真菌动态测定

(1-3)-D-Glucan(葡聚糖) 定量检测,真菌及深部真菌感染,真菌在自然界中分布很广,其细胞壁主要成分为(1-3)-D-Glucan(葡聚糖).深部真菌感染: 是指侵犯机体皮下组织, 内脏器官及中枢神经系统的真菌性疾病.目前, 深部真菌感染已成为免疫功能低下患者发病和死亡最常见的原因。常见有念珠菌病、孢子丝菌病、隐珠菌病、曲霉病、毛霉菌病、马尔尼菲青霉菌病、组织孢浆菌病以及球孢子、副球孢子菌病等临床病症.,深部真菌感染发展趋势,随着广谱抗生素、激素和免疫抑制剂以及各种导管插管等治疗手段的广泛应用 ,患者由真菌引起的感染增多，尤其是深部真菌感染的发病率增高（8%-25%） ,另外对于免疫功能低下患者, 如 HIV感染者, 糖尿病患者,移植患者等, 易发生深部机会性真菌感染.因此,深部真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁.,发病率逐年增加.,真菌细胞壁结构示意图,深部真菌检测的临床意义,通过对真菌细胞壁成分1-3-D-Glucan的动态快速检测, 对深部真菌感染作到快速诊断及对症治疗, 而且不受血中抗生素、酶类等成分的影响。鉴别辅助诊断。疗效动态观察。,(1-3)-D-Glucan的检测,传统的检测真菌方法:包括直接镜检和培养检查,目前由于抗生素的广泛应用,其真菌检测的阳性率很低.不能满足临床检验的需求.目前临床深部真菌发病率越来越高.,国外:90年代以后相继出现(1-3)-D-Glucan 快检试剂盒: 如 FUNGITELL(American FDA认可)FUNGITEC G TEST MK/ -Glucan test (Japan 厚生省)国内:GKT-5M SET其他(无),GKT-5 M SET检测原理,与(1-3)-D-Glucan检测机理1 相同,为动态检测反应原理.不受反应液自身颜色的干扰影响,同时不受抗生素类药物等的干扰影响.该检测试剂盒目前在国内属于第一家,GKT-5 M SET主要技术指标,1. 灵敏度: 最低检测限 5pg/ml.2. 精密度: 批间 CV 10%3. 准确性: 回收率75-125%4. 曲线范围: 5 -9000pg/ml5. 相关系数 r 0.980,GKT-5 M SET临床验证,7家医院实验汇总结果,深部真菌感染患者血浆1-3-D葡聚糖检测,病例选择 深部真菌感染患者35例，年 龄1288岁，来自我院2004年1月到5月住院患者，均经培养证实存在深部真菌感染，感染部位包括呼吸道、泌尿道、血液及静脉插管引起的系统性感染。正常健康对照组30人，来自我院健康查体者。,检测结果,正常对照组血浆1-3-D葡聚糖含量最高为7.29 pg/ml ，最低为0.45 pg/ml，平均值为2.832.57pg/ml；深部真菌感染组血浆1-3-D葡聚糖含量最高为168.9 pg/ml，最低为14.93pg/ml，平均值为54.0636.13 pg/ml。经SPSS统计软件T-检验分析，对照组与深部真菌感染组1-3-D葡聚糖平均值差异非常显著（t=7.741,P0.001）。,讨论-1,葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占其干燥重量的80%90%。其中1-3-D糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链，分支状1-6-D 葡糖糖残基作为侧链。,讨论-2,对于1-3-D葡聚糖在深部真菌感染中的作用，Yoshida M2等认为可能与内毒素在革兰阴性杆菌感染中的作用类似，但目前暂未明了。,讨论-3,当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理，1-3-D葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液（如尿、脑脊液，腹水，胸水等）中1-3-D葡聚糖含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速清除1-3-D葡聚糖。而在浅部真菌感染中，1-3-D葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。有研究报道葡聚糖在念珠菌血症时明显升高，将其用于念珠菌血症的早期诊断明显优于传统的培养法和血清学诊断试验3-4。我们的实验得到了相似的结果。,讨论-4,另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌感染的诊断1，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验表明，新生隐球菌产生的1-3-D葡聚糖量比念珠菌和曲霉菌少。但也有文献报道新生隐球菌感染后血清葡聚糖升高也十分明显5。所以，有关隐球菌感染后葡聚糖的变化还有待进一步试验验证。,讨论-5,我们检测的深部真菌感染患者均经细菌培养证实为念珠菌感染，包括白色念珠菌23株、热带念珠菌8株、季也蒙念珠菌1株、克柔念珠菌1株和光滑球拟假丝酵母菌2株，无隐球菌感染。如以10 pg/ml为cutoff值，则阳