原料药的质量控制（修改版）

他达拉非药学研究资料 CTD 目录 3 2 S 原料药原料药 1 3 2 S 4 原料药的质量控制原料药的质量控制 1 3 2 S 4 1 质量标准质量标准 1 3 2 S 4 2 分析方法分析方法 10 3 2 S 4 3 分析方法的验分析方法的验证证 26 3 2 S 4 4 批检验报告批检验报告 121 3 2 S 4 5 质量标准制定依据质量标准制定依据 130 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 1 页 3 2 S 原料药原料药 3 2 S 4 原料药的质量控制原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准质量标准 表 3 2 S 4 1 1 原料药质量标准 检查项目方法放行标准限度货架期标准限度 外观性状 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 白色至类白色粉末白色至类白色粉末 臭 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 无臭无臭 味 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 无味无味 引湿性 2010 版 中国药典 二部附录 J 略有引湿性略有引湿性 溶解度 2010 版 中国药典 二部凡例十五 2 在 N N 二甲基甲酰胺和二甲亚砜中中易 溶 略溶于四氢呋喃和 2 甲氧基乙醇 微溶于乙腈和甲醇 极微溶于乙醇和异 丙醇 不溶于正己烷 正庚烷和水 在 N N 二甲基甲酰胺和二甲亚砜中中 易溶 略溶于四氢呋喃和 2 甲氧基乙 醇 微溶于乙腈和甲醇 极微溶于乙 醇和异丙醇 不溶于正己烷 正庚烷 和水 性状 比旋度2010 版 中国药典 二部附录 E 78 84 78 84 紫外 可见分光光度法2010 版 中国药典 二部附录 A 在221nm 284nm 和291nm 波长处有最 大紫外吸收 在221nm 284nm 和291nm 波长处有最 大紫外吸收 鉴别 高效液相色谱法 HPLC 2010 版 中国药典 二部附录 D 在含量测定项下 供试品溶液中主峰的 保留时间应与对照品溶液中主峰的保留 时间一致 在含量测定项下 供试品溶液中主峰的 保留时间应与对照品溶液中主峰的保留 时间一致 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 2 页 红外分光光度法2010 版 中国药典 二部附录 C 本品的红外吸收图谱应与对照品图谱一 致 本品的红外吸收图谱应与对照品图谱一 致 有关物质2010 版 中国药典 二部附录 D D 色氨酸甲酯盐酸盐 0 10 氧化杂质2 0 10 中间体1 0 10 中间体2 0 10 双取代杂质 0 10 其他单个杂质 0 10 总杂质 0 30 D 色氨酸甲酯盐酸盐 0 10 氧化杂质2 0 10 中间体1 0 10 中间体2 0 10 双取代杂质 0 10 其他单个杂质 0 10 总杂质 0 30 对映异构体和非对映异构体 2010 版 中国药典 二部附录 D 6R 12aS 非对映体 0 10 6S 12aS 对映体 0 10 6S 12aR 非对映体 0 10 总杂质 0 30 6R 12aS 非对映体 0 10 6S 12aS 对映体 0 10 6S 12aR 非对映体 0 10 总杂质 0 30 检查 残留溶剂2010 版 中国药典 二部附录 P 甲醇 0 3 乙醇 0 5 甲醇 0 3 乙醇 0 5 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 3 页 乙腈 0 041 二氯甲烷 0 06 2 甲氧基乙醇 0 005 正庚烷 0 5 正丁醇 0 5 N N 二甲基甲酰胺 0 088 乙腈 0 041 二氯甲烷 0 06 2 甲氧基乙醇 0 005 正庚烷 0 5 正丁醇 0 5 N N 二甲基甲酰胺 0 088 干燥失重2010 版 中国药典 二部附录 L 0 5 0 5 炽灼残渣2010 版 中国药典 二部附录 N 0 1 0 1 重金属检查2010 版 中国药典 二部附录 H 20ppm 20ppm 含量高效液相色谱法2010 版 中国药典 二部附录 D98 0 102 0 按无水物计 98 0 102 0 按无水物计 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 4 页 临床研究用药品质量标准草案临床研究用药品质量标准草案 他达拉非他达拉非 Tadalafei Tadalafil N H N N O O O CH3 O H C22H19N3O4389 40 本品为 6R 12aR 2 3 6 7 12 12a 六氢 2 甲基 6 3 4 亚甲基二氧 苯基 吡嗪并 1 2 1 6 吡啶 并 3 4 b 吲哚 1 4 二酮 按干燥品计算 含 C22H19N3O4应为 98 0 102 0 性状性状 本品为白色至类白色粉末 无臭无味 在 N N 二甲基甲酰胺 二甲亚砜中易溶 略溶于四氢呋喃和乙二醇单甲醚 微溶于甲醇 和乙腈 极微溶解于乙醇和异丙醇 在正己烷 正庚烷和水中不溶 比旋度 取本品 精密称定 加二甲亚砜溶解并定容稀释制成每 1mL 中约含 10mg 的溶 液 依法测定 附录 E 比旋度为 78 84 鉴别鉴别 1 取本品 加 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 1 1 制成每 1 ml 中约含 10 g 的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在 221 nm 284 nm 和 291nm 的波长处有最 大吸收 2 在含量测定项下记录的色谱图中 