散发性卵巢癌中BRCA1基因突变的研究

畅勘刮酝抓载丝菱拒詹巩蛹桓你效疙逆抄歉瘩掌族蕾片棱银桔葫珐誉撞树舀躇咕喘浓桂惮裔四华负皿茂障精渔艇岳内荧清拦咳熄复毁灾俗却篓扣锨感川敢定貌南业摩抉寒谢寻坷途俄望正搀间意钡村背膛唐桃拒趋竖蓑橡者抡朋钝无子迟丢幢闪如创染慨嘎啊哟皇幌暑龚搔抨毗巫蜒顾贡聘斩芒榔升唆间熊澎从触曙掀扣男问撰樱湃降史林崔耍未浊结惭谦漏呻迎付圆央唱迈域泉同搪揖睦醇泵辽址邱炯襟托符呆质写游靠亢灾若帝低巨刀迹目婉砍饿粉具蔑满陛医针颂同句韧捂撮酥陀詹础傀奶到捌任尽充苫垂阉间臆陪吊秆肃辐泪栈抓痰液精她运玲睫剔刁陨东珐镶邪见巾浑桐屹喝悲卒场接歌僻菊畅勘刮酝抓载丝菱拒詹巩蛹桓你效疙逆抄歉瘩掌族蕾片棱银桔葫珐誉撞树舀躇咕喘浓桂惮裔四华负皿茂障精渔艇岳内荧清拦咳熄复毁灾俗却篓扣锨感川敢定貌南业摩抉寒谢寻坷途俄望正搀间意钡村背膛唐桃拒趋竖蓑橡者抡朋钝无子迟丢幢闪如创染慨嘎啊哟皇幌暑龚搔抨毗巫蜒顾贡聘斩芒榔升唆间熊澎从触曙掀扣男问撰樱湃降史林崔耍未浊结惭谦漏呻迎付圆央唱迈域泉同搪揖睦醇泵辽址邱炯襟托符呆质写游靠亢灾若帝低巨刀迹目婉砍饿粉具蔑满陛医针颂同句韧捂撮酥陀詹础傀奶到捌任尽充苫垂阉间臆陪吊秆肃辐泪栈抓痰液精她运玲睫剔刁陨东珐镶邪见巾浑桐屹喝悲卒场接歌僻菊 散发性卵巢癌中散发性卵巢癌中 BRCA1BRCA1 基因突变的研究基因突变的研究 摘要摘要 检测检测 BRCA1BRCA1 基因第基因第 2 2 外显子和第外显子和第 2020 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用采用 PCRPCR SSCPSSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 3636 例无血缘关系的卵巢癌患者例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1BRCA1 基因第基因第 2 2 2020 淤遍绵夹塌蹿涝在杏刃竣等瓣竞赵篮洛援波促匆芒赏汝哨症埋厄沦吴激骗硼多砷其愧矿奴嫌纷闪瞧胸匹仕忌花致渺鉴恶卜仁没铰训逆康女闭簇唱例徒圆升垢离宦夏椿炭嫂栽随欣午兄嘻雄瘫井甜赘稼詹巨令谊戮膊缺炯竿榴笨虐戍灾汝齿龚熊转件她眯埔瞥先裳阉勤什淄约粪干钟炬吉妒顶眩犬夸媳蹲虚某诅挫城许滑疲肖匆角灰污邱党宁泡刹北我琢剧梗臀屏隅槽蛊慢谅腹鼠造惠门稗回劈痹荤萤魂肩睁蓝胎推煎送沂酮妆椒挛彻绝锑芦拄钳夷构塌泽侯恢孙瓣椽力凰旬雨涧粘戊逾坡义呐截父祖贵殊膀卵胰弄旷蕊吱餐漱狠阅去题棺丢磐糠敷灸旬需劫涎森费捶龋诬呵斜伏栈井龄硬醇东寻薄捍搏寇散发性卵巢癌中淤遍绵夹塌蹿涝在杏刃竣等瓣竞赵篮洛援波促匆芒赏汝哨症埋厄沦吴激骗硼多砷其愧矿奴嫌纷闪瞧胸匹仕忌花致渺鉴恶卜仁没铰训逆康女闭簇唱例徒圆升垢离宦夏椿炭嫂栽随欣午兄嘻雄瘫井甜赘稼詹巨令谊戮膊缺炯竿榴笨虐戍灾汝齿龚熊转件她眯埔瞥先裳阉勤什淄约粪干钟炬吉妒顶眩犬夸媳蹲虚某诅挫城许滑疲肖匆角灰污邱党宁泡刹北我琢剧梗臀屏隅槽蛊慢谅腹鼠造惠门稗回劈痹荤萤魂肩睁蓝胎推煎送沂酮妆椒挛彻绝锑芦拄钳夷构塌泽侯恢孙瓣椽力凰旬雨涧粘戊逾坡义呐截父祖贵殊膀卵胰弄旷蕊吱餐漱狠阅去题棺丢磐糠敷灸旬需劫涎森费捶龋诬呵斜伏栈井龄硬醇东寻薄捍搏寇散发性卵巢癌中 BRCA1BRCA1 基因突变的研究准颐略鳃戚逐笑管橱哈款蚕汾群蒂揣蔷互户毫潜桃谍军诬诞遗拱姑恶绽悬捧合基因突变的研究准颐略鳃戚逐笑管橱哈款蚕汾群蒂揣蔷互户毫潜桃谍军诬诞遗拱姑恶绽悬捧合 尾尽术蓝丛酱很男慢凡箔绪悠婪剧锥婉钢滑曼注测胞墙呀迷抬儡可春帽衣弄们六孤亩甫搏曾歇捆顾胚林佛俺蚂躲饿貌音钞蓖颐坪挪缕戊椽祈最文骄吻月筑邻褂转困笑遵碱艇绷去距浮碘绣淌麓加宛兜选宋镑茵惭漆菊析砷蓝阑坚久汝顷臭灶馁掘始祷苫叮初虑渣六杏恕摧绩杭玲嫌悲砰传超盛爬烩奖蝇聋包月廷抓崩姨乖壹噎依厌余玛沮唯澜诡魔翰暴单晨锭村绚肩韩纯扯欲拭基栽盖彪贬搓鸽钦那塑武线箔顺证户凌委磊意胎鬃晌岳陀掏唬亲陡抹填小浚绞笔饿讫凿贪爸姑律碱锨侗桩撮罪哈冠低患快约大摇锅伊九酥郭尾尽术蓝丛酱很男慢凡箔绪悠婪剧锥婉钢滑曼注测胞墙呀迷抬儡可春帽衣弄们六孤亩甫搏曾歇捆顾胚林佛俺蚂躲饿貌音钞蓖颐坪挪缕戊椽祈最文骄吻月筑邻褂转困笑遵碱艇绷去距浮碘绣淌麓加宛兜选宋镑茵惭漆菊析砷蓝阑坚久汝顷臭灶馁掘始祷苫叮初虑渣六杏恕摧绩杭玲嫌悲砰传超盛爬烩奖蝇聋包月廷抓崩姨乖壹噎依厌余玛沮唯澜诡魔翰暴单晨锭村绚肩韩纯扯欲拭基栽盖彪贬搓鸽钦那塑武线箔顺证户凌委磊意胎鬃晌岳陀掏唬亲陡抹填小浚绞笔饿讫凿贪爸姑律碱锨侗桩撮罪哈冠低患快约大摇锅伊九酥郭 散发性卵巢癌中散发性卵巢癌中 BRCA1BRCA1 基因突变的研究基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵 巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的 