甾体激素类

甾体激素类药物的分析,概 述,激素（Hormone，荷尔蒙）-是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。 如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。,基本结构：环戊烷并多氢菲,概述,甾体激素类药物的母核是由A、B、C、D四个环组成的。环上碳原子编号：117。D环：环戊烷结构A、B、C环：全氢化菲（菲烷 ),菲,所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷并多氢菲。,三个六元环+一个五元环,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,盐皮质激素糖皮质激素,风湿病学家Philip Hench致力于风湿性关节炎的治疗，他在1930年发现得黄疸或怀孕的病人，其风湿病情就会减轻。于是他就猜测关节炎不大可能是感染引起的疾病，而可能与内分泌有关，相应的治疗药物也应当是人体自身分泌的物质。他与同事Reichstein和Edward Kendall一起，研究肾皮质激素并分离了可的松。不过由于纯度不高而无法体现出疗效。最后，默克公司参与进来，默克公司的资深化学家Lewis Sarett通过36步全合成反应，打通了可的松的合成工艺。在1948-1949年左右，Hench得到了纯度较高的可的松并进行临床试验，临床效果非常喜人。由于发现用激素来治疗风湿性关节炎的方法，整个科学界为之震动。1950年，三人一起获得了诺贝尔医学奖。其颁奖速度可与胰岛素相媲美。虽然可的松的副作用太大，而无法在临床推广，但用激素治疗免疫性疾病的疗法却从此广泛应用，氢化可的松等相关衍生物也迅速被推向市场。,少一个C,这是苯环,环上双键的表示方法： 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。双键位置,4,1,4,5,5(10),环上取代基构型表示方法：构型：与母核连接的取代基,指向环平面的前面时,为构型.用实线表示“”构型：与母核连接的取代基,指向环平面的背面时,为构型.用虚线表示“”,肾上腺皮质激素,氢化可的松,醋酸地塞米松,1.均有21个碳原子2. A环4-3-酮基, UV、与羰基试剂反应3.C17位上有a-醇酮基,具还原性,一、结构与性质,1. 肾上腺皮质激素,常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。,雄性激素及蛋白同化激素,睾酮,苯丙酸诺龙,1.雄性激素母核有19个碳原子,蛋白同化激素 C10位上一般无角甲基,母核有18个碳原子2. A环4-3-酮基3.C17位上有-羟基,或由它们形成的酯,酯化吸收减慢，作用时间长。,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,黄体酮,1.母核有21个碳原子2. A环4-3-酮基3.C17位上有甲酮基,孕激素,雌性激素,炔雌醇,1.母核有18个碳原子,C10无角甲基2. A环为苯环, C3位上有酚羟基3.C17位上有-羟基,雌二醇,雌激素,小结,二、鉴别试验,（一）与强酸的呈色反应,甾体激素药物,呈色,H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl,（母核）,2. 官能团的呈色反应,甾酮激素类药物,呈色,羰基试剂,（1）C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,异烟腙（黄色）,睾酮,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐OH,（2） C17 醇酮基,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化纳间二硝基酚、芳香醛,（3）甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化纳,其他甾体,淡橙色不显色,黄体酮,蓝紫色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,（4）有机卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸-硝酸银,AgCl,呈蓝紫色,肾上腺皮质激素药物,Cu2O橙红色,碱性酒石酸铜,2. 沉淀反应,（斐林试剂）,含炔基的甾体激素,白色的银盐沉淀,硝酸银,2）. 与硝酸银的沉淀反应,1）. 与菲林试剂的沉淀反应,3）、与氨制硝酸银试液的反应 银（）在碱性条件下可被还原物质还原为黑色的金属银沉淀。如：中国药典鉴别醋酸去氧皮质酮,2Ag + 2OH,+,-,NH3,+2Ag + CH3COOH,黑色,4）. 与硝酸-硝酸银的沉淀反应,含有氯取代的甾体激素类药物。,3 制备衍生物测定m.p.,（2）缩氨基脲的生成如苯丙酸诺龙（甾酮）+ 盐酸氨基脲 苯丙酸诺龙缩氨脲 熔点为178-185C,-H2O,KOH,（1）酯的生成,（4）.酯的水解,丙酸睾酮,醇制的氢氧化钾,游离睾酮,熔点为150156C,（3）.肟的生成,羰基与羟胺生成肟，测熔点,4.水解产物的反应,特臭,-3-酮 约240nm,苯环 约280nm,5. UV法规定最大吸收波长最大吸收波长处的吸收度某两个吸收波长处吸收度的比值,33003000cm-1,30002700cm-1,19001650cm-1,16501450cm-1,1000650cm-1,6. IR法,37503300cm-1,7 .TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,炔诺酮TLC图,8. HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,（1）游离磷酸盐,地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠,对照品法,二、特殊杂质检查,磷酸酯化时残存的过量磷酸盐采用钼蓝比色法检查,原理：,方法：,（对照液 0.035mg/ml KH2PO4）,供试品中游离磷酸盐按磷酸计算的限量：,检查 游离磷酸,地塞米松磷酸钠,精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。,（2）甲醇和丙酮（残留溶剂）,（灵敏度法）,甲醇 不得出峰 检测限= 3.1ng,丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子,GC法,（3）雌酮,原理 Zimmermann反应,碱性KOH乙醇,高纯度,（4）硒的检查,来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,有毒,方法,二氨基萘比色法测定,5.其他甾体,甾体激素类药物多由其它甾体化合物或结构类似的其它甾体激素经结构改造而来，所以可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂等杂质。有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。,1、定义：与标示药物结构不同的甾体化合物都称为 “其他甾体” 2 来源：原料、中间体、异构体、降解产物3、特点：（1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似,检查方法： TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）,（1）TLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色,特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。