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰 的保留时间一致 3 本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 检查检查 有关物质有关物质 取本品 精密称定 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 1 1 v v 溶解 并定容稀释制成每 1 ml 中约含 0 4mg 的溶液 作为供试品溶液 取他达拉非对照品 精密称定 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 1 1 v v 配制成每 1 ml 中约含 0 4 g 的溶液 作为对照溶液 照高效液相色谱法 中国药典 2010 年版二部附录 D 以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂 流 动相 A 为 0 1 三氟乙酸水溶液 流动相 B 为乙腈 按下表进行线性梯度洗脱 柱温为 40 检测波长为 285nm 取 6R 12aS 非对映体 精密称定 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 5 页 1 1 v v 溶解并定容稀释制成每 1 ml 中约含 20 g 的溶液 作为 6R 12aS 非对映体储备液 取本品约 10mg 精密称定 置于 25mL 量瓶中 精密加入 6R 12aS 非对映体储备液 1ml 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 1 1 v v 溶解稀释定容至刻度 摇匀 即得系统适用性试验溶液 取 20 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 6R 12aS 非对映体峰和他达拉非峰的分离度应符合要求 6R 12aS 非对映体与他达拉非的相对保留时间应约为 1 03 取对照溶液 20 l 注入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的 2 精密量取供试品溶液和对照溶液 各 20 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如有杂质峰 按加校正因子 主成分对照法计算 单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1 倍 0 1 剔除在相对 保留时间约为 1 03 处杂质峰后 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 3 倍 0 3 供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积 0 5 倍 0 05 的峰可忽略不计 时间 分钟 流动相 A 流动相 B 08515 38515 30595 33595 358515 458515 有关物质相对保留时间表及校正因子有关物质相对保留时间表及校正因子 化合物相对保留时间校正因子 D 色氨酸甲酯盐酸盐0 581 58 氧化杂质 20 812 76 中间体 10 851 16 他达拉非1 001 00 中间体 21 241 13 双取代杂质1 281 18 对映体和非对映体对映体和非对映体 取本品适量 加正己烷 异丙醇 乙腈 40 40 20 溶解并稀释制成每 1mL 中含 0 5mg 的溶液 作为供试品溶液 另取他达拉非对照品适量 加正己烷 异丙醇 乙腈 40 40 20 溶解并稀释制成每 1mL 中含 0 5 g 的溶液 作为对照溶液 照高效液相色谱法 中国药典 2010 年版二部附录 D 以直链淀粉 三 3 5 二甲苯基氨基甲酸酯 涂敷硅胶为 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 6 页 固定性 CHIRALPAK AD H 色谱柱 4 6 250mm 5 m DAICEL CORPORATION 以正己 烷 异丙醇 50 50 为流动相 流速每分钟 0 75mL 检测波长 222nm 柱温 25 取等量的他 达拉非对照品和 6R 12aS 非对映体各适量 置于同一量瓶中 加正己烷 异丙醇 乙腈 40 40 20 溶解并稀释制成每 1mL 中各含 10 g 的溶液 作为系统适用性试验溶液 取系统 适用性试验溶液 10 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 6R 12aS 非对映体峰和他达拉非峰的分离 度应符合要求 6R 12aS 非对映体与他达拉非的相对保留时间应约为 0 79 取对照溶液 10 l 注 入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的 2 精密量取供试品 溶液和对照溶液各 10 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如有下表中 的对映体和非对映体杂质峰 按主成分对照法计算 单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面 积的 1 倍 0 1 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 3 倍 0 3 供试品溶液 色谱图中其它杂质峰忽略不计 对映体和非对映体相对保留时间对映体和非对映体相对保留时间 化合物相对保留时间 6R 12aS 非对映体0 79 他达拉非1 00 6S 12aS 对映体1 50 6S 12aR 非对映体2 16 残留溶剂残留溶剂 照残留溶剂测定法 中国药典 2010 版二部附录 P 测定 应符合各溶剂限度 要求 精密称取甲醇 无水乙醇 乙腈 二氯甲烷 2 甲氧基乙醇 正庚烷 正丁醇和 N N 二 