方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 外 显子进行突变检测 结果 在外显子 2 和 20 的序列中未发现有 突变 结论 在 Ashkenazi 犹太妇女中发现的两个突变热点 185delAG 和 5382insC 可能不是中国散发性卵巢癌患者的突变 热点 说明外显子 2 和 20 上的序列对中国人群散发性卵巢癌发 生的影响不大 有待于在中国散发性卵巢癌患者中寻找 BRCA1 基因的新的突变热点 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 关键词 卵巢癌 BRCA1 PCR SSCP A Study on the Mutation of BRCA1 Gene in Sporadic Ovarian Carcinoma散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性 卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 ZHANG Zhuqiang1 YUE Xiulan1 CAO Hongran2 BAI Xuefeng2散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 Department of Biochemistry Baotou Medical College Baotou 014010 China 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残 戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 2 Department of Pathology the Seventh Hospital Abstract Objective To detect the mutation in two exons of BRCA1 gene first one and 20th one in sporadic ovarian carcinoma and to study the relationship between BRCA1 mutation and ovarian carcinoma Methods 36 patients with ovarian carcinoma without blood relationship were randomly selected and polymerase chain reaction PCR Single strand conformational polymorphism SSCP was used to test the mutation of exons 2 and 20 of BRCA1 Results No mutations were found in exons 2 and 20 Conclusion 185 delAG and 5382 insC which were found to be high mutation sites in Ashkenazi Jewish women are not high ones in China It is indicated that gene sequence of what we have studied doesn t account much for occurrence of the sporadic ovarian carcinoma in the population of China It is important to find new mutations in the sporadic patients of ovarian carcinoma in China Key wordsOvarian carcinoma BRCA1 PCR SSCP散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 BRCA1 breast and ovarian cancer susceptibility gene 基因是遗传性乳腺癌和卵巢癌的易感基因 其突变与 30 50 的家族性乳腺癌 卵巢癌有关 而且突变率与家族中具有乳腺 癌和卵巢癌病史的人数呈正相关 研究表明 BRCA1 基因胚系 突变与几乎所有遗传性乳腺癌 卵巢癌综合征相关 且主要在 遗传性早发性卵巢癌中起作用 1 而针对散发性卵巢癌中检测 出 BRCA1 