五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究

1 / 5五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究作者：王晓平,段丽菊，陈晓白，李丽梅，陆奇丰，李鉴清【摘要】 目的研究五指毛桃水提液体外抗菌作用，为其在临床的应用提供依据。方法制备五指毛桃水提液，采用圆滤纸片法测定其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、黄曲霉的抗菌效果;采用圆滤纸片-二倍连续稀释法测定其最低抑菌浓度。结果在一定的浓度下，五指毛桃水提液对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌均具有抑制作用，最低抑菌浓度均为 1g /ml，而对黑曲霉、黄曲霉没有抑制作用。结论五指毛桃水提液对细菌具有较强的抑制作用，具有良好的开发前景。 【关键词】 五指毛桃; 体外抗菌; 最低抑菌浓度五指毛桃 Radix fici Hirtae 为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vah1.的干燥根，又名“南芪” “五爪龙” “五指牛奶” “土北芪”1。五指毛桃味辛、甘，性平，具有健脾利湿、益肺止咳、舒筋通络的功效，在临床上主要用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症2。原植物分布在我国南部及西南部地区，因疗效独特而在华南地区较为广泛地应用。五指毛桃具有抗炎镇痛作用，在临床上用来治疗慢性盆腔炎、慢性支气管炎、肝2 / 5炎、膀胱炎、肺结核等病3，4。但其药理研究报道较少，初次对其水提液的抗菌作用进行了研究，为其在临床的应用提供实验依据。1 材料实验菌种金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus，枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis，大肠杆菌Escherichia coli，黑曲霉 Aspergillus niger，黄曲霉Aspergillus flavus 均由本系微生物与制药工程实验室提供。试剂和仪器五指毛桃购于玉林市中药材市场。牛肉膏蛋白胨培养基，查氏培养基。细菌培养箱、低温离心机等。2 方法五指毛桃水提液的制备称取五指毛桃 200g，加蒸馏水 10 倍，浸泡 1h，加热煮沸后文火煎煮 2h，趁热滤取药液。药渣再加 5 倍水，煎煮 1h 后取滤液。2 次滤液合并后，加热浓缩，药液浓缩至 4g/ml。115灭菌 30 min，置 4冰箱保存备用5。细菌悬液的制备将菌种分别接种到相应斜面培养基上，置于恒温箱中活化，细菌和霉菌的活化条件分别为28下培养 48h、37下培养 24h。经活化后的菌种用生理盐水稀释到 106CFU/ml。3 / 5体外抗菌实验抑菌圈的测定采用圆滤纸片法。取已灭菌的 6 mm圆滤纸片，浸入五指毛桃水提液中浸泡 2h 后取出，放到无菌操作台中晾干。将 5 种菌悬液各取 ml 分别涂布于相应的培养基中，制成含菌平板。用灭菌镊子夹取圆滤纸片置于含菌平板表面，每个平板放 3 片，各滤纸片的距离大致相等，纸片距平板边沿大于 1 cm，用灭菌蒸馏水设阴性对照，每个菌种做 3 个平行。将平板置于恒温箱中培养(细菌 37下培养 24 h，霉菌 28下培养 48 h)。用游标卡尺测其抑菌直径，取 3 个平行的平均值6。最低抑菌浓度的测定采用圆滤纸片-二倍连续稀释法。取五指毛桃水提液原液 5ml，二倍递减浓度稀释,即将药液依次按 12，14，18，116，132 的比例进行稀释,最终药液的质量浓度依次为 2，1， ， ， g/ml。取已灭菌的圆滤纸片分别浸入上述提取液中浸泡 2h，置于无菌操作台晾干。其余操作同“”项。以有抑菌圈的最低浓度为五指毛桃的最低抑菌浓度7。3 结果抑菌圈测定结果五指毛桃对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和黄曲霉这 5 株菌种的抑菌圈直径测定结果见表 1 表 1 五指毛桃水提液对 5 株菌种的抑菌圈直径 mm 由表 1 可知，五指毛桃水提液对金黄色葡萄4 / 5球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有明显的抑制作用，而对黑曲霉、黄曲霉无抑制作用。 最低抑菌浓度的测定结果不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度测定结果见表 2 表 2 五指毛桃水提液对 3 株菌种最低抑菌浓度的测定结果五指毛桃水提液浓度 C/gml-由表2 可知，不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果相似，最低抑菌浓度均为 g /ml。4 讨论近年来，由于抗生素的不合理使用，临床耐药菌株不断增加，致使临床感染死亡率不断增高，减少耐药菌株的生成和研制新的抗菌药物已成为 21 世纪医学界的重要课题。中药几千年来为中国人的健康作出了重大贡献，在现代预防和控制细菌性感染疾病方面也发挥了积极作用。由于中药的特殊性，细菌较少对中药产生耐药，而且中药具有来源广泛，费用低廉等优势。因此，研究和开发抗菌中药对解决耐药菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义。五指毛桃是华南地区常用的中药材之一，在民间和临床运用广泛。尤其是广东河源五指毛桃生产基地建立以5 / 5后，以五指毛桃为原料的多种产品相继进入市场。对五指毛桃水提液进行体外抗菌实验研究，初步证明五指毛桃对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 3 种细菌有较强的抑制作用，其抑菌主要机理为：干扰细胞壁合成，损伤胞浆膜，影响细胞蛋白合成，影响核酸合成，干扰遗传密码复制等8。对五指毛