甲基甲酰胺适量 加二甲亚砜定量稀释制成每 1ml 中约含甲醇 600 g 无水乙醇 1000 g 乙腈 82 g 二氯甲烷 120 g 2 甲氧基乙醇 10 g 正庚烷 1000 g 正丁醇 1000 g N N 二甲基甲 酰胺 176 g 的溶液 作为对照品贮备液 精密量取对照品贮备液 5 0 ml 置 10ml 量瓶中 用二 甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为对照品溶液 另取本品约 0 5g 精密称定 置 5ml 量瓶中 加 二甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 照残留溶剂测定法 中国药典 2010 版二部附录 P 测定 以 6 氰丙基苯基 94 二甲基硅氧烷共聚物为固定液 或极性相近 起始柱温为 35 维持 13 5 分钟后 以每分钟 25 的升温速率升温至 220 维持 5 分钟 检测器为氢火 焰离子化检测器 检测器温度为 250 进样口温度为 200 取对照品溶液 1 l 注入气相色 谱仪 记录色谱图 各色谱峰之间的分离度均应不小于 1 5 精密量取供试品溶液和对照品溶 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 7 页 液各 1 l 分别注入气相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液如显示甲醇 无水乙醇 乙腈 二 氯甲烷 2 甲氧基乙醇 正庚烷 正丁醇和 N N 二甲基甲酰胺峰 按外标法以峰面积计算 含 甲醇不得过 0 3 含无水乙醇不得过 0 5 含乙腈不得过 0 041 含二氯甲烷不得过 0 06 含 2 甲氧基乙醇不得过 0 005 含正庚烷不得过 0 5 含正丁醇不得过 0 5 含 N N 二甲基甲酰胺不得过 0 088 干燥失重干燥失重 取本品 照 2010 年版 中国药典 二部附录 L 105 真空干燥 3 小时 干 燥失重不超过 0 5 炽灼残渣炽灼残渣 取本品 依法检查 中国药典 2010 版二部附录 N 残渣不得过 0 1 重金属重金属 取炽灼残渣项下遗留的残渣 依法检查 中国药典 2010 版二部附录 H 第二法 含重金属不得超过百万分之二十 含量测定含量测定 照高效液相色谱法 中国药典 2010 版二部附录 D 测定 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以乙腈 0 1 三氟乙酸水 溶液 45 55 为流动相 流速为每分钟 1 5ml 检测波长为 285nm 柱温为 40 取有关物质 项下的系统适用性试验溶液 20 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 他达拉非峰与相邻杂质峰的 分离度应符合要求 测定法测定法 取本品 精密称定 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 1 1 v v 溶解并定容稀释制 成每 1 ml 中约含 0 1 mg 的溶液 精密量取 20 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 另取他达拉非 对照品 同法测定 按外标法以峰面积计算 即得 类别 环磷酸鸟苷特异性磷酸二酯酶选择性可逆抑制剂 贮藏 避光 密封 阴凉 干燥处保存 制剂 有效期 24 个月 杂质说明 D 色氨酸甲酯盐酸盐色氨酸甲酯盐酸盐 N H NH2 COOMe HCl 氧化杂质氧化杂质 2 6R 12aR 2 3 6 7 12 12a 六氢 2 甲基 6 羟基 6 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡嗪并 1 2 1 6 吡啶并 3 4 b 吲哚 1 4 二酮 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 8 页 N H N N O O O O HO 中间体中间体 1 1R 3R 2 3 4 9 四氢 1H 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡啶并 3 4 b 吲哚 3 羧酸甲酯 盐酸盐 N H NH O O O O HCl 中间体中间体 2 1R 3R 2 氯乙酰基 2 3 4 9 四氢 9H 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡啶并 3 4 b 吲哚 3 羧酸甲酯盐酸盐 N H N O O O O O Cl 6R 12aS 非对映体 非对映体 6R 12aS 2 3 6 7 12 12a 六氢 2 甲基 6 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡嗪并 1 2 1 6 吡啶并 3 4 b 吲哚 1 4 二酮 N H N N O O O O 6S 12aS 对映体 对映体 6S 12aS 2 3 6 7 12 12a 六氢 2 甲基 6 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡嗪并 1 2 1 6 吡啶并 3 4 b 吲哚 1 4 二酮 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 9 页 N H N N O O O O 6S 12aR 非对映体 非对映体 6S 12aR 2 3 6 7 12 12a 六氢 2 甲基 6 3 4 二氧亚甲基 苯基 吡嗪并 1 2 1 6 吡啶并 3 4 b 吲哚 1 4 二酮 N H N N O O O O 双取代杂质 双取代杂质 N N 二 2 1R 3R 1 3 4 亚甲二氧苯基 3 甲氧羰基 2 3 4 9 四氢 1H 吡啶并 3 4 b 吲哚 2 基 