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文档简介

琼脂糖凝胶电泳常见问题 常见问题原因对策 DNA 降解实验过程避免核酸酶污染 电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后 离子强 度降低 PH 值上升 缓冲能力减 弱 从而影响电泳效果 TBE 建 议使用 10 次就更换缓冲液 所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过 20V CM 温度 30 巨大 DNA 链电泳 温度应 15 核查所用电泳缓 冲液的缓冲能力 注意经常更换 DNA 上样量过多减少凝胶中 DNA 上样量 DNA 含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐 分 有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白 DNA 条带模糊 DNA 变性电泳前勿加热 用 20mM Nacl 缓 冲液稀释 DNA 出现片状拖带或涂抹带PCR 扩增有时出现涂抹带或 片状带或地毯样带 其原因 往往由于酶量过多或酶的质 量 差 dNTP 浓度过高 Mg2 浓度过高 退火温度过 低 循环次数过多引起 其对策有 减少酶量 或调 换另一来源的酶 减少 dNTP 的浓度 适当降低 Mg2 浓 度 增加模板量 减少循环 次数 电泳条件不合适电泳时电压不应超过 20V CM 温度 30 巨大 DNA 链电泳 温度应 15 核查所用电泳缓 冲液的缓冲能力 注意经常更换 不规则 DNA 带迁移 DNA 变性电泳前勿加热 用 20mM Nacl 缓 冲液稀释 DNA DNA 上样量不够增加 DNA 上样量 聚丙烯酰胺凝 胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高 上样量可适当降低 DNA 降解实验过程避免核酸酶污染 DNA 跑出凝胶缩短电泳时间 降低电压 增强 凝胶浓度 带弱或无 DNA 带 EB 染色的 DNA 所用光源不合适应用短波长 254nm 的紫外光 源 DNA 跑出凝胶缩短电泳时间 降低电压 增强 凝胶浓度 分子大小相近的 DNA 带不易分辨增加电泳时间 核准正确凝胶浓 度 DNA 变性电泳前勿加热 用 20mM Nacl 缓 冲液稀释 DNA DNA 带缺失 DNA 链巨大 常规凝胶电泳不合在脉冲凝胶电泳上分析 适 配胶的缓冲液和电泳缓冲液不是 同时配置 同时配置 电泳缓冲液高出液面
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