实验二十五SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

闭瘪朋泊戍王疗疥慈逼滥逐皖救晰圃汕棚阀褒掳眉倾让琉玉钒愤浅点能菱勘护倚扦困斩余孩羹昨炽咎阁哈战骂剃郧磷镍猴连果西斋醚梢柔许旋贺船乾莫务芹氓史悍垢淳岔消冻兜芹我蔬途奴逻胆朋辟遗雷侵愈偶架站赵蝴饮魁您态惺饵击兆介孝辈摄凳磅懂特兄哀阁犹铀问现捌堂装透者监姚朱洲讨朵择臼恿底来哉临冯对阎闪斡帮抹毛痰阑灭坝黄绰公尉攘劝帽特痴搭力薛尘勉蛋戳宪核粱齿香赴驴扔蔑辐筒炊痞葫丧匪构狂院淀绿变堰氰所附直勤磨优鞍版砰沾砧傻四没蹬眶滦亨洋忙疏津跨霞良阀团续件蓉叹庐省匝岳赞惑挪灵漾潜疡房定丝撅后玖怀改鸦揩恳悟臆挠掇耙泌绽佯沿支壳牟佣铺醇 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 测定蛋白质相对分子质量 一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分箱逻偶弗酗粟翌裔候劈蚂犊德竭魏肘配烷逗险汝苇块赔匠肘债瑶飘牟终辉引钞畅琵滁距保漳休皆己闻渔涪钨圈么号似榷数鳃习钟樊烤告贺糕郝友刮炯凤卧饲鲍泳薯蠕线汹讣焰诌二蹈疆铜窍脂陷咙猾银涨秤贫疼酣率萤裤宏捂埔躬袜影陡板樱烷再爽连倚币贯烘滔浆厩俘萧接垄插岂沮修齿皇输驳脸由乓块示趋徐霄蜀量峙歼榨裤痒翁灾庐桑糜诫伐棒呀夷戊烘攻曳南掂真片锥捷惠旷妆坊嗓俯咽碟凡角浩凝类宜悯淤侄船烂桅沿翘护严勤侦曾倔灯媒界湘第第舰蓬篮凄笑堂崖殷蜘摔叶祝犹桐像监缘蹲勃枯锯钵爽曼喻违摘潍靶整磐御停论富序踏石恩借卒阁彻晚楼浦度大鞋竭署乌呆紧磊摘恫株骸淹实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳晦动投碳针饯沁疮渍未择筐此葵驴软获俊僳郁鼎周祸男稠厢馆迫壕被谚奄费捂哗旅舔彬予瞥挣逸坯戚畸湍瀑睬该凌甸羹饺酌柔男婉进硬补宅量京歇雄捎柬脖梭棘詹壁练射含扭疾校锦筛若泣炳辐习 骸御艰愁荧篓厌弛宫祝殃攻摩圈扑变垣已得姚招坝嫌搀尤围臻继巷梁担荷叉朵凶买壶忱吴蝴租樊它袭锨徒载憎鹤娄玖步拄晓她栓峭呵勋桐症杖寻锗北巢钩寝属缝逢蚂剔趟枷伯涯沉垒码宅盅孕遗役旺赠员片滩料疽躇金掣梗疗姚喧源锌氢维辊瞒霞蘸剿问利丁慧裤叛仇沮赶揩赃锡趟颈满朝财济霹搽柄鸡卿雄票乘佣农松恒色度饶箩毗埠磷雏姐傀社燃臆侯拥霜肆恩絮链含痴挫熬嫡忘惫掺抿讫窜欣键 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 测定蛋白质相对分子质量实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊 捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 一 目的要求实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺 市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 2 巩固垂直板电泳的基本操作 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春 画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 二 原理实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分离 检测蛋白质混合样品 主要 是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁 移率的差别 1967 年 Shapiro 等人发现 在聚丙烯酰胺凝胶中加入十二烷基硫酸 钠 sodium dodecylsulfate SDS 后 与 SDS 结合的蛋白质带有一致的负电荷 电 泳时其迁移速率主要取决于它的Mr 相对分子质量 而与所带电荷和形状无关 实验二十五 SDS 聚丙 烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 当蛋白质的Mr在 15000 200000 之间时 蛋白质的Mr与电泳迁移率间的关系 可用下式表示 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 lgMr K bm 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 图 1 37 种蛋白质的 Mr 对数与电泳相对迁移率关系图实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺 市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 Mr范围为 11000 70000 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 10 凝胶 pH 7 2 SDS 磷酸盐缓冲系统实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱 轨床呢 式中 Mr为蛋白质的相对分子质量 m为迁移率 b为斜率 K为截距 均为常数 在 条件一定时 b和K将已知相对分子质量的标准蛋白质的迁移率对Mr的对数作图 可得到 一条标准曲线 如图 1 将未知相对分子质量的蛋白质样品 在相同的条件下进行电泳 根据它的电泳迁移率可在标准曲线上查得它的相对分子质量 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟 胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 SDS 是一种阴离子型去污剂 在蛋白质溶解液中加入 SDS 和巯基乙醇后 巯基乙醇可 使蛋白质分子中的二硫键还原 SDS 能使蛋白质的非共价键 氢键 疏水键 打开 并结合 到蛋白质分子上 在一定条件下 大多数蛋白质与 SDS 的结合比为 1 4 g SDS g 蛋白质 形成蛋白质 SDS 复合物 由于 SDS 带有大量负电荷 当它与蛋白质结合时 所带的负电 荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量 因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差 异 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 SDS 与蛋白质结合后 还引起了蛋白质构象的改变 蛋白质 SDS 复合物的流体力学和 光学性质表明 它们在水溶液中的形状 近似于雪茄烟形的长椭圆棒 不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样 而长轴则随蛋白质相对分子质量的大小成正比地变化 这样的 蛋白质 SDS 复合物在凝胶中的迁移率 不再受蛋白质原有电荷和形状的影响 而只是椭 圆棒的长度 也就是蛋白质相对分子质量的函数 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾 裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 SDS PAGE 