2 氧代乙基 甲胺 N N H O O O O O N N O N H O O O O 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 10 页 3 2 S 4 2 分析方法分析方法 本产品他达拉非在美国药典 USP 欧洲药典中均已收载 USP 标准品可购买获得 对常 规通用检测项目 分析方法采用中国药典 ChP 附录收载的通用方法 对产品特有的具有专 属性的检测项目如有关物质 含量测定和残留溶剂检测等 采用 USP 收载的相应方法 以下是 对本产品分析方法开发和验证的详细描述 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 11 页 表 3 2 S 4 1 2 分析方法概述表 检查项目方法原理方法方法验证索引 外观性状 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 目测不适用 臭 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 鼻闻不适用 味 2010 版 中国药典 二部凡例十五 1 舌舔不适用 引湿性2010 版 中国药典 二部附录 J样品存放时吸潮程度一般不需要额外方法验证报告 溶解度 2010 版 中国药典 二部凡例十五 2 溶解能力一般不需要额外方法验证报告 性状 比旋度2010 版 中国药典 二部附录 E光学活性引起的平面偏振光的旋光现象一般不需要额外方法验证报告 紫外 可见分光光度法2010 版 中国药典 二部附录 A主成分在特定波长下有最大紫外吸收一般不需要额外方法验证报告 高效液相色谱法 HPLC 2010 版 中国药典 二部附录 D 主成分在HPLC 测定条件下特定的色谱行为 保留时间 含量测定方法验证报告鉴别 红外分光光度法2010 版 中国药典 二部附录 C溴化钾压片样品的红外吸收一般不需要额外方法验证报告 有关物质2010 版 中国药典 二部附录 D 采用反相HPLC 法分离主成分与各杂质 并 于各杂质相近的波长处285nm 测定杂质 UV 检测器 通过方法学研究 采用加校正 因子的主成分自身对照法计算杂质含量 有关物质分析方法验证报告 对映体和非对映体2010 版 中国药典 二部附录 D 采用手性HPLC 法分离主成分与各 异构体 222nm 测定 UV 检测器 通过方法学研究 采用主成分自身对照法计算杂质含量 对映体和非对映体分析 方法验证报告 残留溶剂2010 版 中国药典 二部附录 P 检测甲醇 乙醇 乙腈 二氯甲烷 2 甲氧 基乙醇 正庚烷 正丁醇和N N 二甲基甲酰 胺 外标法定量 残留溶剂方法验证报告 干燥失重2010 版 中国药典 二部附录 L 105 真空加热3 小时 一般不需要额外方法验证报告 炽灼残渣2010 版 中国药典 二部附录 N重量分析一般不需要额外方法验证报告 检查 重金属检查2010 版 中国药典 二部附录 H目视比色一般不需要额外方法验证报告 含量高效液相色谱法2010 版 中国药典 二部附录 D采用反相HPLC 方法分离出主成分并于主峰含量方法验证报告 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 1 质量标准 第 12 页 最大吸收285nm 波长处测定 UV 检测器 通过外标法计算主成分含量 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 13 页 3 2 S 4 2 1 性状性状 3 2 S 4 2 1 1 外观外观 方法 经目测 且取少量样品用舌尖轻舔并近距离鼻嗅 结果见表 3 2 S 4 2 1 1 1 表 3 2 S 4 2 1 1 1 他达拉非外观性状结果 批号外表感观色泽臭味 成品 粉末白色无无 成品 粉末白色无无 成品 粉末白色无无 USP 对照品粉末白色无无 标准规定 本品为白色至类白色粉末 无臭无味 3 2 S 4 2 1 2 溶解度溶解度 依据 2010 年版 中国药典 二部凡例十五 2 溶解度测定方法进行检查 方法 取供试品粉末 于 25 2 一定量的溶剂中 考察的溶剂包括 N N 二甲基甲酰 胺 二甲亚砜 四氢呋喃 2 甲氧基乙醇 乙腈 甲醇 乙醇 异丙醇 正己烷 正庚烷和水 每隔 5 分钟强力振摇 30 秒 观察 30 分钟内的溶解情况 三批供试品 批号 成品 成品 成品 试验结果见表 3 2 S 4 2 1 2 1 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 14 页 表 3 2 S 4 2 1 2 1 他达拉非溶解度试验结果 溶剂供试品 g溶剂体积 1 ml 现象溶剂体积 2 ml 现象结论 中试样品 批号 成品 N N 二甲基甲酰胺0 100700 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 二甲亚砜0 101550 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 四氢呋喃0 106750 09未完全溶解9 99完全溶解略溶 2 甲氧基乙醇0 099600 99未完全溶解9 99完全溶解略溶 乙腈0 101962 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 甲醇0 100332 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 乙醇0 101329 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 异丙醇0 100749 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 正己烷0 09970100未溶解 1000未溶解几乎不溶 正庚烷0 