医学免疫学实验课程教学大纲(2014)

河北大学课程教学大纲 课程编号 242025 课程名称 医学免疫学实验 学分学时 1 学分34 学时 开课单位 临床学院 撰 稿 人 曹志然 审 核 人 赵丽君 2015 年 5 月 20 日制 修 订 2 医学免疫学 实验教学大纲 实验课程 课程编号 242025 课程英文名称 Medical immunology experiment 学分 学时 1 学分 34 学时 课程类型 通识通修课程 通识通选课程 学科基础必修课程 学科 跨学科 选修课程 专业发展核心课程 专业发展拓展课程 集中实践课程 适用专业 专业类 五年制临床医学专业 二年级 先修课程 人体解剖学 医学生理学 生物化学 组织胚胎学 一 课程简介与教学目标 一 课程简介 医学免疫学是临床医学专业的专业基础课和桥梁学科 是国家规定的主要课程 是我院教 学计划中的必修课 是考试课 医学免疫学实验是临床医学专业重要的实验教学内容之一 医学免疫学 与 人体解剖学 医学生物学 组织胚胎学 生理学 及 病理学 和 各临床学科关系密切 学生应在掌握前述基础学科的基础上 系统学习本学科的内容 以此学 科为桥梁 学习后续的基础与临床学科 二 教学目标与要求 通过实验课的教学进一步印证理论教学的内容 通过实验设计 操作及结果分析使学生掌 握免疫学实验的基本原理 基本操作技能 同时在教学过程中培养学生独立思考 分析问题 解决问题的能力 为后续实验课程的学习及今后的临床工作打下良好的基础 二 教学方式与方法 采用带教老师讲授实验原理 操作要点 注意事项 实验演示 结果分析讨论及书写实验 报告等多种形式 并使用多媒体 投影 录像 CAI 等先进教学手段 并充分发挥教 学双方的作 用 努力实现大纲规定的课程目标 三 教学重点与难点 一 教学重点 免疫学基本实验技术的实验原理 操作技能 结果分析及意义 二 教学难点 1 ELISA 法检测乙肝两对半的实验原理 操作技术及结果分析 2 密度梯度离心法分离淋巴细胞的操作技巧 单个核细胞的收集及结果的观察 3 APPAP 法检测 T 细胞亚群中标本片的制备 一抗 二抗加样过程中的操作技巧 4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验中腹腔巨噬细胞的收集技术 3 四 学时分配计划 序号实验项目名称实验要求实验类型学时 一 1 单向琼脂扩散试验 血清 IgG IgA IgM 的测定 2 双向琼脂扩散试验 甲胎蛋白的测定 3 对流免疫电泳 示教 必修验证性 4 二 1 凝集反应 间接凝集 RF 的测 2 间接凝抑制试验 妊娠试验 必修 验证性 4 三 1 观察 分析实验一的结果 2 补体参与的试验 溶血 必修 验证性 4 四ELISA 实验 乙肝两对半的测定必修综合性 4 五 淋巴细胞分离技术及细胞活性测定必修设计研究 性 4 六 T 细胞亚群的测定 APAAP 法 必修设计研究 性 6 七巨噬细胞吞噬实验 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬葡萄 球菌实验 必修 设计性 4 八 1 淋巴细胞转化试验 2 E 花环实验 必修 演示性 2 九测验 2 合计 34 一 教材 1 免疫学实验指导 自编 2 基础医学实验教程 陈冬志 韩艳梅 主编 北京大学出版社 2010 年 8 月 二 教学参考书 1 细胞与分子免疫学 金伯泉主编 北京 科学出版社 2001 第二版 2 医学免疫学 龚非力主编 北京 科学出版社 2003 六 课程考核与成绩评定 考核类型 考查 考核方式 实验报告 实验操作 闭卷考试 成绩评定 实验操作 20 实验报告 10 试卷 70 七 课程内容概述 4 实验一实验一 和实验二和实验二 沉淀反应和凝集反应沉淀反应和凝集反应 一 教学要求 1 