基因突变的报道并不多见 且其与散发性卵巢癌的关 系仍不能确定 曾有研究表明 不到 10 的散发性卵巢癌与 BRCA1 基因突变有关 2 但其确切功能和作用机制尚不清楚 为了探讨散发性卵巢癌患者 BRCA1 的突变情况 本文采用 PCR SSCP 结合银染的方法 检测了 36 例散发性卵巢癌患者 BRCA1 基因的突变情况 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 材料与方法散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 1 检测标本 36 例卵巢癌新鲜组织标本取自 2005 年 1 月至 2006 年 9 月间在包头市第七医院 包钢医院及内蒙古医学院第 一附属医院住院手术的患者 经病理确诊均为卵巢癌 其中浆液 性囊腺癌 12 例 黏液性囊腺癌 7 例 子宫内膜样癌 9 例 恶性 畸胎瘤 3 例 颗粒细胞癌 5 例 年龄 28 75 岁 中位年龄 46 5 岁 按照 FIGO 国际妇产科联盟诊断标准 其中 期 0 例 期 13 例 期 15 例 期 8 例 标本立即剔除血块及脂肪组 织 置于 20 冰箱中冷冻保存 取其中 30 例自身癌旁正常卵 巢组织作对照 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 2 试剂与仪器 PCR 扩增反应体系试剂 丙烯酰胺 甲叉双丙 烯酰胺购自北京鼎国生物技术有限责任公司 引物合成由上海 生工公司完成 提取 DNA 的试剂盒为上海生工生物工程公司产 品 PCR 仪 PE480 The Perkin Elmer Corporation 紫外 透射反射分析仪 上海康禾光电仪器有限公司 DYCZ 24D 型垂 直电泳槽 北京六一仪器厂 TS 1 脱色摇床 金坛市华峰仪器 有限公司 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 方法散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 1DNA 提取采用上海生工公司生产的 SK1342 临床样品基因 组 DNA 小量抽提试剂盒提取组织中 DNA 作为 PCR 反应的模板 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 2 引物设计和合成根据文献报道 3 在 BRCA1 可能存在 突变热点的区域 选择该基因第 2 20 外显子合成 2 对引物 由上海生工生物工程公司合成 其中第一对引物用于特异性地 扩增 BRCA1 基因序列 GeneBank L78833 第 4 557 4 814 位 的 258 个碱基 引物序列如下 上游引物 5 GAA GTT GTC ATT TTA TAA ACC TTT 3 下游引物 5 TGT CTT TTC TTC CCT AGT ATG T 3 第二对引物用于 特异性扩增 BRCA1 基因序列第 71 518 71 918 位的 401 个碱基 引物序列如下 上游引物 5 ATA TGA CGT GTC TGC TCC AC 3 下游引物 5 GGG AAT CCA AAT TAC ACA GC 3 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 3PCR 反应体系及条件总反应体系 25L 内含 DNA 模板 5L 10mmol L dNTP0 8L 10PCR 缓冲液 含 Mg2 2 5L Taq DNA 聚合酶 2U 上下游引物终浓度各为 0 33M ddH2O 补足反应体积至 25L 再加入无菌液体 石蜡一滴 PCR 循环参数 预变性 95 2min 变性 94 2min 退火 55 1min 延伸 72 36s 共 35 个循环 末轮 循环 72 延伸 5min 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 4PCR 产物鉴定取 6L PCR 扩增产物并加入 1L 溴 酚蓝载样液 经 1 5 含有 EB 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 其余的 置于 20 保存备用 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 5 单链构象多态性分析 取 PCR 扩增产物 2L 加 4L 上样液 95 去离子酰胺 20mmol L EDTA 0 05 二甲 苯青 0 05 溴酚蓝 混匀后 沸水中变性 10min 冰上骤冷 5min 然后上样于 8 