10052100未溶解 1000未溶解几乎不溶 水0 10061100未溶解 1000未溶解几乎不溶 溶剂供试品 g溶剂体积 1 ml 现象溶剂体积 2 ml 现象结论 中试样品 批号 成品 N N 二甲基甲酰胺0 100380 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 二甲亚砜0 101030 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 四氢呋喃0 100530 09未完全溶解9 99完全溶解略溶 2 甲氧基乙醇0 101140 99未完全溶解9 99完全溶解略溶 乙腈0 101222 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 甲醇0 100892 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 乙醇0 100749 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 异丙醇0 101329 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 正己烷0 10051100未溶解 1000未溶解几乎不溶 正庚烷0 10111100未溶解 1000未溶解几乎不溶 水0 10066100未溶解 1000未溶解几乎不溶 溶剂供试品 g溶剂体积 1 ml 现象溶剂体积 2 ml 现象结论 中试样品 批号 成品 N N 二甲基甲酰胺0 100550 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 二甲亚砜0 101110 09未完全溶解0 99完全溶解易溶 四氢呋喃0 100280 09未完全溶解9 99完全溶解略溶 2 甲氧基乙醇0 100880 99未完全溶解9 99完全溶解略溶 乙腈0 100452 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 甲醇0 101262 99未完全溶解99 9完全溶解微溶 乙醇0 101179 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 异丙醇0 100859 99未完全溶解999 9完全溶解极微溶 正己烷0 10075100未溶解 1000未溶解几乎不溶 正庚烷0 10182100未溶解 1000未溶解几乎不溶 水0 10118100未溶解 1000未溶解几乎不溶 标准规定 本品在 N N 二甲基甲酰胺和二甲亚砜中中易溶 略溶于四氢呋喃和 2 甲氧基乙 醇 微溶于乙腈和甲醇 极微溶于乙醇和异丙醇 不溶于正己烷 正庚烷和水 3 2 S 4 2 1 3 引湿性引湿性 方法 取本品 照药物引湿性试验指导原则 中国药典 2010 年版二部附录 J 试验 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 15 页 取干燥的具塞玻璃称量瓶于试验前一天置于适宜的恒温干燥器内 25 1 下部放置氯化 铵饱和溶液 精密称定重量 m1 取三批供试品 批号 成品 成品 成品 适量 每批 2 份 平铺于称量瓶中 供试品厚度约为 1mm 左右 精密称定重量 m2 将称量瓶敞口放置 于恒温干燥器 24 小时 24 小时后盖好称量瓶盖 取出 精密称定重量 m3 按下面公式计 算增重百分率 增重百分率 m3 m2 m2 m1 100 根据引湿性特征描述与引湿性增重的界定 结果见表 3 2 S 4 2 1 3 1 表 3 2 S 4 2 1 3 1 他达拉非引湿性试验结果 批号m1 g m2 g m3 g m2 m1 g m3 m2 g 增重百分率 结果描述 27 2713327 5753127 575900 000590 194 成品 30 0399130 3058130 306340 000530 199 0 197 几乎无引湿性 25 4762825 7744025 775060 000660 221 成品 29 7192730 0037730 004530 000760 267 0 244 略有引湿性 26 6829226 9838026 984850 001050 349 成品 25 9965826 3010426 301550 000510 168 0 258 略有引湿性 标准规定 本品略有引湿性 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 16 页 3 2 S 4 2 1 4 熔点熔点 方法 取三批供试品 批号 成品 成品 成品 适量 照中国药典 2010 年版二部附 录 C 第一法操作 进行熔点试验 表 3 2 S 4 2 1 4 1 他达拉非熔点测定结果 批号初熔 终熔 284 5288 0 284 0290 0成品 284 0289 5 284 0289 5 284 0288 5成品 285 0287 5 284 0289 5 283 5289 0成品 283 5290 0 285 0288 5 283 0287 5USP 对照品 F0L003 283 0287 5 结果判定 上述数据范围为 283 0 290 0 考虑到不同操作者和不同实验室的实验误差 暂定本品的熔点为 278 0 291 0 当初熔 全熔时的温度均在规定的范围以内时 判为 符合 规定 但如有下列情况之一者 即判为 不符合规定 初熔温度低于规定范围的低限 全 熔温度超过规定范围的高限 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 17 页 3 2 S 4 2 2 鉴别鉴别 3 2 S 4 2 2 1 紫外紫外 可见分光光度法 可见分光光度法 UV 他达拉非在 221nm 284nm 和 291nm 波长处有最大紫外特征吸收 