实验四、酪蛋白的制备

实验四 酪蛋白的制备 一 目的 1 学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法 2 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 二 原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白 含量约为 35g L 酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物 等电点为 4 7 利用等电点时溶解度最低的原理 将牛乳的 pH 调至 4 7 时 酪蛋白就沉淀 出来 用乙醇洗涤沉淀物 除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白 三 材料 试剂与器具 一 材料 新鲜牛奶 一 试剂 1 95 乙醇 1 200mL 2 无水乙醚 1 200mL 3 0 2mol L pH4 7 醋酸 醋酸钠缓冲液 3000ml 先配 A 液与 B 液 A 液 0 2mol L 醋酸钠溶液 称 NaAC 3H2O 54 44g 定容至 2000ml B 液 0 2mol L 醋酸溶液 称优纯醋酸 含量大于 99 8 用冰醋酸也可以 24 0g 定容至 2000ml 取 A 液 1770ml B 液 1230ml 混合即得 Ph4 7 的醋酸 醋酸钠缓冲液 3000ml 4 乙醇 乙醚混合液 乙醇 乙醚 1 1 V V 二 器具 1 离心机 2 抽滤装置 3 精密 pH 试纸或酸度计 4 恒温水浴箱 5 烧杯 四 操作步骤 一 酪蛋白的粗提 10mL 牛奶加热至 40 在搅拌下慢慢加入预热至 40 pH4 7 的醋酸缓冲液 10mL 用精 密 pH 试纸或酸度计调 pH 至 4 7 将上述悬浮液冷却至室温 离心 8 10 分钟 3500 4000 r min 弃去清液 得酪蛋白粗制 品 二 酪蛋白的纯化 1 用水洗涤沉淀 3 次 离心 5 分钟 3500 4000 r min 弃去上清液 2 在沉淀中加入 20mL 乙醇 搅拌片刻 将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤 用乙醇 乙醚混合液洗沉淀 2 次 最后用乙醚洗沉淀 2 次 抽干 3 将沉淀摊开在表面皿上 风干 得酪蛋白纯品 三 准确称重 计算含量和得率 含量 酪蛋白 g 10mL 牛乳 g 得率 测得含量 理论含量 X100 式中理论含量为 3 5g 100mL 牛乳 五 注意事项 1 由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质 故调节牛奶液的等电点一定要准确 最好 用酸度计测定 2 精制过程用乙醚是挥发性 有毒的有机溶剂 最好在通风橱内操作 3 目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品 不是纯净牛奶 所以计算时应按产品的相应 指标计算 六 实验报告 1 根据实际操作 以流程图形式总结酪蛋的制备方法 2 合理分析实验所得率 七 思考题 1 制备高产率纯酪蛋白的关键是什么 2 试设计另一种提取酪蛋白的方法 琼州学院实验项目卡琼州学院实验项目卡 生物科学与技术学 院院 生化 实验室实验室 设日期设日期 年年 月月 日日 实验项目 酪酪蛋蛋白白的的制制备备 面向专业 课程 性质 1 必修 2 选修 实验类型 1 还未开设的新实验 2 手段更新的实验 3 已开设过的实验 本实验学 时数 4 实验 分组 概况 名 称型号规格数量名 称型号规格数量 离心机 2 抽滤装置1 拖 2 1 抽滤瓶 布氏漏斗 恒温水浴箱 1 烧杯2 大 6 小 8 培养皿 6 电子天平 1 所用主要仪器 名 称纯度级别数量名 称纯度级别数量 乙醇 95 2000ml 乙醚无水 2000ml 0 2 mol L NaAC500ml pH 4