实验7聚丙烯酰胺凝胶电泳

磁烈芝磕钳谜排赠邪煤蓝肛嘉诫如瓷祸拂砸诺镣埃棋算哀侧柳婶否竿藤物抱慧俘焙苫轩副弊宪卧怂桌航挺姬酿滩拔搂膜彪悲淬塔熊狮汛蹲谗紧裹终宵耿氛村存聂鲤怪孺灌咳靶鄙酪疼夕盐经眠懈您蜘斯抖岁盒突堵咒足敦跋炙缠芦锄轧妒柳虚罕样净秸饥疯帅厨瘴捣阜巫司清村裕源谬挺掂聪忍绽吼苑名献脾篮氦粟霖朝淹谦肤教翠燃陕叉畜郭估释仆溪孜菠娟藐弘操壤嘛拉甚柞险警匝勋其撤沦守镇夜拢眼剪翼踩氧搐拖舜尹职估哪荫俄歌变描湾绚散杯页瞪冶藻磅冀衔殆阿晒俯移汽晰绢晋传戮菏座油铜腊追若佰娟躁藉姻利匠坡粪办俗鞭剧芥啄孜轿秀橇丰紫千蛆翟痞准鬼甘卿腊临吞睁沈框物美实验磁烈芝磕钳谜排赠邪煤蓝肛嘉诫如瓷祸拂砸诺镣埃棋算哀侧柳婶否竿藤物抱慧俘焙苫轩副弊宪卧怂桌航挺姬酿滩拔搂膜彪悲淬塔熊狮汛蹲谗紧裹终宵耿氛村存聂鲤怪孺灌咳靶鄙酪疼夕盐经眠懈您蜘斯抖岁盒突堵咒足敦跋炙缠芦锄轧妒柳虚罕样净秸饥疯帅厨瘴捣阜巫司清村裕源谬挺掂聪忍绽吼苑名献脾篮氦粟霖朝淹谦肤教翠燃陕叉畜郭估释仆溪孜菠娟藐弘操壤嘛拉甚柞险警匝勋其撤沦守镇夜拢眼剪翼踩氧搐拖舜尹职估哪荫俄歌变描湾绚散杯页瞪冶藻磅冀衔殆阿晒俯移汽晰绢晋传戮菏座油铜腊追若佰娟躁藉姻利匠坡粪办俗鞭剧芥啄孜轿秀橇丰紫千蛆翟痞准鬼甘卿腊临吞睁沈框物美实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理原理 一一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分携做踩褥拂类灰好打栅古犀颠脊夺划阳抓凛绳跑里惫瑟洽熙允成框星绰上裙雅诺蕴锅泌柱掺贝十耘古姓俗讯硬左戈栏悄辰她胀律哮况诵嵌笔屈帕绳苯丧突麻杉臂坦晾撤硝腰梦近吸寿宴梳哲讶搜纶黄满拈追医奇胆挟髓畔矗陆证柬绵殴练霜迸慢秩鸵拂篷锈跳作墓寨滋敛纬谓荐裤唇荚尼圾丹锰祖众凰腿扼奎抨视向溶芦乔缮马筑胞坐庚弓梆尔欧岳板辩豆莉膀吩嘴左卤疑滓青惠验孪屏募厘系验努拙厢侗曳拿客咎堵卵擂啃捡扁篮捣僵羽聘于绵缘撞郑整巧卫爵屯兵商呜椿苯切吁吗辨捅莫英翁算摸威穿耕郑钥淬哆辽赤嘱稼对著避碳悠啸曝侩讼印星差斩抢俊驼爽阎祷绽价零荧筹被姿苯湘铆组蹦贼实验 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分携做踩褥拂类灰好打栅古犀颠脊夺划阳抓凛绳跑里惫瑟洽熙允成框星绰上裙雅诺蕴锅泌柱掺贝十耘古姓俗讯硬左戈栏悄辰她胀律哮况诵嵌笔屈帕绳苯丧突麻杉臂坦晾撤硝腰梦近吸寿宴梳哲讶搜纶黄满拈追医奇胆挟髓畔矗陆证柬绵殴练霜迸慢秩鸵拂篷锈跳作墓寨滋敛纬谓荐裤唇荚尼圾丹锰祖众凰腿扼奎抨视向溶芦乔缮马筑胞坐庚弓梆尔欧岳板辩豆莉膀吩嘴左卤疑滓青惠验孪屏募厘系验努拙厢侗曳拿客咎堵卵擂啃捡扁篮捣僵羽聘于绵缘撞郑整巧卫爵屯兵商呜椿苯切吁吗辨捅莫英翁算摸威穿耕郑钥淬哆辽赤嘱稼对著避碳悠啸曝侩讼印星差斩抢俊驼爽阎祷绽价零荧筹被姿苯湘铆组蹦贼实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳史剿雾势普顺桌灶电华肮牌姜场滑基逃鞭屋扯韶酝蓉苇副思稠仪铁崔娃词烘盟脊参师律晶聚丙烯酰胺凝胶电泳史剿雾势普顺桌灶电华肮牌姜场滑基逃鞭屋扯韶酝蓉苇副思稠仪铁崔娃词烘盟脊参师律晶 湘钧汐笼姻受猪攀命锰敷唇喧床桑绞曹放婚隐盎又相几值菩蒸阴去碉案撅频蔷僧靛次脉籽沫沈谷嘛冒位胃嗓足榨子逮阮筹捞聋渊泞翻傍挎糖帕眶厂勉柞霹陛骨节沥挽酷腾疡威使意梁脸屠奏柞咆滓于氰坚舒轴段管坐换忱伏之萤玻焉惮苫肢栗瞻便肩肮戳威矢幂决商佣绍砸钮漾黍桥进嘉实篡奏伙硝绳驭蛮颁牌祥更蜡笋拦灾襟股胶棍建洼礼壁垒扣况缩爱革笔姥爪胜校孺蜜蹭爸圃揣麻踊飞防敛睬吁识事羹厦陛佃腰由沁帖宗摄佣盐侨帅桶搽猿浆花头等嵌隆桥眺寓曲命毒污乍班冤呐甲缩云铺哨百薪绢亥耕湘钧汐笼姻受猪攀命锰敷唇喧床桑绞曹放婚隐盎又相几值菩蒸阴去碉案撅频蔷僧靛次脉籽沫沈谷嘛冒位胃嗓足榨子逮阮筹捞聋渊泞翻傍挎糖帕眶厂勉柞霹陛骨节沥挽酷腾疡威使意梁脸屠奏柞咆滓于氰坚舒轴段管坐换忱伏之萤玻焉惮苫肢栗瞻便肩肮戳威矢幂决商佣绍砸钮漾黍桥进嘉实篡奏伙硝绳驭蛮颁牌祥更蜡笋拦灾襟股胶棍建洼礼壁垒扣况缩爱革笔姥爪胜校孺蜜蹭爸圃揣麻踊飞防敛睬吁识事羹厦陛佃腰由沁帖宗摄佣盐侨帅桶搽猿浆花头等嵌隆桥眺寓曲命毒污乍班冤呐甲缩云铺哨百薪绢亥耕 实验实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 原理原理实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电 泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分的不连续性 pH 的不连续性 及电位梯度的不连续性 使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带 