根据这个特征可以对 他达拉非进行鉴别 方法 依据 2010 版 中国药典 二部附录 A 取本品 用 0 1 三氟乙酸水溶液 乙腈 50 50 溶解配制成浓度约为 10 g mL 的供试品溶液 在 200 400nm 波长范围内扫描 结果判定 本品在 221nm 284nm 和 291nm 波长处应有最大紫外特征吸收 3 2 S 4 2 2 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法 HPLC 依据 2010 年版 中国药典 二部附录 D 高效液相色谱法规定进行操作 在含量测定项下 根据供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间是否一致 进行鉴别 方法 取含量测定项下的供试品溶液和对照品溶液 照含量测定项下的色谱条件检测 结果判定 供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间差不大于 0 2 分钟 可判为一致 3 2 S 4 2 2 3 红外光谱法 红外光谱法 IR 依据 2010 版 中国药典 二部附录 C 红外分光光度法规定进行操作 方法 采用溴化钾压片法 取本品约1 5mg 置玛瑙研钵中 加入干燥的溴化钾细粉约 300mg 充分研磨混匀 置直径为13mm的压片磨具中 加压至0 8 106kPa 保持压力2分钟 撤去压力 取出供试片 目视检测 片子应呈透明状 其中样品分布应均匀 并无明显的颗粒 状样品 置红外光谱仪中 在4000 400cm 1范围内扫描 结果判定 将供试品红外光谱与对照品红外光谱的全谱谱形进行比较 考察相应的谱带有 无差别和各谱带的相对强弱是否一致 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 18 页 3 2 S 4 2 3 检查检查 3 2 S 4 2 3 1 有关物质 有关物质 HPLC 法 法 依据 USP 36 Tadalafil 检查项下有关物质检测方法进行检查 具体依据 2010 年版 中国药 典 二部附录 D 高效液相色谱法进行操作 试验条件如下 仪器 Agilent 1100 HPLC System 配备 DAD 检测器 色谱柱 Agilent Zorbax SB C8 250 4 6mm 5 m 流动相 A 0 1 三氟乙酸 TFA 水溶液 流动相 B 乙腈 洗脱方式 梯度洗脱 检测波长 285nm 柱温 40 流速 1 0mL min 进样量 20 l 梯度洗脱表 T min Solution A Solution B 08515 38515 30595 33595 358515 458515 稀释液 0 1 TFA 乙腈 50 50 空白溶液 稀释液 对照品溶液 取他达拉非 USP 对照品适量 精密称定 用稀释液溶解稀释至 0 4mg mL 0 1 对照溶液 精密量取 0 1mL 对照品溶液至 100mL 量瓶中 用稀释液稀释定容 至刻度 混匀 他达拉非浓度 0 4 g mL 供试品溶液 取他达拉非供试品适量 精密称定 用稀释液溶解并稀释至 0 4mg mL 线性溶液 取他达拉非 D 色氨酸甲酯盐酸盐 中间体 1 中间体 2 氧化杂 质 2 和他达拉非双取代杂质制成浓度为 0 50 g mL 0 48 g mL 0 44 g mL 0 40 g mL 0 36 g mL 和 0 32 g mL 的他达拉非及各有关物质线性溶液 有关物质储备液 取 D 色氨酸甲酯盐酸盐 中间体 1 中间体 2 氧化杂质 2 他达 拉非双取代杂质和他达拉非 6R 12aS 非对映体各约 10mg 分别置 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 19 页 于 10mL 量瓶中 精密称定 用稀释液溶解定容至刻度 摇匀 0 1 杂质供试品溶液 取他达拉非对照品 10mg 精密称定 置于 25mL 量瓶中 先加少 量稀释液溶解 再精密加入 D 色氨酸甲酯盐酸盐 中间体 1 中间 体 2 氧化杂质 2 和他达拉非双取代杂质储备液各 100 l 用稀释 液稀释定容至刻度 混匀 他达拉非浓度 0 4mg mL 各有关物 质浓度 0 4 g mL 系统适用性溶液 取他达拉非对照品 10mg 精密称定 置于 25mL 量瓶中 先加少 量稀释液溶解 再精密加入他达拉非 6R 12aS 非对映体储备液 1mL 用稀释液稀释定容至刻度 混匀 他达拉非浓度 0 4mg mL 他达拉非 6R 12aS 非对映体浓度 0 4 g mL 系统适用性 按照色谱条件分别进样空白溶液 系统适用性溶液 0 1 对照溶 液 供试品溶液 记录色谱图 系统适用性要求 空白溶液无干扰峰 重复进样 6 针 0 1 对照溶液 在 6 针 0 1 对照溶液溶液所得色谱图中 主峰峰面积的 RSD 2 0 系统适 用性溶液中 他达拉非和他达拉非 6R 12aS 非对映体的分离度不 得小于 2 0 相对保留时间应约为 1 03 含量计算方法 用 0 1 对照溶液以加校正因子的主成分自身对照法计算有关物 质含量 具体试验操作如下 取本品 精密称定 用稀释液溶解并定容稀释制成每 1 ml 中约含 0 4 mg 的溶液 作为供 试品溶液 取他达拉非 USP 对照品 精密称定 用稀释液溶解并定容稀释制成每 1 ml 中约含 0 4 g 的溶液 作为对照溶液 照上述色谱条件 检测波长为 285 nm 精密量取供试品溶液和 对照溶液各 20 l 分别注入液相色谱仪 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰 按加校正因子主 成分自身对照法计算 单个最大杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1 倍 0 1 剔除 在相对保留时间约为 1 03 处杂质峰后 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 