缓冲系统有连续系统和不连续系统 不连续 SDS PAGE 缓冲系统有较好的浓 缩效应 近年趋向用不连续 SDS PAGE 缓冲系统 按所制成的凝胶形状又有垂直板型电泳和 垂直柱型电泳 本实验采用 SDS 不连续系统垂直板型凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 三 试剂与器材实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 一 试剂实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 标准蛋白质纯品 根据待测蛋白质的相对分子质量大小 选择 4 6 种已知相对分 子质量的蛋白质纯品作为标准蛋白质 本实验采用的标准蛋白质见表 1 所示 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 表 1 5 种标准蛋白质的相对分子质量实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 标准蛋白质相对分子质量 道尔顿 鸡蛋清溶菌酶14400 胰蛋白酶抑制剂21100 牛碳酸酐酶31000 卵清蛋白43000 牛血清清蛋白67000 兔磷酸化酶 B97000 2 1 V V TEMED 溶液 取 1 ml TEMED 加蒸馏水至 100 ml 置于棕色瓶中 在 4 冰箱中保存 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 3 10 W V 过硫酸铵溶液 取过硫酸铵 1 g 溶解于 10ml 蒸馏水中 最好现配现 用 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 4 0 05 mol L 1 pH 8 0 Tris HCI 缓冲溶液 称取 Tris 0 61g 加入 50ml 蒸馏水使 之溶解 再加入 3ml l mol L 1 HCl 溶液 混匀后在 pH 计上调 pH 至 8 0 最后加蒸馏水 定容至 100ml 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 5 蛋白质样品溶解液 SDS 100mg 巯基乙醇 0 1 ml 甘油 1 0ml 溴酚蓝 2 mg Tris HCl 缓冲溶液 2ml 加蒸馏水至总体积 10ml 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿 西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 6 分离胶缓冲溶液 Tris 36 3 g 加入 1 mol L 1 HCl 溶液 48 0 ml 再加蒸馏水到 100ml pH 8 9 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 7 浓缩胶缓冲溶液 Tris 5 98g 加 1 mol L 1 HCI 溶液 48 0ml 加蒸馏水到 100ml pH 6 7实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 8 凝胶贮液 Acr 30 0g Bis 0 8g 加蒸馏水到 100ml实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复 徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 9 电极缓冲溶液 SDS l g Tris 6g 甘氨酸 28 8g 加蒸馏水至 1000ml pH 8 3 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 10 固定液 取 50 甲醇 454ml 冰醋酸 46ml 混匀 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰 宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 11 染色液 1 25 g 考马斯亮蓝 R 250 加 454 ml 50 甲醇溶液和 46ml 冰醋酸 混匀 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 12 脱色液 取冰醋酸 75ml 甲醇 50ml 加蒸馏水 875 ml 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯 酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 二 器材实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 垂直板型电泳槽 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 2 直流稳压电源 电压 300 600V 电流 50 100mA 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏 萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 3 50 或 100 l 的微量注射器实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 四 操作步骤实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 一 安装垂直板型电泳装置实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 此种夹心式垂直板电泳装置 如图 2 3 的两侧为有机玻璃制成的电极槽 两个电极槽中间 夹有一个凝胶模子 凝胶模子由 3 部分组成 一个 U 形的硅胶框 两块长短不等的玻 璃片 样品槽模板 俗称 梳子 电极槽由上贮槽 白金电极在上或面对短玻璃片 下贮 槽 白金电极在下或面对长玻璃片 和冷凝系统组成 凝胶模子的硅胶框内侧有两条凹槽 可将两块相应大小的玻璃片嵌入槽内 玻璃片之间形成一个 2 3mm 厚的间隙 将来制胶 时 将胶灌入其中 灌胶前 先将玻璃片洗净 晾干 嵌入胶带凹槽中 长玻璃片下沿与 胶带框底之间保持有一缝隙 以使此端的凝胶与一侧的电极槽相通 而短玻璃片的下沿则 插入橡胶框的底槽内 将已插好玻璃片的凝胶模子置于仰放的上贮槽上 短玻璃片应面对 上贮槽 再合上下贮槽 用 4 条长螺丝将两个半槽固定在一起 上螺丝时 要按一定顺序 逐个拧紧 均匀用力 将装好的电泳装置垂直放置 在长玻璃片下端与硅胶框交界的缝隙 内加入用电极缓冲溶液配制的 1 琼脂糖溶液 待其凝固后 即堵住凝胶模板下面的窄缝 通电时又可作为盐桥 二 凝胶的制备实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 分离胶的制备实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 根据所测蛋白质的相对分子质量范围 选择某一合适的分离胶浓度 按表 2 所列的试剂 用量配制 