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精品文档 1欢迎下载 题目 293T 细胞培养操作规程 1 目的 293T 细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞 因 此做好 293T 细胞的培养 为保证相关实验的正常进行提供必要条件 2 适用范围 本部门 293T 细胞培养 3 操作方法 3 1 将移液器和移液枪 15ml 离心管 离心管架 75cm2 新的细 胞培养瓶放于生物安全柜中 按照生物安全柜的标准操作规程 将 生物安全柜的紫外开启半小时 3 2 将含 10 胎牛血清和 100U ml 双抗的 DMEM 及 PBS 放于 37 水 浴锅中预热 3 2 1 将已长到 80 90 的 293T 细胞培养瓶从 37 5 的 CO2 培 养箱中取出 先用 75 的酒精喷洒于瓶表面 将细胞培养瓶旋转放 于生物安全柜中 用无菌的移液管吸净其中的培养基 加 5ml 的预 热的 PBS 洗涤一次 吸净 PBS 3 2 2 将含 EDTA 0 25 tyption 用 PBS 稀释两陪到五倍 向该 75cm2 的细胞瓶中加入 3ml 稀释好的 EDTA 0 25 tyption 让其充 分平铺于细胞表面 盖好瓶盖 将细胞瓶放在显微镜下观察 直到 细胞变圆 加含 10 胎牛血清的 DMEM 终止反应 用移液管轻轻将瓶 上的细胞吹下 将细胞液移到 15ml 无菌的离心管中 1000rpm 离心 精品文档 2欢迎下载 3 分钟 3 2 3 将离心上清吸弃掉 用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞 分散开 再加 3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释开 取一定量 的细胞液进行 n 倍稀释后计数 按照细胞计数标准操作规程进行 3 2 4 计数好之后细胞传代密度按照 2 5 104个细胞 cm2的培养瓶 中 10mlDMEM 培养基 放于 37 5 的 co2培养箱中培养 3 2 5 24 小时后观察细胞状态 待细胞长到 80 90 时进行下一次 传代培养 精品文档 3欢迎下载 欢迎您的下载 欢迎您的下载 资料仅供参考 资料
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