过敏原血清学检测与临床应用

,过敏原血清学检测,金 花,2013.3.22,基本概念, 过敏反应：, 1906年von Piguet提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生,的一种“改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。, 超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生,的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。, 过敏原：致敏原 or 变应原, 能够使人发生过敏的抗原。,吸入过敏原,接触过敏原,过敏原输注过敏原,过敏原食物过敏原,4种过敏反应类型 (超敏反应)by Coombs und Gell (1963),Type I早期反应,核 Platzhalter,数分钟内花粉热,Type II细胞毒反应,坏,数小时到一天输血反应,Type III免疫复合物形成,IgE-介导肥大细胞脱 IgG/IgM介导靶细胞的破持续产生IgG/IgM 免疫复,合物Platzhalter,数小时到一天farmers lungs,Type IV细胞免疫反应,T-细胞介导反应,12小时到数周接触过敏反应 (Ni), 过敏性鼻炎、鼻息肉、鼻窦炎 过敏性眼病, 哮喘、过敏性肺炎, 特应性皮炎和接触性皮炎 慢性荨麻疹和血管性水肿 过敏性休克 昆虫过敏 药物过敏 食物过敏,fromManual of Allergy and Immunology,常见过敏性疾病,流行病学,平均发病率20%（845%）过去10年，成倍增加（doubled）二十一世纪的流行病（the epidemic of 21th century）,TriggersEpisodic,（多有明显诱因）（呈发作性，症状来得快，去的快）,Reversible （可完全缓解,查体常无阳性体征）Recurrent （病情反复，多与过敏原暴露相关）,Atopic,（特应性，发生于过敏体质者）,临床表现的特点,引起过敏反应因素, 遗传因素, 接触过敏原的机会, 抗原性质, Th细胞及细胞因子,过敏反应: 诊断,IgE检测原理,From ALLERGY 4th Edition,检测IgE,步骤1:,总IgE,ELISA,步骤2:,特异性 IgE EUROLINE,Extinction,总IgE ELISA,标准品,100 IU/ml,10 IU/ml0 IU/ml,WHO 75/502, 4 点定标,Example for a standard curv e,0,0,5,2500 IU/ml1,51,0,100,200,300,400,500,600,IgE IU/ml,总IgE ELISA: 参考范围, 参考范围 参考范围,：,可能存在过敏反应一般无过敏反应,特异性 IgE：EUROLINE, 简便和快捷的实验操作 仅需少量样本 (过夜温育), 结果基于广泛应用的EAST分级系统, 通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读,EUROLINE检测系统,颜色反应,底物,膜条,色原抗原提取物,特异性 IgE：EUROLINE温育,AP标记二抗,AKP,清洗 3 x 5min,60 min 二抗反应清洗 3 x 5min10 min 底物温育自动化判读或肉眼观察,60 min,未稀释,过夜,1:11 稀释,特异性IgE分级标准及临床意义, 结果判读: EUROLineScan,特异性 IgE,欧蒙印迹法自动化,IgE,过敏原优敏组合,Q1：TIgE & sIgE关系,总IgE : 结果解释1. 总IgE 超出参考范围大多数是由于过敏反应导致,例外: 寄生虫病; 免疫抑制; HIV; 重度烧伤,2. 临床相关特异性IgE结果,与总IgE相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能性就越大.,特异性 IgE,总IgE,特异性 IgE总IgE,5 IU/ml (kU/l)200 IU/ml,总IgE : 结果解释举例患者1,特异性 IgE总IgE,5 IU/ml (kU/l)25 IU/ml,患者2,总IgE浓度与特异性IgE水平关系,并不存在必然相关性, 约20-30%超敏疾病患者特异性IgE可能较高，但总IgE可维持正,常，甚至低于几何均值。, 如患者仅对牛奶高度过敏，其特异性IgE为18kU/L。对于特异性IgE而言，该结果已属于严重过敏（IV级）的范畴。从理论上讲，该患者的总IgE也应该为18kU/L。而对于总IgE来说，这个结果是很低的；, 总IgE升高并不一定是超敏反应，而过敏患者总IgE也不总是一定,升高。这一要点在评价总IgE检测结果时非常重要。,Q2：CCD？,何谓 CCDs?,CCD 是“Crossreactive Carbohydrate Determinants（交叉反应性碳水化合物决定子）”的英文缩写. 该结构为结合于糖蛋白N末端的多聚糖。依据糖基化,作用的不同而产生不同的结构。,举例: MMXF (Man1-6(Man1-3) (Xyl1-2)Man1-4GlcNAc1-4 (Fuc1-3)GlcNAc),CCDs 在自然界中的存在?,CCDs 存在于多种植物性或动物源性的过敏原中。由于结构的相似性导致一些独特的交叉反应出现。,典型含CCD结构的过敏原: 植物花粉, 植物性食物 植物乳胶 昆虫毒液,抗CCD IgE 结果的临床价值?,大部分糖蛋白仅含有一个IgE结合的多聚糖，因此无法促进结合有IgE抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化，进而无法活化肥大细胞发生脱核及释放组胺的作用，因此对于仅为抗CCD IgE抗体阳性的患者而言往往无临床症状的表现。,在何种情况下应排除抗CCD IgE 的干扰?,当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下。当某一患者出现多个特异性IgE结果阳性时。,举例:,花生: 特异性 IgE 阳性但并不表现出临床症状出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现.植物乳胶: 针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性，但无相关接触史。昆虫毒液: 针对蜜蜂和马蜂特异性IgE阳性的患者可能存在交叉反应。,1715例体检人群的问卷统计及sIgE比较，存在不符合现象。CCD-IgE是引起sIgE 检测交叉反应的重要因素，干扰血清sIgE检测结果，导致血清sIgE 检测与临床症状不符合。EUROIMMUN,EUROIMMUN,研究背景：1个病人皮试和血清检测结果不相符，分析研究了造成不符合的原因，评价CCD在其中的作用。,实验方法：用已知碳水化合物结构的糖蛋白做抑制实验。用糖蛋白做和血,清结合，同时做过敏原提取物和血清结合。共分析了428份结果，最终确定CCD引起假阳性的原因。,EUROIMMUN,独家包被有CCD指示带, CCD是“交叉反应性碳水化合物决定因子”, CCD存在于多种植物性或动物源性的过敏原中，,由于结构相似性导致一些独特的交叉反应出现, 解释交叉反应的假阳性结果,CCD,Q3：食物不耐受&食物过敏,EUROIMMUN,食物过敏vs食物不耐受,EAACI：欧洲变态反应与临床免疫学会,食物过敏vs食物不耐受, 食物过敏：,免疫介导；,如IgE免疫球蛋白 食物不耐受：非免疫介导；如酶促作用、药理作用EAACI：欧洲变态反应与临床免疫学会EUROIMMUN,EUROIMMUN,食物过敏vs食物不耐受,美国变态反应和免疫学会及国立卫生研究院（NIH）,定义：, 食物不良反应：指一切由食物摄入引起的不良反应。 食物过敏：指所有免疫学机制引起的不良反应。 食物不耐受：指非免