淡竹叶中总黄酮提取工艺研究

1 / 6淡竹叶中总黄酮提取工艺研究【摘要】 目的 用正交试验法优选淡竹叶中总黄酮的提取工艺。方法 以 20 g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择乙醇用量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素,采用正交试验法 L9(34)确定醇提取淡竹叶中总黄酮的最佳工艺。结果 最佳提取工艺条件为 75%乙醇 18倍量提取 h,共提取 1次,乙醇用量为显著影响因素。结论 首次进行了淡竹叶总黄酮正交提取工艺的研究,结果比较可靠。 【关键词】 淡竹叶；总黄酮；正交试验Abstract：Objective To study the optimum ethanol extraction process of total flavonoids in Lophatherun gracile Brongn. Methods The extraction of total flavonoids was choosen as the assessment index. Ethanol volumn extracting time and times were the studing factors. The optimum ethanol extraction process was selected with the orthogonal design. Results The optimum ethanol extracting process conditions were as follows：adding 18 fold of 75% ethanol, extracting for h and one in all. Ethanol dosage was the predominant influencing factor. Conclusion This optimum extradion process 2 / 6of total flavonoids in Lophatherum gracle Brongn is reliable.Key words：Lophatherum gracile Brongn；total flavonoids；orthogonal design淡竹叶为禾本科多年生草本植物淡竹叶(Lophatherum gracile Brongn.)的干燥茎叶,主产于河南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西等地。该药味甘、淡、寒,归心、胃、小肠经,具有清热除烦、利尿的功效,多用于热病烦渴、口舌生疮、小便赤色淋痛等症1。淡竹叶中含有的黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性2,因而有效地开发和利用淡竹叶中黄酮类化学成分具有重要意义。笔者选择总黄酮提取量3为评价指标,利用 L9(34)正交试验,筛选醇提取淡竹叶中总黄酮的工艺条件,可为新药研究和充分利用淡竹叶药材资源提供参考依据。1 仪器、试剂与材料HH-S型水浴锅(巩义市英峪华仪器厂)；RE-52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHZ-D()循环水式真空泵(巩义市英峪华仪器厂)；754 型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；AY220 电子天平(岛津)；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所,批号为3 / 60080-9705；淡竹叶产地为浙江,加工单位为安徽丰原铜陵中药饮片有限公司,经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定,粉碎后备用。医用酒精；甲醇 AR级；蒸馏水；其余所用试剂均为分析纯。2 方法与结果标准曲线的制备精密称取在 105 干燥下的芦丁对照品 0 g,置100 mL 容量瓶中,加适量甲醇溶解,定容至刻度,摇匀,即得对照品溶液(每 1 mL中含无水芦丁 mg)。精密吸取上述对照品溶液、 、 、 、 、 、 mL,分别置 25 mL容量瓶中,各加水至 mL,加 5%亚硝酸钠溶液 1 mL,混匀,放置 6 min,加 10%硝酸铝溶液 1 mL,摇匀,放置 6 min,加 4%氢氧化钠试液 10 mL,再加水至刻度,摇匀,放置 15 min,进行全波长扫描,在 510 nm处均有最大吸收。以 510 nm 得的吸收度 A对浓度 C回归,以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程为 A= 5 (r= 4)。在 848 g/mL 的范围内,浓度与吸收度有良好的线性关系。总黄酮提取量的测定 4 / 6按项下方法制备样品。精密称定一定量的干燥品,用甲醇定容至 25 mL 容量瓶中,再精密吸取 3 mL,置 25 mL容量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至 mL”起,依法测定吸光度。按照 XX版中国药典(一部)4规定的方法测定。醇提工艺条件的选择醇提浓度的选择将浙江产淡竹叶药材粉碎,称取 20 g/份,共 3份,加15倍量的 50%乙醇,回流提取 2 h(85 ),3 份提取液分别进行抽滤,将滤液在旋转蒸发仪上浓缩(80 , Mpa),浓缩液在水浴锅上蒸至成稠膏状,再放置真空干燥箱中(80 , Mpa),24 h后取出,取少量醇浸膏测定总黄酮提取量。同法测定 60%、75%、95%醇提液的总黄酮提取量(见表 1)。结果表明,以 20 g原药材中总黄酮提取量为考察指标,75%醇提液得到的总黄酮量最多,故采用 75%乙醇提取的工艺。表 1 醇提浓度的选择提取工艺的正交试验按照上述单因素考察结果,按表 2中的因素水平进行正交试验。表 2 因素水平表正交试验方法与结果将淡竹叶药材粉碎后,称取 20 g,用 L9(34)正交表安5 / 6排试验(见表 3)。将回流提取液分别过滤,滤液在旋转蒸发仪上浓缩(80 , Mpa),浓缩液放置在蒸发皿中于水浴锅上蒸至成稠膏状后,放置真空干燥箱中(80 , Mpa),24 h后取出,于干燥器中干燥 1 h后称量,再按照项下方法测定总黄酮的提取量,结果见表 3。表 3 正交试验设计表及结果方差分析(见表 4)表 4 方差分析表注：(2,2)=19。由上述直观分析结果可知,以总黄酮提取量为考察指标,最佳提取工艺条件为 A1B2C1,即 18倍量 75%乙醇回流提取 1次,每次 。方差分析结果显示：A 因素(加醇量)对总黄酮提出有显著影响,B 因素(提取时间),C 因素(提取次数)对总黄酮提出无显著影响。结合生产实际,从降低生产成本出发,对提取条件作适当调整,确定醇提工艺条件为 A1B3C1,即 18倍量 75%乙醇回流 1 h,提取 1次。验证试验