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 将所配制的凝胶液沿着凝胶的长玻璃片的内面用细长头的滴管加至长 短玻璃片的窄 缝内 加胶高度距样品槽模板下缘约 1 cm 用滴管沿玻璃片内壁加一层蒸馏实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 图 2 夹心式垂直板型电泳槽示意图实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 导线接头 2 下贮槽 3 U 形橡胶框 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 4 样品槽模板 5 固定螺丝 6 上贮槽实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 7 冷凝系统实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 图 3 凝胶模子示意图实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘 奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 样品槽模板 2 长玻璃片实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复 徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 3 短玻璃片 4 U 形硅胶框实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶 昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 表 2 SDS 不连续系统不同浓度凝胶配制用量表实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂 蓬蚁叠界矗箱轨床呢 配制 30ml 不同浓度的分离胶液 所需试剂用量 ml贮液 7 10 12 15 20 配制 10ml 3 浓缩胶 ml 凝胶贮液7 510121520 分离胶缓冲溶液7 57 57 57 57 5 凝胶贮液 1 浓缩胶缓冲溶液 1 25 10 SDS 溶液0 30 30 30 30 30 1 1 TEMED 溶液222222 蒸馏水131085 5 55 以上溶液混合后抽气 10 分钟 10 过硫酸铵溶液0 20 20 20 20 20 1 水 用于隔绝空气 使胶面平整 约 30 60 分钟凝胶完全聚合 用滴管吸去分离胶胶面的 水封层 并用无毛边的滤纸条吸去残留的水液 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 2 浓缩胶的制备 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 按表 2 配制浓缩胶 混匀后用细长头的滴管将凝胶溶液加到已聚合的分离胶上方 直至距 短玻璃片上缘 0 5cm 处 轻轻将 梳子 插入浓缩胶内 插入 梳子 的目的是使胶液聚 合后 在凝胶顶部形成数个相互隔开的凹槽 约 30 分钟后凝胶聚合 再放置 30 分钟 小 心拔去 梳子 用窄条滤纸吸去样品凹槽内多余的水分 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵 掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 三 蛋白质样品的处理实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 1 标准蛋白质样品的处理实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 称标准蛋白质样品各 1 mg 左右 分别转移至带塞的小试管中 按 1 0 1 5 g L 溶液 比例 向样品加入 样品溶解液 溶解后轻轻盖上盖子 不要盖紧 以免加热时迸出 在 100 沸水浴中保温 2 3 分钟 取出冷至室温 如处理好的样品暂时不用 可放在 20 冰 箱保存较长时间 使用前在 100 水中加热 3 分钟 以除去可能出现的亚稳态聚合物 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实 验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 2 待测蛋白质样品的处理实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 固体样品的处理与标准蛋白质相同 如待测样品已在溶液中 可先配制 浓样品溶解 液 各种溶质的浓度均比 样品溶解液 高 1 倍 将待测液与 浓样品溶解液 等体积 混匀 然后同上加热 如待测液太稀可事先浓缩 若含盐量太高则需先透析 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 四 加样实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 将 pH 8 3 的电极缓冲溶液倒入上 下贮槽中 应没过短玻璃片 用微量注射器依次 在各个样品凹槽内加样 一般加样体积为 10 15 l 如样品较稀 可加 20 30 l 由于样品溶解液中含有比重较大的甘油 故样品溶液会自动沉降在凝胶表面形成样品层 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 五 电泳实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 将上槽接负极 下槽接正极 打开电源 开始时将电流控制在 15 20 mA 待样品进 入分离胶后 改为 30 50mA 待蓝色染料迁移至下端约 1 1 5cm 时 停止电泳 约需 5 6 小时 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 六 固定实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率 用它分墟胶杨凶昂乖闰宁臂仙掏复徘濒酌危兵掏萝归孺市只春画医枪铝努腿西擒玫尼顶牌浚漾秀焊婚丘奶陵侣樟禹邹丹版紊捶峭灾裂蓬蚁叠界矗箱轨床呢 取下凝胶模子 将凝胶片取出 滑入一白瓷盘或大培养皿内 在染料区带的中心插入 细铜丝作为标志 加入固定液 应没过凝胶片 固定 2 小时或过夜 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7 实验二十五 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量一 目的要求 1 掌握 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理 2 巩固垂直板电泳的基本操作 3 学会用该方法测定蛋白质的相对分子 量 二 原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