experiment4酵母菌形态观察资料.ppt

1 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 2 酵母菌子囊孢子的观察 实验八 一 目的要求 1 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式 2 学习掌握区分酵母菌死 活细胞的实验方法 3 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别 4 学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 二 基本原理 酵母菌形态 酵母菌是多形的 不运动的单细胞真核微生物 细胞核与细胞质已有明显的分化 菌体比细菌大 繁殖方式也较复杂 无性繁殖主要是出芽生殖 仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖 有性繁殖是通过接合产生子囊孢子 本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式 二 基本原理 美蓝染色液美蓝为无毒性染料 其氧化型为蓝色 而还原型为无色 用它对酵母菌染色时 由于活细胞的新陈代谢作用 使细胞内具有较强的还原能力 能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型 所以酵母的活细胞无色 对于死细胞或代谢缓慢的老细胞 则因它们无此还原能力或还原能力极弱 而被美蓝染成蓝色或淡蓝色 因此 用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态 还可以区分死 活细胞 美蓝 氧化型 蓝色 美蓝 还原型 无色 还原剂 氧化剂 二 基本原理 死活细胞鉴别原理 美蓝 氧化型 蓝色 美蓝 还原型 无色 酵母活细胞 新陈代谢 还原能力 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子 在酵母菌中 能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一 酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件 所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基 麦氏 McClary 培养基 葡萄糖 醋酸钠培养基 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成 二 基本原理 子囊孢子观察 三 实验器材 1 菌种 酿酒酵母 Saccharomycescerevisiae 2 溶液与试剂 0 1 吕氏碱性美蓝染液 5 孔雀绿 0 5 沙黄 95 乙醇3 培养基 麦芽汁琼脂斜面 麦氏琼脂斜面 4 仪器或其他用具 显微镜 载玻片 盖玻片酒精灯 接种环等 四 操作步骤 美兰染色 在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液 用接种环挑取少量酵母菌苔 混合均匀 注 染液不宜过多或过少 用镊子取一块盖玻片 先将一边与菌液接触 然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上 注 盖玻片不宜平着放下 将制片放置约3min 先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况 并根据颜色区别死活细胞 染色30min后再次观察 注意死活细胞数量的变化 用其它浓度的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作 四 操作步骤 子囊孢子观察 1 菌种活化 将酿酒酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上 25 28度培养24h左右 然后再转种2 3次 注 麦芽汁斜面培养基需用新配制 表面湿润的 2 产孢培养 将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上 25 28度培养约一周 3 制片 取经产孢培养的酵母斜面培养物 在洁净载玻片上按常规涂片 干燥 固定 4 染色 滴加孔雀绿染液染色1min 5 脱色 用95 的乙醇脱色30s 水洗 6 复染 用番红复染30s 水洗 用吸水纸吸干 7 镜检 干后用油镜观察子囊孢子呈绿色 菌体和子囊孢子呈粉红色 五 实验报告 1 结果 1 绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式 2 绘图说明酿酒酵母的营养细胞 子囊和子囊孢的形态特征 2 思考题 1 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同 对酵母菌死细胞数量有何影响试分析其原因 2 在显微镜下 酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌 3 如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子 4 酵母菌在实际应用中有什么作用 酵母菌