常见内参基因

Actin Actin 即 肌动蛋白 是细胞的一种重要骨架蛋白 同时 Actin 在细胞分泌 吞噬 Actin 移动 胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用 Actin 在不同物种之间高度保守 以至于 很难获得较好的针对 actin 的抗血清 Actin 大致可分为六种 其中四种是不同肌肉组织特 异性的 包括 skeletal muscle actin cardiac muscle actin smooth muscle actin 和 smooth muscle actin 其余两种广泛分布于各种组织中 包括 actin non muscle 和 non muscle actin 不同的 actin 之间同源性大于90 但在 N terminal 同源性仅 50 60 因此 N terminal 常被用作 actin 的抗原 Actin 是横纹肌肌纤维中的一种主 要蛋白质成分 也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分 具有收缩功能 分布广泛 Actin 用途用途 Actin 是 PCR 常用的内参 Actin 抗体是 Western Blot 很好的内参指数 内参即是 内部参照 Internal Control 对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的 蛋白 它们在各组织和细胞中的表达相对恒定 在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做 参照物 常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白 beta actin 或 beta tubulin 和 GAPDH glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase 等 因此 Actin 抗体 Tubulin 抗体以及 GAPDH 抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体 Actin 作为内参是 得到了公认的 这是针对大多数组织和细胞来说的 它广泛分布于细胞浆内 表达量非常 丰富 Beta actin 由375个氨基酸组成 分子量大小为42 43kDa 左右 actin 的蛋白水平通常不会发生改变 因此被广泛用于 Western 时上样量是否一致的 参照 也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构 在用作 Western 的参照时 Actin 抗体 和 Tubulin 抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同 这样可以选择合适的 参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白 GAPDH GAPDH 或 G3PDH 是甘油醛 3 磷酸脱氢酶 glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase 的英文缩写 该酶是糖酵解反应中的一个酶 由4个30 40kDa 的亚基 组成 分子量146kDa 该酶基因为管家 house keeping 基因 几乎在所有组织中都高 水平表达 在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的 且不受含有的部分识别 位点 佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定 故被广泛用作抽提 total RNA poly A RNA Western blot 等实验操作的标准化的内参 GAPDH 结构图 常用的内参有 ACTB actin 肌动蛋白 GAPDH 或18S 等 目的是在于避免 RNA 定量误差 加样误差以及各 PCR 反应体系中扩增效率不均一 各孔间的温差等所造成的 误差 这些都是管家基因 在各个组织中的表达量相对稳定 其中18S 同整个基因谱有关 负责装配 它在总 RNA 中占的比例最高 转染了 GAPDH siRNA jpg 转染了 GAPDH siRNA 的 Hela 细胞 转染了 GAPDH 相关 siRNA 的 HeLa 细胞在转染后48小时后不断增殖 红 被标记的 siRNA 蓝 被染色的细胞核 绿色 GAPDH 蛋白 这些 siRNA 锐博生物均可提供 阴性对照 scrambled siRNA 的导入 左 对 GAPDH 蛋白的表达没有影响 不过若转 入一个以 GAPDH 右 为靶标的 siRNA 则会导致 GAPDH 蛋白表达水平的急剧下降 GAPDH 作为内参 GAPDH 甘油醛 3 磷酸脱氢酶 是参与糖酵解的一种关键酶 由4个30 40kDa 的亚 基组成 分子量146kDa 检测条带大约在36kDa GAPDH 基因几乎在所有组织中都高水 平表达 广泛用作 Western blot 蛋白质标准化的内参 因为 GAPDH 作为管家基因在同种 细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的 因此