注射用丹参酮ⅱa磺酸钠细菌内毒素检查法

1 / 6注射用丹参酮A 磺酸钠细菌内毒素检查法【摘要】目的建立检测注射用丹参酮A 磺酸钠中内毒素的试验方法。方法运用干扰初筛法对供试品进行干扰试验，采用鲎试剂法对样品中的内毒素进行检测。 结果注射用丹参酮A 磺酸钠在药液稀释浓度为 8 mgml-1 以下时，与鲎试剂反应无干扰。结论所采用的细菌内毒素检查法可用于注射用丹参酮A 磺酸钠的内毒素检查。 【关键词】 注射用丹参酮A 磺酸钠 细菌内毒素检查法 干扰试验Abstract：ObjectiveTo establish a method for detection of bacterial endotoxin in sodium tanshinone IIA sulfonate interfering experiment, tachypleus amebocyte lysate(TAL) was performed to detect the bacterial endotoxin in sodium tanshinone IIA sulfonate injection. ResultsSodium tanshinone IIA sulfonate injection did not interfere with limulus agent when the injection was diluted to the concentration lower than 8 mgml-1. ConclusionThe bacterial endotoxin test is suitable for the detection of bacterial endotoxin in sodium 2 / 6tanshinone IIA sulfonate injection.Key words：Sodium tanshinone IIA sulfonate injection; Bacterial endotoxin test; Interference experiment细菌内毒素检查法又称鲎试剂法，是利用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应，来检查药品中内毒素含量是否符合规定的方法，具有快速、灵敏，重复性好，操作简便的特点。丹参酮A 磺酸钠为丹参酮A 经磺化而成的水溶性钠盐，它能增加冠脉血流量，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板集聚及抗血栓形成1 ，临床上主要用于冠心病、心绞痛等症的治疗。本检查法采用两个厂家的鲎试剂对 3批注射用丹参酮A 磺酸钠进行了细菌内毒素检查的干扰试验。现报道如下。1 材料注射用丹参酮A 磺酸钠；鲎试剂；细菌内毒素工作3 / 6标准品；细菌内毒素检查用水。XW-80 旋涡混合器；KXB-12A 恒温培养箱。其余实验材料均经 250烘烤 1 h。2 方法与结果鲎试剂标示灵敏度的复核以细菌内毒素检查用水溶解内毒素工作标准品，并配制成含内毒素 ，系列浓度的溶液。每一浓度平行做 4 支，同时用细菌内毒素检查用水做 2 支阴性对照，记录结果，并按式 C = antilg 计算 C 值。结果表明：每一批鲎试剂灵敏度测得值均在 范围内，符合要求，可按标示灵敏度值使用。结果见表 1。表 1 鲎试剂灵敏度复核结果内毒素限值的确定本品临床用法用量为 4080 mg60 kg-1，故L= EUKg-1 mgkg-1h-1= EUmg-14 / 6综合考虑本品临床用药的相关因素，将本品细菌内毒素限值确定为 EUmg-1。干扰试验预试验根据最小有效稀释浓度，c=/L，可知对应于灵敏度()， ， ， EUml-1TAL，注射用丹参酮A 磺酸钠稀释浓度分别为， 5， 8， 38 mgml-1，用BET 水将供试品(批号：040101)稀释成以上 4 个浓度备用。 取 16 支 为 EUml-1 的 TAL，其中 8 支作为供试品阴性对照 NPC，即分别用 m1 上述稀释的 4 个浓度供试品复溶 TAL，再各加 mlBET 水，每一浓度供试品 2 支反应管；另 8 支作为供试品阳性对照 PPC，即分别用 ml 上述稀释的4 个浓度供试品复溶 TAL，再各加 2( EUml-1)的内毒素溶液 ml，每一浓度供试品 2 支反应管。结果见表 2。本品稀释至 8 mgml-1 以下时，可能对细菌内毒素与鲎试剂的反应无干扰作用。故拟采用 为 EUml-1 的 TAL，本品 8 mgml-1 稀释浓度作正式的干扰试验。表 2 样品干扰试验预试验结果 供试品干扰试验用 BET 水和 mgml-1的供试品液分别复溶 TAL( 为 EUml-1)，然后将每一供试品液复溶的 TAL 分别分为 4 列，每列 4 支；对应各列分别加入含细菌内毒素 ， 4 种浓度的溶液。另5 / 6取 BET 水和 3 批供试液各 2 支作为阴性对照管。于3738恒温 60 min，观察结果，并按Es=antilg，Et=antilg 计算 Es 和 Et。结果 Es、Et在 之间，且 Et /Es 的值在之间，可以认为 8 mgml-1 的供试品浓度对细菌内毒素与鲎试剂的反应无干扰作用。表 3 供试品干扰试验结果供试品细菌内毒素检查取 3 批供试品用细菌内毒素检查用水稀释为 8 mgml-1，以灵敏度为 EUml-1 的鲎试剂依法检查。结果见表 4。结果 3 批样品均符合规定。表4 供试品细菌内毒素检查结果3 讨论由干扰预试验可知，NPC 系列反应全部为阴性，PPC系列反应在供试品稀释浓度 5 mgml-1 时为阴性， 8 mgml-1 时为阳性。说明供试品在较高浓度时对鲎试剂与细菌内毒素的反应有抑制作用，而将供试品