白细胞计数实验报告

白细胞计数和分类 目的 掌握血涂片制备的操作要领 瑞氏染色方法 正常外周血五种白细胞形 态特点 原理 各种白细胞必须经过染色 才易于区分其类别 常用者为瑞氏 Wright s 染色法和姬姆萨 Giemsa 染色法 测定外周血液中各种白细胞的相对 比值 以观察其数量 形态和质量变化 通过显微镜观察染色血涂片 计算血液中各类白细胞的百分率 称为白细胞分类计数 利用白细胞总 数和各类白细胞的百分率 即可计算每 mm3 血液中各类白细胞的绝对值 实验器材 香柏油 盖玻片 推片 采血针或注射器 小滴管 消毒棉球 瑞 氏染液 pH6 4 6 8 磷酸盐缓冲液 蒸馏水 计数板及专用盖片 针 1ml 刻度移液管 1ml EP 管 光学显微镜 20ul 刻度移液管 推片 实验步骤 白细胞分类 1 血片制作 取一滴血 滴于洁净无油脂的玻片一端 左手持玻片 右手再取边缘光 滑的另一玻片作为推片 将推片边缘置于血滴前方 然后向后拉 当与血滴接 触后 血即均匀附在二玻片之间 此后以二玻片约呈 30 45 度的角度平稳地向 前推至玻片另一端 推时角度要一致 用力应均匀 即推出均匀的血膜 血膜 不可过厚 过薄 将制好的血涂片晾干 不可加热 注 1 良好涂片标准 呈头 体 尾舌形 血膜厚薄适宜 两边留有空隙 2 涂片好坏与下列因素有关 1 血滴大小 2 推片与玻片之间角度 3 推片速度 2 血涂片的染色步骤 1 用蜡笔在血膜两端各划一道线 以免染料外溢 置涂片于染色架上 2 滴加瑞氏染液 共计七八滴数 以盖满血膜为度 静置 1 分钟 3 再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液 轻轻摇动 并轻吹液体使染色液与缓 冲液混合均匀 静置 15 分钟 4 用清水冲洗 切勿先倾去染液再冲洗 否则沉淀物附于血膜上不宜出 去 冲洗后斜置血涂片于空气中干燥 或先用滤纸吸取水分迅速干燥 即 可镜检 3 白细胞分类计数 先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀 然后加一滴 香柏油于血膜厚薄均匀处 一般在体尾交界处 在油镜下由此处开始按其 形态特征进行分类计数 计数移动时避免重复 根据所见到的 100 个白细 胞 记录各种白细胞所占的百分数 4 各类白细胞的形态特征 嗜中性白粒细胞 圆形 胞浆淡红色 胞浆内有多量紫红色细小颗粒 染 色不佳时则看不清楚 核为蓝紫色 嗜酸性白细胞 大小 形态与中性白细胞大体相似 唯胞浆内含有粗大的 鲜红色颗粒 核多数为两叶 嗜碱性白细胞 大小 形态与中性白细胞大体相似 但胞浆内含有粗大的 深蓝色 常遮盖在核上 核分叶不明显 淋巴细胞 分大小两种 小淋巴细胞圆形 核染成深紫色 圆形或肾形 胞浆很少 常呈一小片月牙状 染成蓝色 大淋巴细胞 核圆形或肾形 胞浆相对较多 染成天蓝色 在胞浆与核之间有淡染带 有时内含少数紫 红色大颗粒 单核细胞 核染成紫色 其染色质疏松 核形不规则 胞浆较多 染成浅 灰蓝色 白细胞计数 加稀释液用吸管吸取白细胞稀释液 0 38ml 于小试管中 吸取血液用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血 20ul 擦去管尖外部余血 将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部 轻轻放出血液 并吸取上层白细胞 稀释液清洗吸管 2 3 次 混匀将试管中血液与稀释液混匀 待细胞悬液完全变为棕褐色 冲池再次将小试管中的细胞悬液混匀 用滴棒蘸取细胞悬液 1 滴 充入 改良 Neubauer 计数板的计数池中 室温静置 2 3min 待白细胞完全下沉 计数在低倍镜下计数四角 4 个大方格内的白细胞总数 计算 白细胞总数 4 大格白细胞数 N 4 10 20 10 6 N 20 10 9 L 注 计数板上下各一个计数池计数区域分为 9 个大方格 四角的大方格各划分为 16 个中方格 中央大方格划分为 25 个中方格 四角的大方格为白细胞计数区 大方格四边压 线细胞计左不数右 计上不数下 实验结果 白细胞总数 白细胞 35 42 39 37 20 10 9 7 65 10 9 L 中性粒细胞 65 个 占 65 单核细胞 5 个 占 5 淋巴细胞 27 个 占 27 嗜酸性粒细胞 3 个 占 2 嗜碱性粒细胞 1 个 占 1 注意事项 1 采血时针刺深度必须适当 不能过度挤压 防止组织液渗入或采血时间太 长引起血液凝固 2 白细胞总数在参考范围内 大方格间的细胞数不得相差 10 个以上 两次重 复计数误差不得超过 1