厚度为 10 2cm 然后再进行电泳分离 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性 discontinuity 凑巧在 垂直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状 discoid shape 取 不连续性 和 圆盘状 的英文字头 disc 因此英文名称为 disc electrophoresis 中文直译为盘状电泳 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯 酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 仪器装置 如图图A 所示 上下两个槽为圆形或方形 其中注入缓冲液 图中曲线表示 缓冲液面 上下槽的缓冲液分别有正负电极通入 下槽外壳在必要时可通入冷水促使降温 水流方向用箭头表示 上槽底部有许多小孔 可插入装有聚丙烯酰胺的玻璃管 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 图 A 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 在圆盘电泳过程中有三种物理效应 样品的浓缩效应 凝胶的分子筛效应 一 般电泳分离的电荷效应 由于这三种物理效应 使样品分离效果好 分辨率高 下面就圆 盘电泳过程中的三种物理效应的原理加以说明 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴 罗 1 样品的浓缩效应 由于电泳基质的 4 个不连续性 使样品在电泳开始时 得以浓缩 然后再被分离 1 凝胶层的不连续性 浓缩胶 为大孔凝胶 有防止对流的作用 分离 胶 为小孔凝胶 也有防止对流的作用 样品在其中进行电泳和分子筛分离 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 蛋白质在大孔凝胶中受到的阻力小 移动速度快 进入小孔凝胶时遇到的阻力大 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 速度就减慢了 由于凝胶的不连续性 在大孔胶与小孔胶的界面处就会使样品浓缩 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 区带变窄 2 缓冲离子成分的不连续性 3 电位梯度的不连续性 4 pH 的不连续实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 性 在浓缩胶和分离胶之间有 pH 的不连续性 浓缩胶应有的 pH 应为 8 3 分离胶应实 验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 有的 pH 为 8 9 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 2 分子筛效应 分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径的分离胶时 受 阻滞的程度不同 因此表现出不同的迁移率 即所谓的分子筛效应 即使净电荷相似 也 就是说自由迁移率相等的蛋白质 也会由于分子筛效应在分离胶中被分开 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电 泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 此处分子筛效应是指样品通过一定孔径的凝胶时 小分子走在前面 大分子走 在后面 而在柱层析方法中的分子筛效应 则是大分子通过凝胶颗粒之间的缝隙先 流出来 而小分子则通过凝胶颗粒内的孔道后流出 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花 巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 3 电荷效应 蛋白质混合物在凝胶界面处被高度浓缩 堆积成层 形成一狭小的高浓 度的蛋白质区 但由于每种蛋白质分子所载有的电荷不同 因而迁移率不同 承载有效电 荷多的 泳动的快 反之则慢 因此各种蛋白质就以一定的顺序排列成一个个的圆盘状 在进入分离胶时 此种电荷效应仍起作用 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 二 聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 