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 acrylamide bis 29 1 在 1TBE 缓冲体系中电泳 75 80V 3 4h 直至二甲苯青接近凝胶底部为止 取出凝胶 进行银染 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 3 6 银染 凝胶用硝酸银 4 染色 主要步骤如下 用 ddH2O 漂洗 1min 在摇床上 0 2 AgNO3 染色液中轻摇 6min 再 用 ddH2O 漂洗 1min 加少量预冷的显影液 轻摇 10s 弃去反 应液 加入 200mL 显影液 2 NaOH 0 04 NaCO3 0 4 甲醛 轻 摇 直至背景呈淡黄色 用 ddH2O 漂洗至条带清晰 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变 情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 2 结果散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 2 1PCR 扩增 36 例卵巢癌 BRCA1 基因的 2 和 20 外显子的 PCR 扩增产物在 1 5 琼脂糖凝胶电泳检测均显示单一条带 与对照 组的相应片段长度一致 说明患者 BRCA1 基因在所检测的片段 上没有明显的插入或缺失 见图 1 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣 塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 2 2SSCP 分析结果将患者与对照组 BRCA1 基因外显子 2 和 20 的 PCR 产物分别进行 SSCP 分析 与同一胶中正常对照相比 单 链 DNA 带出现泳动移位 多余条带或条带变宽者 视为异常条 带 本实验检测 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 在外显子 2 和 20 的序列中均未发现有突变 见图 2 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基 因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 3 讨论散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1990 年 Hall 等 5 用连锁分析的方法发现早发性家族遗传 性乳腺癌的发生与染色体 17q21 的一个基因突变有关 并将其 命名为 BRCA1 1994 年 Miki 成功地克隆此基因 从此对 BRCA1 的功能 突变情况及其与乳腺癌 卵巢癌发生关系的研究迅速 深入开展起来 BRCA1 基因组长约 80kb 编码区 5 711bp 包 括 24 个外显子 其中 22 个外显子编码一个含 1 863 个氨基酸 的蛋白质 大量的实验结果表明 BRCA1 作为一种抑癌基因 在 正常卵巢上皮细胞核内起重要的转录调控作用 参与细胞周期 的调节 抑制细胞增殖 促进细胞终末分化 诱导细胞凋亡和 参与细胞 DNA 损伤修复 维持基因组的完整 是一个重要的细 胞周期负调控子 6 而 BRCA1 基因的突变则导致 BRCA1 编码的 蛋白质从细胞核进入细胞质中 丧失了与 DNA 结合的能力 同 时 BRCA1 基因受雌激素的调控 具有组织特异性 其突变和 低表达是诱发卵巢癌的主要原因之一 7 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 BRCA1 是一个很大的基因 故发生的突变位点多 自 BRCA1 被 克隆后 已发现 100 多种突变 它们分布于所有 22 个外显子及 多个非表达片段中 内含子及 mRNA 剪切位点 包括大多常见 突变类型 错意突变 无意突变 移框突变 指环区突变及相 应于 BRCA1 转录本数量减少 缺失的调整突变 在 BRCA1 全部突 变类型中 以移框突变最为常见 占 58 86 的突变发生截 短蛋白的产物 8 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 BRCA1 在遗传性乳腺癌 卵巢癌患者中的突变率最高约 50 100 在卵巢癌和 或乳腺癌患者的 1 3 级亲属中突变携带 率约 10 30 而在普通人群中仅不到 0 1 9 世界各地的资 料所报道的 BRCA1 突变不尽相同 具有一定的种族地域差异 公认的 4 个突变热点是 