HBV分子生物学

HBV分子生物学,陈忠斌博士军事医学科学院放射与辐射医学研究所电磁与激光生物学研究室,在国内因型肝炎最为严重，加上会演变成慢性肝炎，肝硬化甚至肝癌，所以对人健康之威胁最大。,HBV的危害性,Clinical and Epidemiologic Correlations in HBV Infection,N Engl J Med 359:1486, October 2, 2008,350 million HBV carriers worldwide,HBV350 Million,HCV185 Million,乙肝病毒（HBV）与乙型肝炎, 乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV） 可引起肝脏急性、慢性感染，肝硬化和肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）全世界HBV携带者数量已达到3亿5千万每年死于HBV导致的肝癌患者数量超过100万我国大约有1亿2千万的HBV携带者,慢性乙肝是一种潜在威胁生命的疾病。 全球每年有超过50万人死于原发性肝癌，而其中多达80的原发性肝癌是由慢性乙肝引起的。在4亿慢性乙肝患者中，有75生活在亚洲，而中国是全球乙肝和肝癌负担最沉重的国家。中国大陆的HBV流行率最高，这里的HBV病毒携带者占全球总数的1/3以上。据估计，中国大陆有1.2-1.3亿乙肝病毒携带者。中国台湾的慢性HBV感染率为15-20%，估计有300万乙肝病毒携带者。韩国约有225227万乙肝病毒携带者。印度的乙肝病毒携带者估计达3400万。新加坡慢性HBV感染率为4，约有15万乙肝病毒携带者。菲律宾的慢性HBV感染率为5-16%。泰国慢性HBV感染率为3-6%，约有300万乙肝病毒携带者。香港地区慢性HBV感染率为8.8%，约有70万乙肝病毒携带者。,病毒学分类: Hepadnaviridae, Orthohepadnavirus: HBV,WHV, GSHV Avihepadnavirus: DHBV 病毒结构和大小: Env（HBsAg;大,中,小) Danes particle 42nm HBcAg Core DNAP HBV-DNA,乙 型 肝 炎 病 毒,乙肝病毒的结构,HBV virions (Dane particles),20-nm HBsAg particles,Structure of HBsAgAssociated Particles (Phosphotungstic AcidNegative Stain).,HBV病毒学,嗜肝DNA病毒科，基因长3.2kb4个开放读码框架：Pre-S/S、Polymerase、 Precore/core、XCore promoter和Precore区变异X蛋白与肝癌的发生有关cccDNA是HBV复制的模板大多数抗病毒药物对cccDNA的作用小或无作用,HBV genome and proteome,S PreS1 ,Pre-S2, S (PreS1 ,Pre-S2, PHSA-R, S) C Pre-C, C ORFs (HBcAg, HBeAg) P DNA p (DNAp) X Xgene (HBxAg),病毒的基因组 HBV基因组又称HBV-DNA,由3200bp组成,为环状部分双股DNA,分长(L),短(S)两股,L链含4个开放读码区(Open reading frame; ORF),乙肝病毒的分生检验,掌握血清中HBV-DNA的提取方法及原理，HBV-DNA实时荧光定量PCR的测定原理了解核酸测定引物设计原理，实时荧光定量PCR仪的工作原理及操作要求： 复习“生物大分子的分离纯化”及“聚合酶链反应技术”章节,病毒抗原抗体系统检测结果分析,介绍血清中病毒DNA的提取方法和原理学生分组提取血清中HBV-DNA介绍实时荧光定量PCR的测定原理介绍一般核酸测定引物设计原理介绍HBV-DNA测定引物设计思路,1. DNA提取方法有哪些？2. PCR原理是什么？实时荧光PCR原理与普通PCR的什么不同？,乙型肝炎预防方法-疫苗注射最有效是接受乙型肝炎疫苗注射疫苗一共需要注射三次，第一和第二次相隔一个月，第二和第三之相隔五个月。依时接受三次疫苗注射后，大约90-95%的人可以产生长期的免疫力。接受乙型肝炎预防疫苗之前，应该预先检验血液，只有从未被乙型肝炎感染过的人，才需要接受疫苗注射。,乙肝病毒细胞模型和动物模型,没有可感染的细胞模型只有稳定整合HBV基因组的细胞系： HepG2.2.15细胞转基因鼠；动物HBV：土拨鼠肝炎病毒（WHBV）、鸭肝炎病毒（DHBV）,抗乙型肝炎病毒治疗,抑制病毒复制，减少传染性；改善肝功能；减轻肝组织病变；提高生活质量；减少或阻止肝硬化和原发性肝细胞癌 的发生。,抗病毒治疗的目的,慢性乙型肝炎抗病毒治疗难度,慢性HBV感染难清除 婴幼儿期感染, 免疫耐受性 HBeAg()慢性乙型肝炎复发率很高 HBV cccDNA难消失 cccDNA 与肝细胞“共存亡” 只要cccDNA存在, 复制不会停止 当前尚无药物能直接作用于cccDNA,乙肝的综合治疗, 抗病毒治疗 免疫调节治疗 “保肝”治疗 中医药治疗 基础治疗及心理治疗 基因治疗,抗病毒药物种类,目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类： 干扰素：如赛若金（重组人-1b干扰素）、 进口及国产- 2a，-2b干扰素等。 核苷类似物：拉米夫定、泛昔洛韦等。,Approved treatments for chronic hepatitis B,Standard interferon(IFN), Pegylated IFN, Lamivudine (LAM)-拉米夫定, Adefovir dipivoxil (ADV)-阿德福韦, Entecavir (ETV)-恩替卡韦, Telbivudine(LdT),干扰素,1990年美国FDA正式批准干扰素-2b（商品名：甘乐能）治疗慢性乙型肝炎1991年美国FDA正式批准干扰素-2b（商品名：甘乐能）治疗慢性丙型肝炎1998年FDA批准干扰素-2b（商品名：甘乐能）联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎，成为慢性丙型肝炎的标准治疗方案,拉米夫定,【别名】贺普丁, 拉米夫定【外文名】Lamivudine， Heptodin,贺维力(阿德福韦酯Hepsera),葛兰素史克公司出品的最新抗乙肝病毒新药 （贺维力 片剂）制造商 葛兰素史性状本品为类白色片,恩替卡韦,是一种有效的、选择性抑制乙型肝炎病毒复制的脱氧鸟嘌呤核苷类似物,由Bristol-Myers Squibb 公司研究开发, 用于治疗乙型肝炎。体外试验表明,恩替卡韦比其他核苷类似物更有效。动物模型和人体临床研究结果显示,恩替卡韦具有极强的抑制乙型肝炎病毒复制,降低血清病毒DNA 水平的作用,对耐拉米夫定的突变病毒株仍然有效, 且未见明显的不良反应和线粒体毒性。,2005年3月31日，美国FDA 批准百时美施贵宝（Bristol-Myers Squibb）公司了恩替卡韦（entecavir）,现有乙肝抗病毒药物中，核苷类药物初治患者4年的耐药发生率分别为： 拉米夫定 71%， 阿德福韦 18%， 恩替卡韦1%。,N Engl J Med 359:1486, October 2, 2008,N Engl J Med 359:1486, October 2, 2008,N Engl J Med 359:1486, October 2, 2008,Serological signs of emergence of a drug-resistant mutant,Alan Kay, Fabien Zoulim. Virus Research 127 (2007) 164176,HBV polymerase drug-resistant mutants,Alan Ka