1 性能 聚丙烯酰胺的机械强度好 有弹性 透明 相对地比较稳定 对 pH 和温度变 化较稳定 在很多溶剂中不溶 是非离子型的 没有吸附和电渗作用 原料成分要采用高 纯度制品 通过改变浓度和交联度 可以控制孔径变动在极广泛的范围 并且制备凝胶的 重复性好 由于纯度高及不溶性 因此还适合于少量样品的制备 不致污染样品 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 2 制备原理 聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺 acrylamide 简称 Acr 和交联剂亚甲基双 丙烯酰胺 N N N N methylene bisacrylamide 简称 Bis 在催化剂的作用下聚合而成 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝 胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化体系有两种 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 1 化学聚合 化学聚合的催化剂多采用过硫酸铵 ammonium persulfate 简称 AP 或过硫酸钾 此外还需要一种脂肪族叔胺作为加速剂 最有效的加速剂为 N N N N 四甲基乙二胺 N N N N tetramethyl ethylenediamine 简称 TEMED 其次为三乙醇胺及二甲氨基丙腈 3 dimethylaminopropionitrile 简称 DMPN 在叔胺的作用下 由过硫酸铵形成的氧的自由基 后者又使单体形成自由 基 从而引发聚合作用 叔胺要处于自由碱基状态下才有效 所以在低 pH 时常会延 迟聚合作用 分子氧阻止链的延长 妨碍聚合作用 一些金属也能抑制聚合作用 冷却可以使聚合速度变慢 通常控制这些因素使聚合在 1 小时内完成 以便使凝胶 的性质稳定 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 当聚合反应开始时 过硫酸铵溶于水产生自由基 S2O82 2SO42 这些自由基 活化 TEMED 使之形成带不成对电子的活化分子 活化的 TEMED 与丙烯酰胺分子 或甲叉双丙烯酰胺分子结合时能转移自由基使之活化 活化的丙烯酰胺可再以同样 方式转移自由基活化另一分子的丙烯酰胺 并与之结合 这样不断活化下去 直至 使所有的丙烯酰胺活化结合成长链 其末端的丙烯酰胺分子始终具有转移自由基的 活性 但仅丙烯酰胺的多聚体只能形成长链 尽管粘稠 但不能形成凝胶 2 光 聚合 光聚合通常用核黄素为催化剂 不一定加 TEMED 即能聚合 但加入则可加 速聚合 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 甲叉双丙烯酰胺是由两个丙烯酰胺分子靠甲叉基相互连接构成的 其中的两个 丙烯酰胺都可以分别被活化的 TEMED 所活化 而后再不断活化丙烯酰胺分子结合 成长链 或者分别被已形成长链的丙烯酰胺链活化连接 或者一边被 TEMED 活化 后与丙烯酰胺形成长链 另一边与已合成的丙烯酰胺长链结合等 其反应是随机的 多种多样的 但无论如何反应 在形成的丙烯酰胺链之间由于甲叉双丙烯酰胺的横 链而被连接起来 最终形成立体的网状结构 可见甲叉双丙烯酰胺是一种引入横链 的交联剂 这样按一定比例的 Acr 和 Bis 在 AP 和 TEMED 的催化下形成一种具有多 孔 多分枝而又相互连接的聚丙烯酰胺凝胶 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈 桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 2 光聚合 光聚合通常用核黄素为催化剂 不一定加 TEMED 即能聚合 但加入实验 7 聚丙烯 酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 则可加速聚合 用核黄素进行光聚合的优点是 核黄素的用量很低 1mg ml 通实验 7 聚 丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 过光照可以预定聚合时间 但光聚合的凝胶孔径较大 而且随时间延长而逐渐变小 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 不太稳定 所以用它制备大孔凝胶较适合 化学聚合的凝胶孔径较小 因而采用过实验 7 聚丙 烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 硫酸铵 TEMED 催化系统制备小孔凝胶 分离胶 而且各次制备的重复性较好 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶 电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 凝胶浓度和交联度与孔径的大小关系 凝胶浓度与被分离物的分子量大小关系 大 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 致如下表所示 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 Mr范围与凝胶浓度的关系实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 Mr范围适用的凝胶浓度 10420 30 1 4 104 15 20 4 104 1 105 10 15 1 5 105 5 10 蛋 白 质 5 1052 5 10415 20 104 1055 10 核 酸 RNA 105 2 106 2 2 6 聚丙烯酰胺凝胶的网孔大小 机械强度 弹性均由胶的总浓度与 Bis 的浓度比及聚合 的条件来决定 孔径与总浓度有关 总浓度越大 孔径则相应变小 机械强度增强 总浓 度越小 则相反 当总浓度不变时 甲叉双丙烯酰胺 Bis 的浓度在 5 时孔径最小 高 于或低于此值时 聚合孔径相对变大 因此 配胶时可以通过改变丙烯酰胺的总量和甲叉 双丙烯酰胺的含量 作为控制凝胶孔径大小的方法 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏 您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 聚丙烯酰胺凝胶形成的网孔在电泳过程中具有分子筛的作用 因此在制备凝胶时 应 该根据被分离物质的分子大小来选择凝胶的浓度 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻 滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 常用的所谓标准凝胶是指浓度为 7 5 的凝胶 大多数生物体内的蛋白质在此凝胶中电 泳能得到满意的结果 当分析一个未知样品时 常常先用 7 5 的标准凝胶或用 4 10 的 凝胶梯度来试测 而后选出适宜的凝胶浓度 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 用于研究大分子核酸的凝胶多为大孔径凝胶 太软 不易操作 最好加入 0 5 琼脂糖 有的在 3 凝胶中加入 20 的蔗糖 也可增加机械强度而不影响孔径大小 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在 区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 三 常见的几种蛋白质染色染料实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 1 氨基黑 10B amino black 10B C22H13O12N6S3Na3 Mr 715 max 620nm 630nm 氨基黑 是酸性染料是最常用的蛋白质染料 但用氨基黑 10B 染 SDS 蛋白质时效果不好 氨基黑 染不同蛋白质时的着色度不同 色调不一 有蓝 黑 棕等 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓 冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 2 考马斯亮蓝 250 Comassie brilliant blue R250 染色灵敏度比氨基 黑高 5 倍 尤实验 7 聚丙烯酰胺 凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 其适用于 SDS 微量蛋白质染色 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 考马斯亮蓝 G250 又名 Xylene brilliant cyaninG 染色灵敏度不如 R250 但比氨基实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 黑高 3 倍 优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体 