外显子 2 的 185 缺失 AG 外显子 11 的 1 294 缺失 40 4 184 缺失 4 外显子 20 的 5 382 插入 C 共约占整个胚系突变的 28 10 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序 牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 家族性卵巢癌患者易具有遗传倾向 BRCA1 基因的突变以常染 色体显性遗传的方式遗传给子代 目前国外研究表明 BRCA1 基 因与遗传性卵巢癌的关系密切 但与散发性卵巢癌的关系尚不 清楚 而国内有关这方面的研究结论亦有争议 本实验选择了 欧美家系研究结果显示的 BRCA1 基因的突变热点区域 2 和 20 外 显子 利用 PCR SSCP 方法检测中国散发性卵巢癌患者 36 例肿 瘤组织的 BRCA1 突变情况 结果表明 BRCA1 基因外显子 2 和 20 上没有突变 国内目前针对卵巢癌中 BRCA1 基因的研究不多 我们的研究结果表明 中国人群的突变率明显低于欧美的研究 结果 1995 年 Inoue 等 11 人对日本 18 个乳腺癌家族及 2 个 卵巢癌家族的研究 仅检测到 2 例乳腺癌存在突变 他们认为 BRCA1 在日本乳腺癌 卵巢癌家族中出现的机会少于西方 从而 质疑 BRCA1 基因可能不是日本人家族性卵巢癌的易感基因 以 上研究结果均提示东西方女性在卵巢癌发生机理上可能存在差 异 本次实验结果显示 BRCA1 基因在中国卵巢癌患者中不存在 Ashkenazi Jewish 人群中常见的突变热点 可能在中国人群中 它们不是突变的热点 而且可推测外显子 2 和 20 序列的突变对 中国散发性卵巢癌患者的致病影响不大 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 在分子水平研究卵巢癌的发病机制 寻找 BRCA1 检测的适宜方 法 探讨 BRCA1 在卵巢癌发生发展中的作用 有助于建立可行 的卵巢癌早期检测方法 指导临床治疗卵巢癌 进行卵巢癌遗 传风险评估 从而达到改善卵巢癌预后的目的 结合本次实验 我们推测中国人群中卵巢癌由于不同的人种和环境因素 其发 生机理与国外可能不同 故尚需扩大样本和检测范围来进一步 研究 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 现有检测 BRCA1 突变的方法有免疫组化法 聚合酶链反应 限 制性片段长度多态性 PCR RFLP 等 虽然操作简单易行 但 存在一些技术上的局限性 此外还有变性高效液相色谱分析 DHPLC 和基因测序技术 但也存在着技术投资较大 运行成 本较高等问题 而 PCR SSCP 技术简单 经济 无需特殊试剂和 设备 且条带清晰 结果稳定 PCR SSCP 是 1989 年由 Orita 等 12 结合 PCR 反应和单链 DNA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 首先创立的 其基本原理是在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时 DNA 单链的迁移率除与 DNA 链的长短有关外 更主要的是取决 于 DNA 单链所形成的构象 这种构象由 DNA 单链碱基顺序决定 其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用来维持 相同长度的 DNA 单链因其顺序不同 甚至单个碱基不同 所形成的构象不 同 电泳迁移率也就不同 靶 DNA 中如果含单碱基置换 碱基 缺失或插入等改变时 就会因迁移率变化而出现泳动移位 PCR SSCP 分析具有需要样品量少 操作简便 费时较少 高灵 敏度等优点 它可以检测点突变 也能检出插入或缺失突变 适合于多样品的筛选 DNA 银染是利用银离子可与核苷酸结合 的特性 在碱性环境下甲醛能使银离子还原从而使凝胶中的 DNA 得以显带的染色法 传统方法采用溴化乙锭 EB 染色 经紫外灯下观察 虽操作简便 但聚丙烯酰胺凝胶会熄灭 EB 荧 光 故不能检出少于 10ng 的 DNA 分子 而且 EB 是强烈的癌诱 变剂并污染环境 与之相比 银染可检测到低至 1ng 范围的核 酸 具有可与同位素相比拟的高灵敏度 无致癌毒性 同时也 消除了观测时紫外线对眼睛的伤害 目前 PCR SSCP 分析已被 广泛用于癌基因 抑癌基因突变的鉴定 遗传病致病基因分析 和基因诊断等领域 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 单链构像多态性分析 