掌握沉淀反应和凝集反应的特点及常用沉淀反应和凝集反应的技术类型 2 常用沉淀反应和凝集反应的基本操作技能 二 知识点提示 1 沉淀反应和凝集反应的概念 特点及常用技术类型 2 常用沉淀反应和凝集反应的基本操作技能 注意加样的准确性 凝集现象的观察 三 教学内容 1 单向琼脂扩散试验 血清 IgG IgA IgM 的测定 2 双向琼脂扩散试验 甲胎蛋白的测定 3 对流免疫电泳 示教 4 凝集反应 间接凝集 RF 的测定 5 间接凝抑制试验 妊娠试验 四 思考题 1 单向琼脂扩散试验的原理 操作时的注意事项 2 间接凝抑制试验的原理及如何判断结果 实验三实验三 补体参与的反应补体参与的反应 溶血反应溶血反应 一 教学要求 1 掌握单向琼脂扩散实验的结果观察与分析 2 掌握溶血实验的原理与操作技能 二 知识点提示 1 单扩实验沉淀环的测量及抗原含量的计算 2 双扩实验沉淀线的观察及结果分析 3 溶血试验中注意用于各种试剂的吸管不能混用 加样量要准确 注意加样后充分混匀 但反应后观察结果前不要晃动试管 以免影响结果的观察 三 教学内容 1 观察 分析上次实验结果 2 补体参与的反应 溶血反应 四 思考题 1 进行溶血实验时有哪些注意事项 为什么溶血素要进行灭活 实验四实验四 免疫标记技术免疫标记技术 ELISA ELISA 法检测乙肝两对半法检测乙肝两对半 一 教学要求 1 掌握 ELISA 实验的原理及测定抗原 抗体的技术类型及要点 2 熟悉试剂盒的组成 5 二 知识点提示 1 按照试剂盒说明掌握各种抗原 抗体检测的原理 2 加样量的准确性 3 洗板的要领 4 结果的观察与分析 尤其是竞争法中无色是阳性 三 教学内容 ELISA 法测定乙肝两对半 按试剂盒说明 四 思考题 1 ELISA 法检测乙肝两对半的实验原理如何 怎样判断结果 实验五实验五 淋巴细胞分离技术淋巴细胞分离技术 一 教学要求 掌握外周血淋巴细胞的分离技术和活力测定法 二 知识点提示 1 将稀释的血液轻轻地加在淋巴细胞分层液上层 力度不能太大 速度不能太快 否则影 响分离效果 2 离心后取出试管时动作要轻 重点确认需要的细胞层 并保证尽量获取最多的细胞 三 教学内容 人外周血淋巴细胞分离技术 密度梯度离心法 四 思考题 简述密度梯度离心法分离外周血单个核细胞的实验原理及技术要点 实验六实验六 T T 淋巴细胞亚群测定淋巴细胞亚群测定 APAAP APAAP 法法 一 教学要求 掌握 APAAP 法测定 T 淋巴细胞亚群的原理及技术要点 二 知识点提示 1 标本制备 2 显色剂配制 使用前说明书比例现配先用 3 标本染色 用记号笔在标本外画圈 然后滴加固定液 50ul 室温静置 2 3min PBS 淋洗 后擦干玻片背面及细胞涂片外的 PBS 所有反应在湿盒中进行 在每张玻片的三个标本膜上分别 滴加小鼠抗人 CD3 CD4 CD8 单抗 20ul 覆盖细胞区 4 过夜 PBS 淋洗 3 次 滴加生物素标 记的抗小鼠 IgG 适量 10 30ul 37 孵育 30 45min PBS 淋洗 3 次 滴加碱性磷酸酶标记的 链霉卵白素适量 10 30ul 37 孵育 30 45min PBS 淋洗 3 次 滴加显色剂 30 50ul 室温 显色 20 40min 可在显微镜下观察 待细胞膜上出现红色标记物时用 PBS 淋洗 滴加核复染剂 30 50ul 30s 后自来水淋洗 滴加封片剂 盖玻片后镜检 4 结果判定 高倍镜或油镜下选取染色好的视野计数 200 个单核细胞 表面带有红色的为阳性细 胞 计算出阳性率 6 三 教学内容 按试剂盒说明完成 T 淋巴细胞亚群测定的全过程 并进行显微镜下计数 根据正常参考范 围判定结果 四 思考题 简述 APAAP 法测定 T 淋巴细胞亚群的原理及技术要点 实验七和实验八实验七和实验八 吞噬细胞功能测定吞噬细胞功能测定 一 教学要求 1 掌握吞噬细胞功能测定