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DNA琼脂糖凝胶电泳 姓名 徐秀倩学号 3160481导师 吴小芹 实验原理 琼脂糖为链状多糖 绳状琼脂糖束 大网孔型凝胶 分离 鉴定 纯化DNA影响DNA迁移率的因素 DNA分子的大小 构象 凝胶浓度 电压 电泳缓冲液的组成缓冲液pH DNAPi DNA带负电荷 迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率 共价闭环DNA 线状DNA 开环DNA 不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围 琼脂糖浓度 分离范围 kb 0 35 600 61 200 70 8 100 90 5 71 20 4 61 50 2 42 00 1 3 琼脂糖凝胶中DNA的观察 溴化乙锭 EB DNA 紫外光下红色荧光 主要实验器材 电泳槽结构 操作步骤 琼脂糖凝胶的制备 溶化 冷却 EB凝胶板的制备 加梳子 倒胶样品的制备 样品 1 5体积溴酚蓝加样 加样端为负极 黑 电泳 5V cm观察 紫外灯下观察 照相 溶胶 准备胶槽 凝胶冷却至50 C 加EB至终浓度0 5 g ml 铺胶 凝胶凝固后取出梳子 加缓冲液 准备样品 点样 电泳 注意观察溴酚蓝染液的迁移 紫外灯下观察电泳结果 照相 相关实验 对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的基本原理 DNA为多元酸 在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动由于不同DNA分子在同一凝胶中迁移速率不一样 电泳一段时间后可将其分开 材料 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组DNA 按常规提取 置 20 保存备用 Agarose 限制性内切酶EcoR 为上海生工生物工程有限公司产品 从凝胶中小量回收DNA片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品 1kbDNALadder为MBI产品 方法 琼脂糖凝胶电泳用1 TAE配制0 8 琼脂糖凝胶 电泳缓冲液为1 TAE 电压为5V cm 电泳1h 用溴化乙锭或LIGHTBLUEDye显色 结果 电泳后在日光下 LIGHTBLUEDye染色 或在紫外灯下 溴化乙锭染色 切取含 单一 目的DNA分子的胶条并称重 用小量胶回收试剂盒回DNA 在3个大的目的DNA片段1 2和3 分别约为10 7 4 5kb 之后有很多的较小片段 从大约3 5kb到100bp不等 在日光下 用LIGHTBLUEDye显色 分别切取含有单一目
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