3 倍 0 3 供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积 0 5 倍 0 05 的峰可忽略不计 计算公式 100 1000 A A 关关 关关 关关关关 其中 为供试品溶液中杂质峰面积 为对照溶液主峰峰面积A关关A关关 3 2 S 4 2 3 2 对映异构体和非对映异构体 对映异构体和非对映异构体 HPLC 法 法 依据 USP 36 Tadalafil 检查项下对映异构体和非对映异构体检测方法进行检查 具体依据 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 20 页 2010 年版 中国药典 二部附录 D 高效液相色谱法进行操作 试验条件如下 仪器 Agilent 1100 HPLC System 配备 DAD 检测器 色谱柱 Daicel CHIRALPAK AD H 柱 250 4 6mm 5 m R 流动相 A 正己烷 异丙醇 50 50 等度洗脱 检测波长 222nm 柱温 25 流速 0 75mL min 进样量 10 l 稀释液 正己烷 异丙醇 乙腈 40 40 20 空白溶液 稀释液 对照品溶液 取他达拉非 USP 对照品适量 精密称定 用稀释液溶解稀释至 0 5mg mL 0 1 对照溶液 精密量取 0 1mL 对照品溶液至 100mL 量瓶中 用稀释液稀释定容 至刻度 混匀 他达拉非浓度 0 5 g mL 供试品溶液 取他达拉非供试品适量 精密称定 用稀释液溶解并稀释至 0 5mg mL 线性溶液 取他达拉非 6S 12aS 对映异构体 6S 12aR 非对映异构体和 6R 12aS 非对映异构体制成浓度为 0 25 g mL 0 40 g mL 0 50 g mL 0 80 g mL 和 1 00 g mL 的他 达拉非及各异构体线性溶液 异构体储备液 取 6S 12aS 对映异构体 6S 12aR 非对映异构体和 6R 12aS 非对映 异构体各约 10mg 分别置于 10mL 量瓶中 精密称定 用稀释液 溶解定容至刻度 摇匀 0 1 异构体供试品溶液 取他达拉非对照品 12 5mg 精密称定 置于 25mL 量瓶中 先 加少量稀释液溶解 再精密加入 6S 12aS 对映异构体 6S 12aR 非 对映异构体和 6R 12aS 非对映异构体储备液各 100 l 用稀释液稀 释定容至刻度 混匀 他达拉非浓度 0 5mg mL 各有关物质浓 度 0 5 g mL 系统适用性溶液 取等量的他达拉非对照品和 6R 12aS 非对映体各适量 精密称定 置于同一量瓶中 用稀释液溶解并稀释定容制成每 1mL 中各含 10 g 的溶液 混匀 系统适用性 按照色谱条件分别进样空白溶液 系统适用性溶液 0 1 对照溶 液 供试品溶液 记录色谱图 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 21 页 系统适用性要求 空白溶液无干扰峰 重复进样 6 针 0 1 对照溶液 在 6 针 0 1 对照溶液溶液所得色谱图中 主峰峰面积的 RSD 2 0 系统适 用性溶液中 他达拉非和他达拉非 6R 12aS 非对映体的分离度不 得小于 2 0 相对保留时间应约为 0 79 异构体含量计算方法 用主成分自身对照法计算异构体含量 具体试验操作如下 取本品 精密称定 用稀释液溶解并定容稀释制成每 1 ml 中约含 0 5 mg 的溶液 作为供 试品溶液 取他达拉非 USP 对照品 精密称定 用稀释液溶解并定容稀释制成每 1 ml 中约含 0 5 g 的溶液 作为对照溶液 照上述色谱条件 检测波长为 222nm 精密量取供试品溶液和 对照溶液各 10 l 分别注入液相色谱仪 供试品溶液的色谱图中如有异构体峰 按主成分自身 对照法计算 单个最大异构体峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1 倍 0 1 各异构体峰 面积的和不得大于对照溶液主峰面积的 3 倍 0 3 供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液 主峰面积 0 5 倍 0 05 的峰可忽略不计 计算公式 100 1000 A A 关关 关关 关关关关 其中 为供试品溶液中异构体峰面积 为对照溶液主峰峰面积A关关A关关 3 2 S 4 2 3 3 残留溶剂 残留溶剂 GC 法 法 依据 2010 年版 中国药典 二部附录 P 气相色谱法 依法进行检查 试验条件如下 仪器 SHIMADZU GCMS QP2010SE FID 检测器 色谱柱 Agilent DB 624 30mm 0 53mm 3 0 m 柱温 起始温度 35 恒温 13 5 分钟后 以每分钟 25 的升温速度升至 220 维持 5 分钟 进样口温度 200 检测器温度 250 载气 氮气 载气流速 6mL min 分流比 1 10 进样量 1 l 空白溶液 二甲亚砜 对照品储备液 精密称取甲醇 无水乙醇 乙腈 二氯甲烷 2 甲氧基乙醇 正庚烷 正丁醇和 N N 二甲基甲酰胺适量 加二甲亚砜定量稀释制成每 1ml 中约 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 22 页 含甲醇 600 g 无水乙醇 1000 g 乙腈 82 g 二氯甲烷 120 g 2 甲氧 基乙醇 10 g 正庚烷 1000 g 正丁醇 1000 g N N 二甲基甲酰胺 176 g 的溶液 对照溶液 精密量取对照品贮备液 5 0 ml 置 10ml 量瓶中 用二甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为对照品溶液 供试品溶液 取他达拉非约 0 5g 精密称定 置 5ml 量瓶中 加二甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 