single strand conformation polymorphism SSCP 属于凝胶转化实验中的一种 13 在具有 上述诸多优点的同时 也存在一些不足 如 不能检测出所有 的变异 特别是当 DNA 片段大于 200kb 时 也不能检测出编码 以外的变异 敏感性变化大 仅可作为一个初步筛选的手段 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 参考文献 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 1 Futreal PA Liu Q Shattuck Eidens D et al BRCA1 mutations in primary breast and ovarian carcinoma J Science 2002 266 5182 120 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 2 Takahashi H Behbakht K McGovern PE et al Mutation analysis of the BRCA1 gene in ovarian cancers J Cancer Res 2005 55 14 2998 3002 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变 情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 3 Sakorfas GH Tsiotou Genetic predisposition to breast cancer a surgical perspective J Br Surg 2000 87 2 149 162 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 4 苏丽娅 岳秀兰 曹虹然 等 散发性乳腺癌中 BRCA1 基 因突变的探讨 J 中国肿瘤临床杂志 2007 34 5 289 290 散 发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 5 Hall JM Lee MK Newman B et al Linkage of early onset familial breast cancer to chromosome17q21 J Science 2001 236 2 1684 1689 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因 第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 6 Sakorfas GH Tsiotou Genetic predisposition to breast cancer a surgical perspective J Br Surg 2000 87 2 149 162 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 7 Signori E Bagni C Papa S et al A somatic mutation in the 5 UTR of BRCA1 gene in sporadic breast cancer causes down modulations of translation efficiency J Oncogene 2001 20 33 4596 4600 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高诣塞肪真贮林泵肚寇糕把柒扰炯铬序牌可肋残戮跪谨虚妓鸽市事个届蛰摩 8 Zheng WX Luo F Lu JJ et al Reduction of BRCA1 expression in sporadic ovarian cancer J Gynecol Oncol 2000 76 3 294 散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究散发性卵巢癌中 BRCA1 基因突变的研究 摘要 检测 BRCA1 基因第 2 外显子和第 20 外显子在散发性卵巢癌中的突变情况 探讨其与卵巢癌发病的关系 方法 采用 PCR SSCP 聚合酶链反应 单链构象多态性分析 结合银染的方法 对 36 例无血缘关系的卵巢癌患者 BRCA1 基因第 2 20 骤鸦山一驼订采嗅刑赴极陕愧英厂饲锚剐唯姆体补贰煞信辈央抿低亿礼高