预封装·质粒小提试剂盒说明书

1 预封装预封装 质粒小提试剂盒 质粒小提试剂盒 48孔板 孔板 Plasmid DNA Extraction Kit Magnetic Beads 目录号 目录号 PDEP P 5001 运输条件 运输条件 2 25 保存条件 保存条件 主试剂板 2 8 号溶液2 8 保存 其他组分室温 试剂盒组成 试剂盒组成 Kit Component 试剂盒组成试剂盒组成 4块板块板 适用于适用于16 4份样品份样品 24块板块板 适用于适用于16 4份样品份样品 PDEP Buffer 1 质粒悬浮液 15mL80mL PDEP Buffer 2 质粒裂解液 15mL80mL PDEP Buffer 3 质粒复性液 25mL150mL Elute Buffer 洗脱液 5mL10mL 试剂 RNase A 100mg mL 60 L320 L 预封装部分试剂板16T 板 4 板16T 板 24 板 耗材磁棒套2 个 包 4 包2 个 包 24 包 特别说明 特别说明 1 使用前请将 使用前请将 RNase A 全部加入全部加入 PDEP Buffer 1中 并置于中 并置于4 保存 保存 2 使用前先检查 使用前先检查 PDEP Buffer 2 是否出现浑浊 如有混浊现象 置于是否出现浑浊 如有混浊现象 置于37 水浴几分钟 即可恢水浴几分钟 即可恢 复复 澄清 澄清 PDEP Buffer 2 和和 PDEP Buffer 3 使用后应立即盖紧盖子 使用后应立即盖紧盖子 3 本操作指南经公司反复验证 使用前请仔细阅读 并且按照操作指南的建议操作 本操作指南经公司反复验证 使用前请仔细阅读 并且按照操作指南的建议操作 预封装 质粒小提试剂盒 48 孔板 2 产品简介产品简介 试剂盒中独特分离作用的磁珠和缓冲液系统 可从 2 0 5 0 mL 菌液中分离纯化 10 20 g 高质量质粒 DNA 磁珠表面修饰有特殊化学基团 在一定缓冲液体系中对质粒 DNA 具有极强的特异性亲和力 而当缓冲液体系改变时 磁珠可逆地释放质粒 DNA 从 而达到快速分离纯化质粒 DNA 的目的 此外 复性液中含有特殊磁珠 可最大限度的特 异性结合并去除蛋白质及其它杂质 从而保证提取质粒 DNA 的纯度 本试剂盒适用于直接在 48 孔板中完成摇菌 收菌 重悬 裂解和复性 预分装的试 剂板直接在自动化核酸提取仪上完成质粒 DNA 提取 大大降低了实验人员的工作量以及 实验中的人为误差 使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可用于各种分子生物学实验 如酶切 测序 文库筛 选 连接和转化等 注意事项注意事项 1 试剂板严禁反复冻融 以免磁珠受到损害 2 所有离心步骤均为室温下进行 其中复性步骤冷冻离心效果更佳 3 提取的质粒DNA量与细菌的培养浓度 宿主菌 质粒拷贝数等因素有关 4 复性液使用前需充分摇匀使磁珠充分重悬 5 质粒复性后的离心步骤应尽可能轻拿轻放48孔板 保证蛋白质和基因组沉淀紧附于 48孔板底部 以避免转移上清液时吸取到杂质 6 试剂板使用前务必颠倒混匀使磁珠充分重悬 7 试剂板使用前务必使用甩板机进行离心 500rpm 1min 使试剂及磁珠集中到孔板 底部 8 使用前小心撕去铝箔封口膜 避免孔板振动 防止液体溅出 试剂盒说明试剂盒说明 样品类型样品类型样品量样品量DNA提取范围提取范围单样品提取时间单样品提取时间 菌液1 0 5 0mL10 20 g 40min 自备仪器和试剂自备仪器和试剂 1 英芮诚ETP 300型核酸提取仪 2 涡旋混合仪 3 甩板机 4 离心机 预封装 质粒小提试剂盒 48 孔板 3 仪器自动提取操作步骤仪器自动提取操作步骤 以英芮诚 以英芮诚ETP 300型全自动核酸提取仪为例 同步可完成型全自动核酸提取仪为例 同步可完成32个样本的提取 个样本的提取 1 准备准备 1 从试剂盒中取出独立包装的试剂板 用甩板机 500rpm 离心 1min 使试剂及磁 珠都集中到孔板底部 使用前小心撕去铝箔封口膜 避免孔板振动 防止液体溅出 2 将 RNase A 全部加入溶液 PDEP Buffer 1 中 将其与 PDEP Buffer 3 于 4 保存待用 2 收集菌体 收集菌体 将 48 孔板培养的菌液做好记录 4000 rpm 离心 5 min 收集菌体 弃培养液 将离 心后的 48 孔板倒扣在清洁的吸水纸上数次 尽量去除残留的培养液 备注 不同品牌和型号的甩板机离心效果或有差异 请在收菌时和复性后离心时确保沉淀紧附于 48 孔板底 3 菌体悬浮 菌体悬浮 向收集好的菌体沉淀中加入 200 L 号溶液 质粒小提悬浮液 将 48 孔板在 4000rpm 下涡旋混合 1 2min 确保菌体彻底重悬 4 菌体裂解 菌体裂解 2min 向菌体悬浮液中加入 200 L 号溶液 质粒小提裂解液 开始 2min 倒数计时 将 48 孔板在 400 500 rpm 温和涡旋混合 1min 使菌体充分裂解 直到裂解液基本澄清 静置至 2min 倒计时结束 备注 如果菌体较多 可以适当延长裂解时间至 4min 但不宜超过 4min 菌体裂解时间过长会 使质粒难以复性 5 质粒复性 质粒复性 向菌体裂解液中加入 350 L 号溶液 质粒小提复性液 将 48 孔板在 700rpm 温和涡旋混合 1min 充分混匀 比较好的状态是整个孔板内的沉淀为蛋花状 将 48 孔板在甩板机上 4000rpm 低温离心 15min 若沉淀未贴附于孔板底部 继续 离心 5min 使之在孔道底部形成白色沉淀 备注 1 号溶液 质粒小提复性液 务必提前 4 冷藏 并且每次吸取前尽量摇晃均匀 2 如果离心后上清中还有白色沉淀 或发现孔道底部沉淀松散 可以再次离心 10min 6 自动化提取 自动化提取 转移质粒复性后的上清液 600 L 到预分装 试剂板的 2 8 列孔位 吸取上清时切勿 吸取到沉淀 以免质粒 DNA 的污染 7 上机提取 上机提取 将已加样的试剂板放入 ETP 300 型核酸提取仪中 并插入磁棒套 打开仪器的操作程序 参照下表设置仪器参数 并运行程序 预封装 质粒小提试剂盒 48 孔板 4 质粒DNA提取 程序各参数设置如下 如机器和说明书不一致 请以说明书为准 8 核酸转