系统适用性 分别进样空白溶液 对照溶液 供试品溶液 记录色谱图 系统适用性要求 各溶剂色谱峰之间的分离度不得小于 1 5 理论塔板数不得低于 5000 残留溶剂计算 用对照溶液以外标法计算各溶剂含量 具体试验操作如下 精密称取甲醇 无水乙醇 乙腈 二氯甲烷 2 甲氧基乙醇 正庚烷 正丁醇和 N N 二甲 基甲酰胺适量 加二甲亚砜定量稀释制成每 1ml 中约含甲醇 600 g 无水乙醇 1000 g 乙腈 82 g 二氯甲烷 120 g 2 甲氧基乙醇 10 g 正庚烷 1000 g 正丁醇 1000 g N N 二甲基甲 酰胺 176 g 的溶液 作为对照品贮备液 精密量取对照品贮备液 5 0 ml 置 10ml 量瓶中 用二 甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为对照品溶液 另取本品约 0 5g 精密称定 置 5ml 量瓶中 加 二甲亚砜稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 照残留溶剂测定法 中国药典 2010 版二部附录 P 试验 以 6 氰丙基苯基 94 二甲基硅氧烷共聚物为固定液 或极性相近 起始柱温 35 维持 13 5 分钟后 以每分钟 25 的速率升温至 220 维持 5 分钟 检测器为氢火焰离 子化检测器 检测器温度为 250 进样口温度为 200 取对照品溶液 1 l 注入气相色谱仪 记录色谱图 各色谱峰之间的分离度均应不小于 1 5 精密量取供试品溶液和对照品溶液各 1 l 分别注入气相色谱仪 记录色谱图 按外标法以峰面积计算 含甲醇不得过 0 3 含乙醇 不得过 0 5 含乙腈不得过 0 041 含二氯甲烷不得过 0 06 含 2 甲氧基乙醇不得过 0 005 含正庚烷不得过 0 5 含正丁醇不得过 0 5 含 N N 二甲基甲酰胺不得过 0 088 计算公式如下 100 C AC A 关关关关 关关关关 关关关关 其中 为样品中杂质峰面积 对照溶液中杂质峰面积 A关关A关关 对照溶液浓度 供试品溶液浓度C关关C关关 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 23 页 3 2 S 4 2 3 4 干燥失重干燥失重 根据 2010 年版 中国药典 二部附录 L 依法检查 具体操作方法如下 1 称取供试品 称取供试品约 1 0g 置 105 下条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中 精 密称定 2 干燥 将称量瓶置 105 下进行干燥 干燥时需将瓶盖取下置称量瓶旁或将瓶盖半开 干燥取出时需将称量瓶盖好 3 称重 将称量瓶取出后置干燥器中放冷至室温 一般需 30 60 分钟 再称定重量 4 恒重 称定后的供试品按 2 和 3 操作 直至恒重 备注 干燥至恒重 除另 有规定外 系指在规定条件下连续两次干燥后称重的差异在 0 3mg 以下的重量 干燥过程中的 第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥 1 小时后进行 结果判定 本品减失重量不得过 0 05 计算公式如下 100 1 321 W WWW 干燥失重 其中 W1 供试品的重量 g W2 称量瓶恒重的重量 g W3 称量瓶 供试品 恒重的重量 g 3 2 S 4 2 3 5 炽灼残渣炽灼残渣 根据 中国药典 2010 年版二部附录 N 炽灼残渣检查方法 依法检查 方法 取干净坩埚 标记后放置于 600 马弗炉中炽灼至恒重 放入干燥器中冷却至室温 精密称重 m1 取三批供试品各约 1g 按标记的顺序置于炽灼至恒重的铂坩埚中 精密称 重 m2 用酒精灯在室温条件下缓缓炽灼至完全炭化 放冷 加硫酸 0 5 1ml 使湿润 低温 加热至硫酸蒸汽除尽后 在 600 炽灼至完全灰化 移至干燥器内 放冷 精密称定 再在 600 炽灼至恒重 结果判定 本品炽灼残渣不得过 0 1 3 2 S 4 2 3 6 重金属重金属 根据中国药典 2010 年版二部附录 H 第二法重金属检查方法 依法检查 方法 取 25ml 纳氏比色管三支 分别标记为甲 乙 丙 取炽灼残渣 加硝酸 0 5ml 蒸 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 24 页 干 至氧化氮蒸汽除尽 放冷 加盐酸 2ml 置水浴上蒸干后加水 15ml 滴加氨试液至对酚酞 指示液显微粉红色 再加醋酸盐缓冲液 pH 3 5 2ml 微热溶解后 移至纳氏比色管中 加水 稀释成 25ml 作为甲管 另加水置瓷皿中蒸干后 加醋酸盐缓冲液 pH 3 5 2ml 与水 15ml 微热溶解后 移至纳氏比色管中 加标准铅溶液 1ml 再用水稀释成 25ml 作为乙管 再在甲 乙管中分别接入硫代乙酰胺试液各 2ml 摇匀 放置 2 分钟 同置白纸上 自上而下透视 比 较甲 乙 丙三管的颜色差异 结果判定 当乙管所呈颜色浅于甲管 20 g 即 20ppm 判为符合规定 他达拉非药学研究资料 CTD 3 2 S 4 原料药的质量控制 3 2 S 4 2 分析方法 第 25 页 3 2 S 4 2 4 含量测定 含量测定 HPLC 法 法 依据 USP 36 Tadalafil 含量测定项下方法进行测定 具体依据 2010 年版 中国药典 二部 附录 D 高效液相色谱法进行操作 试验条件如下 仪器 Agilent 1100 HPLC System 配备 DAD 检测器 色谱柱 Agilent Zorbax SB C8 250 4 6mm 5 m 流动相 0 1 三氟乙酸 TFA 水溶液 乙腈 55 45 检测波长 285nm 柱温 40 流速 1 5mL min 进样量 20 l 稀释液 0 1 TFA 乙腈 50 50 空白溶液 稀释液 对照溶液 取他达拉非对照品适量 精密称定