单抗

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体二、单克隆抗体,1、 抗体是由什么细胞产生的?它有何作用?,抗体,2、 抗体传统方法制备：,方法：,缺点：,向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。,产量低、纯度低、特异性差,“导学案”合作探究2、制备单克隆抗体时，为什么要选用效应B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？,小鼠的B淋巴细胞,杂交瘤细胞,融合,小鼠的骨髓瘤细胞,单克隆抗体技术,克隆,产生大量的杂交瘤细胞，获得大量的单一抗体。,特点：具有两个亲本细胞的遗传特性,如何使小鼠体内产生分泌某种特定抗体的B淋巴细胞？,B淋巴细胞,反复注射特定的抗原蛋白,从脾脏处提取,未受抗原刺激、受已知抗原刺激、受未知抗原刺激,3、单克隆抗体的制备,实际问题2：,如何诱导两种细胞融合，获得杂交瘤细胞？,方法,原理,结果,动物细胞融合,化学方法：聚乙二醇物理方法：电激生物方法：灭活的病毒,细胞膜的流动性,杂交细胞,如何筛选出杂交瘤细胞？,实际问题3：,细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 （选择缺陷型）鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？,小资料：,第一次筛选目的：筛选出杂交瘤细胞,（含氨基喋呤）,B细胞 瘤细胞 B-B细胞 瘤-瘤细胞 杂交瘤细胞,筛选出的杂交瘤细胞可能有几种情况？ 如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞？,未受抗原刺激的B-瘤细胞（不能分泌抗体）受已知抗原刺激的B-瘤细胞（能分泌所需的抗体）受未知抗原刺激的B-瘤细胞（分泌不需要的抗体）,实际问题4：,方法抗原-抗体杂交法,通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。,再筛选目的：筛选分泌所需抗体的杂交瘤细胞,阳性孔,抗原抗体杂交法检测呈阳性反应,思考：呈阳性反应是否说明单孔内的细胞是否来自单个细胞？,如何克隆杂交瘤细胞？,产生特定抗体的杂交瘤细胞,体外培养,从培养液中提取抗体,从腹水中提取抗体,体内培养,实际问题5：,单克隆抗体,杂交细胞,杂交瘤细胞,骨髓瘤细胞,特异性杂交瘤细胞,杂交瘤细胞系,提取,脾脏中获得B淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备过程：,特点：既能大量繁殖又能产生专一抗体,特点：特异性强灵敏度高可大量制备,4、单克隆抗体制备中用到的技术手段： 5、原理：,细胞膜的流动性、细胞增殖,动物细胞融合、动物细胞培养。,科勒,米尔斯坦,荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖,6、单抗隆抗体的应用,作为诊断试剂,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。,用于治疗疾病和运载药物,利用同位素标记单抗，在特定组织成