植物组织培养实验报告

实验一 植物组织培养实验报告 一 实验目的 让植物组织经过脱分化作用 形成愈伤组织 经过再分化作用 愈伤组织又能重新分化 为有结构的组织和器官 最终形成完整的植株 二 实验原理 植物组织培养是把植物的器官 组织以至单个细胞 应用无菌操作使其在人工条件下 能够继续生长 甚至分化发育成一完整植株的过程 植物的组织在培养条件下 原来已经 分化停止生长的细胞 又能重新分裂 形成没有组织结构的细胞团 即愈伤组织 这一过 程称为 脱分化作用 已经 脱分化 的愈伤组织 在一定条件下 又能重新分化形成输导 系统以及根和芽等组织和器官 这一过程称 再分化作用 植物激素在此过程中起着重要 的作用 吲哚乙酸 IAA 和 6 苄基氨基腺嘌呤 6 BA 的比例 决定了根和芽的 分化 三 实验器材 一 试剂 乙醇 IAA 或 2 4 D HgCl 2 或次氯酸钠 6 苄基氨基腺嘌呤 6 BA MS 培养基 二 仪器设备 培养室 高压灭菌锅 水浴锅 解剖刀 三角烧瓶 100mL 烧杯 量筒 培养皿 超净工作台 分析天平 长镊子 剪刀 橡皮筋等 三 实验步骤 1 配制培养基 1 愈伤组织诱导培养基 MS 培养基 蔗糖含量为 10 g L 2 4 D 含量为 2 mg L 琼脂 10 g L 2 试验培养基 在 MS 培养基中按表 33 1 加入 IAA 和 6 BA 吲哚乙酸先用少量 0 1 mol L NaOH 溶解 6 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0 1 mol L HCl 溶解 然后用蒸馏水稀释 再加入培养基中 2 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解 调至 pH 5 8 趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中 每瓶约 20 mL 待培养基冷却凝固后 用两层称量纸包扎瓶口 并用橡皮筋扎牢 然后 在高压灭菌锅中 121 1 kg cm 2 下灭菌 20 min 取出三角烧瓶放在台子上 冷却后备用 接种操作所需的一切用具 如长镊子 解剖刀 剪刀等 及灭菌水 需同时 灭菌 3 诱导产生愈伤组织 1 取健壮的玫瑰 菊花茎数段 每段约 5 cm 长 于烧杯中用 0 1 氯化汞 升 汞 浸泡 20 min 取出用无菌水洗 3 4 次 置于无菌培养皿中 在接种箱中按无 菌操作要求剥去外皮 接种箱事先用紫外灯灭菌 30 min 用解剖刀切成 5 mm 厚的 圆片 弃去开始一片和最后一片 用长镊子将它接种在诱导培养基上 注意圆片的切口 朝向培养基 每瓶接种 4 片 接种后扎好瓶口 2 将已接入植物组织 外植体 的三角烧瓶 培养在 25 温室中 每星期检查 l 2 次 剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶 3 4 周后产生愈伤组织 3 选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶 用解剖刀将愈伤组织切下 转移到含有不同 激素的试验培养基中 也可以连同原来的外植体一起转移 每瓶放 1 2 块 仍培养 在 25 温室中 每周 1 2 次观察不同处理的三角烧瓶中 愈伤组织分化情况 直至 长出根和芽 长成的幼小植株即为 试管苗 可移栽于花盆中 四 实验结果 植物分生组织培养室指对植物体的分生组织进行离体培养 因为时间有限及实验严密 性等问题 大部分都失败了 但是仍然有小部分分化发育了出来 已经证明了植物组织能 够经过脱分化作用 形成愈伤组织 经过再分化作用 愈伤组织又能重新分化为有结构的 组织和器官 最终形成完整的植株 实验 二 三 植物叶片与茎尖培养 一 实验目的 离体叶培养是指包括幼叶片成熟叶片叶柄子叶叶鞘夜间组织叶原基等叶组织作为外植体的 无菌培养 由于叶片是植物进行光合作用的重要器官 又是某些植物的繁殖器官 因此离 体培养在植物器官培养中占有重要地位 二 实验原理 很多植物的叶具有强大的再生能力能从叶片产生不定牙 在离体培养基中 水稻小麦油菜 番茄杨树菊花百合猕猴桃等百余种作物的叶组织已经再生并形成完整植株 离体叶培养是 指包括幼叶片成熟叶片叶柄子叶叶鞘夜间组织叶原基等叶组织作为外植体的无菌培养 三 实验材料 要选用易培养成功的叶组织 如幼叶比成熟叶易培养 子叶比叶片易培养 个体发育的早 期幼嫩叶片较成熟叶片分化能力较高 例如 烟草成株期叶组织分化和再分化需要的时间 较长 而且叶片膨大体积较大 多在刀口处形成大量的愈伤组织和分生细胞团 四 实验步骤 1外植体的选取及预处理 1 外植体的选取 选取生长健壮 已发芽 长势较好 无病害的生姜根茎作为外植体 2 材料的预处理 取带牙的枝条或鳞茎球茎 洗衣粉适量冲洗 然后用清洁剪刀剪取带牙部分 顶芽和 腋芽 大芽和小芽分开 继续用洗衣粉清洗 10 分钟 清洗时旭不停的晃动 再用自来 水冲洗干净 置空培养瓶备用 2超干净工作台无菌操作准备 3外植体消毒 4材料的处理 5接入培养基 培养基瓶放入工作台中 将剥夺的材料分别用消毒的镊子放入培养瓶中 盖上瓶盖 置培养蓝内 写上培养时间操作人及培养品名 放入培养室培养 6整理工作 清洁整理超