菌种活化传代

菌种活化与传代菌种活化与传代 一 菌种活化一 菌种活化 下列步骤请在无菌环境下操作 1 把冻干菌种管 灭菌 1ml 滴管 双碟 镊子 营养肉汤培养基 营养 琼脂斜面数支 移入接种室或净化工作台 2 先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕 再将冻干菌种管外壁用 75 乙 醇擦洗消毒 稍干 用 75 乙醇棉擦净 放在灭菌双碟内 待干 点燃酒精灯 将菌种管的封口一端在火焰上 烧灼红热 用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基 滴在灼热的菌种管封口一端 使骤冷而炸裂 有些商品化的产品打开更方便 3 取灭菌镊子 在火焰旁 将炸裂的管口打开 放入灭菌双碟内 另取 1 支灭菌滴管 在火焰旁吸取营养肉汤少许 无菌水也可 加至菌种管底部 将 冻干菌搅动促使溶解 随即吸出管内菌液 分别接种至营养琼脂斜面及普通肉 汤内 并将滴管及菌种管投入消毒液内 将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面 进行培养 a 适用细菌 用无菌吸管 吸取 0 3 0 5 ml 指定之液体培养基或无菌水指定之液体培养基或无菌水 滴入内管内 并轻微震荡 可用该吸管协助 直到均匀悬浮 b 适用霉菌 酵母菌 用无菌吸管 吸取 0 3 0 5 ml 无菌水 滴入内管内 待干燥粉末溶解后 以无菌吸管吸取并滴入约含有 5ml 无菌水之试管内 轻微震荡使其均匀后 静 置 30 至 60 分钟 4 某些菌种经过冷冻干燥保存后 迟滞期 较长 必须等培养二倍时间后 才能长出 且再经过一 二次继代培养才能正常生长 经过以上的努力后仍培 养失败 才视为不能活化 二 菌种传代二 菌种传代 1 培养基应新鲜制备 如斜面已无冷凝水者 不宜再使用 标签上写上 菌名及接种日期 至冰箱取出的菌种斜面 应在室温放置约 30 分钟 待温度平 衡后再移入接种室或超净工作台 2 点燃酒精灯 用左手握住菌种斜面 将管口靠进火焰旁 右手拿接种 棒后端 将接种环烧红 30 秒 随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼 往返 通过 3 次 左手将管口在火焰上旋转烧灼 右手用无名指 小指及掌部夹住棉 塞 拨开棉塞 将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下 稍冷却再移 至菌苔上 刮去少量菌苔 随即取出接种棒 并将菌种管口移至火焰旁 3 堵上棉塞 左手将菌种管放下 取营养琼脂斜面 1 支 照上述操作打 开棉塞 将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部 由底向上 将接种环轻贴斜面 的表面曲折移动 使细菌划在斜面的表面上 4 取出接种棒 在火焰旁将培养基管棉塞堵上 然后将接种过细菌的接 种棒在火焰上烧灼灭菌 将已接种毕的细菌管培养 22 24 小时 霉菌管一般置 霉菌培养箱内培养 7 日 取出后放人冰箱保存 一般 2 3 个月转种一次 附一 菌种的培养与保存 1 菌种活化 用无菌水溶解冻干粉菌液 一的操作 用无菌微量吸管滴入固态指定培固态指定培 养基养基某一边缘附近 以划线法接种 2 划线法简介 1 手持金属接种环 用酒精灯将接种环 共约 5 公分 烧至火红 并不断 来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分 等待约 10 秒钟 将接种环前端轻触培 养基边缘凝胶 无菌体部份 待接种环完全冷却后 以环沾黏菌滴 由培养 基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线 直到涵盖 1 3 培养基为止 I 区 2 灼烧接种环 待数秒冷却后 旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条 线到未接种的区域 II 区 3 重复 2 的动作完成 III 区与 IV 区 4 灼烧接种环 将接种环归位 附三 培养温度 1 大肠杆菌 35 37 培养 48 小时 金黄色葡萄球菌 30 35 培养 48 小时 枯草芽