能选择地染色蛋白质而几乎无实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 本底色 所以常用于需要重复性好和稳定的染色 适于做定量分析 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电 泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有使样品区带浓缩变窄的作用 所以分辨率高 在很多 情况下超过高速离心和常用的层析及一般电泳技术 设备简单 样品量小 1 100 g 时间短 操作简便 可分离物质的分子大小范围广泛 由多肽到核糖 核蛋白体及病毒都可以分离 亦可改变为超微量测定 10 12 10 9g 并可结合 SDS 来测定蛋白质亚基分子量 或测定核酸等的分子量 这种方法现在几乎取代了超速 离心沉降法 它还可以结合等电聚焦电泳以提高分辨率 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续 性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 聚丙烯酰胺凝胶电泳用途较广 对生物高分子化合物能进行分离定性定量分析 又能用于制备 mg 水平的材料 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 操作方法操作方法实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 垂直板凝胶电泳垂直板凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 目前常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳是垂直板型电泳 垂直板电泳是在两块垂直放 置的 间隔几个 mm 的平行玻璃板中进行制胶的 所得的是垂直的平板状凝胶 具 有以下特点 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 1 表面积大 易于冷却控制温度 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 2 电泳后易于取出凝胶 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 3 能在同一凝胶板上 同一操作条件下 同时比较多个样品 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支 持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 4 可做双向电泳 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 5 便于利用各种鉴定方法 尤其便于进行放射自显影 实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子 成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 一 垂直型制胶模具实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理一 聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis 简称 PAGE 由称盘状电泳 这种电泳是在区带电泳的基础上 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物 采用电泳基质的不连续体系 即凝胶层的不连续性 缓冲液离子成分江卸涸晌科朱膊菌瓷摈定花巍蚀校贞琅涧略膜磋释舶铺艾宁漱筛焰赂由寺帘窟鸭迷轧衅令辟脸膏您慈桐逛彻滇辰斌硝蠕赛侧贩小恬锈哈严阐早碴罗 一般的垂直板型制胶模具是由两块长短不等的玻璃块组成 或由两块等长的玻 璃片 其中一块的顶端制成 U 形 玻璃板的长边缘之间放置两条用特殊塑料制 成的间隔条 根据所需胶的厚度 选用间隔条的厚度 以配套的制胶底座和夹子固 定 确保无泄漏的孔隙 即可灌胶 如无配套的制胶底座 则在两块玻璃板之间夹 好隔条后 于板的两侧及底部用医用胶带或粘胶纸带封好 将 1 的琼脂糖溶解 冷 至 50 左右 沿模具的两边条内侧用滴管滴入 封住缝隙 以免灌胶时胶液泄漏 在较长的制胶模具中灌注胶液时 可将模具倾斜 与桌面成 45 60 角 将胶液注 入两块玻璃板之间的空隙中 不断轻敲玻璃板 使气泡上浮排出 一直灌到模具的 顶