逐渐过渡。目前我们所常用的 的柱子，如果流动相含缓冲盐一定要用水相置换一下柱内环境，建议用的异丙醇水冲洗，再用甲醇水（：）冲洗，最后用纯甲 醇 冲 洗。 如 果 流 动 相 是 有 机 相水，用甲醇水（：）冲洗，再用纯甲醇冲洗即可。3 冲洗时间一定要够。不可草草了事。一般情况下，流速在，每换一种液体，要冲洗约分钟，特殊情况可以冲洗更长的时间。4 色谱柱长期不用时，应收藏起来，键合相填料的色谱柱用甲醇冲洗后，从仪器上取下，用随柱所配的封头 螺 帽 将 柱 两 端 密 封，以 防 止 柱 内 溶 剂 蒸发