,（2）HPLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积,特点： （1）需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量；,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,（1）原理,1. 四氮唑比色法,还原性,三苯甲瓒深红,氯化三苯四氮唑（TTC）,红四氮唑（RT）,蓝四氮唑（BT）,双甲瓒（暗蓝）,O,OH-,分子重排,醋酸泼尼松龙软膏 含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。,测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25暗处放置4050分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。,（4）影响因素,1. 结构的影响,C11= O C11OH,C21OH C21-酯,2. 溶剂、水分的影响,含水量大时使呈色速度减慢，当含水量不超过5%时，对结果几无影响。故以无醛乙醇为溶剂。,4、碱的种类及加入顺序：以氢氧化四甲基铵的结果最佳，加入顺序：,3. 温度与时间：25 暗处反应40-45min。,5. O2与光线的影响：避光，隔绝空气or充N2,6. 干扰物的影响：测定油膏、冷霜等制剂应先分离后测定,肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1） 原理,异烟腙（黄）,酮基,异烟肼,-,3,C,HCl,（缩合）,（三）比色法,对照品法,55,异烟肼,挥去乙醇,对照液,供试液,A,暗45min,（3）讨论,A. 反应专属性：具有4 3 酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量的与异烟肼反应，本法对4 3 酮基具有一定的专属性。,C3-酮基 C20-酮基、C17-酮基 C11-酮基不反应,B. 溶剂的选择,异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇,C.水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,溶剂不挥发、不吸收水分时 O2与光线无影响,D.酸的种类和浓度,酸与异烟肼摩尔比2：1可获得最大吸收值,异烟肼0.00365 mol/L HCl 0.0074 mol/L H2SO4 0.0037 mol/L 醋酸 4.4 mol/L,（1）原理,max=465,雌激素,3. Kober反应比色法,max=465 黄色,max=515 红色,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,反应条件,双变色，测定结果重现性不好杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰）,存在的问题,A环是芳环，在C2或C3有含氧取代D环的C17有含氧取代（OH,-C=O）C13必须有角甲基,（二）UV法,-3-酮 240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药,苯环 280nm（）,雌激素,示例：醋酸可的松片的含量测定（1）配制供试液（2）测定238nm的吸光度（3）按 为390计算,醋酸可的松的紫外吸收光谱,（一）HPLC法 USP、BP、JP均采用 RPHPLC（大多内标法）特点 ：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快。,示例：醋酸泼尼松龙的含量测定色谱条件：固定相：ODS，流动相 甲醇-水 （70:30），检测波长240nm， 内标物 醋酸氟轻松系统适用性试验：N 3000，R符合规定。,练习与思考,A型题,1. 醋酸地塞米松的鉴别方法是A.三氯化铁反应 B. 水解反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应2. 丙酸睾酮中国药典规定的含量测定方法为A.非水溶液滴定法 B.溴酸钾法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.旋光法,3甾体激素类药物的结构中能和 四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基,4. 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是 A雌二醇 B黄体酮 C醋酸可的松 D苯丙酸诺龙 E以上都不对,5异烟肼比色法测定甾体激素类 药物时，药物的呈色基团是 A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D. 炔基 E. 甾体母核,6.四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定 A. 可的松 B. 睾丸素 C. 雌二醇 D. 炔雌醇 E. 黄体酮,7.用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是： A强酸性 B中性 C强碱性 D弱碱性 E以上都不对,8. 可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮染料的甾体激素类药物是 A. 醋酸可的松 B. 睾酮 C. 黄体酮 D. 雌二醇 E. 炔诺酮,11. 用四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用C17 醇酮基的何种性质 A氧化性 B还原性 C可加成性 D酸性 E碱性,问题1216 A维生素B1 B醋酸地塞米松 C两者皆是 D两者皆不是 12. 异烟肼比色法 13. 硫色素反应 14. 紫外分光光度法 15. 羟肟酸铁反应 16. 绿奎宁（Thaciaquin）反应,B,A,C,D,D,17.Kober反应是 A. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色 B. 皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色 C. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 D. 维生素A与无水三氯化锑的无醇氯 仿溶液呈色 E. 异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色,B型题,A.亚硝基铁氰化钠反应 B. Vitali反应 C. 绿奎宁(thalleiaqllin)反应 D. 碱试酒石酸铜试液的反应 18. 黄体酮 19. 醋酸地塞米松 20. 硫酸奎宁,A,E,D,X型题,21. 用HPLC法测定的药物有A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 炔雌醇 D. 硫酸阿托品 E. 黄体酮 22. 可用紫外分光光度法测定含量的药物有A. 尼可刹米注射剂 B. 醋酸地塞米松片 C. 洋地黄毒苷片 D. 地高辛片 E. 硝酸士的宁注射剂,23.可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸,24.可用于甾体激体类药物的测定方法有 A高效液相色谱法 B四氮唑盐法 C紫外分光光度法 D异烟肼比色法 EKober反应比色法,25.黄体酮在酸性溶液中可与下列哪些试剂反应呈色 A. 2,4-二硝基苯肼 B. 三氯化铁 C. 硫酸苯肼 D. 异烟肼 E. 四氮唑盐,