Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿

华润三九医药股份有限公司 CR Sanjiu Medical Pharmaceutical Co Ltd 第 1 页 总 6 页 标题标题Waters e2695 型高效液相色谱仪标准操作程序型高效液相色谱仪标准操作程序 起起 草草 日日 期期颁发部门 研发事业部颁发部门 研发事业部页数页数 审审 核核 日日 期期 QA 审核审核日日 期期 批批 准准 日日 期期 生效日期生效日期 分发部门 分发部门 变更记载 变更记载 原文件号原文件号 批准日期批准日期 生效日期生效日期 变更原因及目的 变更原因及目的 文件系统修订 文件系统修订 1 目的 目的 WatersWaters e2695e2695 型型高效液相色谱仪的一般标准操作程序 高效液相色谱仪的一般标准操作程序 2 范围 范围 WatersWaters e2695e2695型高效液相色谱仪 型高效液相色谱仪 3 责任人 相关实验人员责任人 相关实验人员 4 设备部件及名称设备部件及名称 4 1 Waters e2695 分离单元 分离单元 4 2 2998 型二极管阵列检测器 型二极管阵列检测器 4 3 EmpowerEmpower 色谱工作站 色谱工作站 各部件可独立操作或通过色谱工作站控制 色谱数据处理由色谱工作站完成 其操作系统为各部件可独立操作或通过色谱工作站控制 色谱数据处理由色谱工作站完成 其操作系统为 Windows XP Profesional SP3 工作站软件为色谱管理软件 工作站软件为色谱管理软件 5 标准操作程序标准操作程序 5 1 开机前准备开机前准备 5 1 1 检查桌面是否清洁 整齐 检查桌面是否清洁 整齐 5 1 2 检查设备是否清洁 连接管线是否正常 色谱柱是否需要更换 检查设备是否清洁 连接管线是否正常 色谱柱是否需要更换 5 1 3 检查电源线有无破损 检查电源线有无破损 5 1 4 接通电源 检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常 接通电源 检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常 5 1 5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂 流动相和纯水应用微孔滤膜过滤 纯有机相或含一定准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂 流动相和纯水应用微孔滤膜过滤 纯有机相或含一定 比便例有机相的用有机系的滤膜 水相或缓冲盐的用水系滤膜 比便例有机相的用有机系的滤膜 水相或缓冲盐的用水系滤膜 一次制得的纯水或缓冲盐流动相应 一次制得的纯水或缓冲盐流动相应 在连续在连续 2424 小时内使用完 如未使用完也应弃去不用 并重新配制新鲜的流动相 如需使用 应重新小时内使用完 如未使用完也应弃去不用 并重新配制新鲜的流动相 如需使用 应重新 过滤 流动相的过滤 流动相的 pHpH 值应在色谱柱填料允许的范围内 该泵带有真空脱气机 可不超声 但要在泵电值应在色谱柱填料允许的范围内 该泵带有真空脱气机 可不超声 但要在泵电 源开启后 等脱气机停止工作后 约需源开启后 等脱气机停止工作后 约需 5 5 分钟 再进行泵的其它操作 分钟 再进行泵的其它操作 5 1 6 准备样品 为延长层析柱使用寿命 建议使用流动相溶解样品 如果不是 一定要做预试验 准备样品 为延长层析柱使用寿命 建议使用流动相溶解样品 如果不是 一定要做预试验 确保样品在流动相溶液中不出现沉淀 如果样品中成份复杂 特别含有强保留成分 建议过确保样品在流动相溶液中不出现沉淀 如果样品中成份复杂 特别含有强保留成分 建议过 C18 小小 柱预处理 样品在进样前必须经柱预处理 样品在进样前必须经 0 45 m 的微孔滤膜滤过 根据溶剂性质选择合适的滤膜 过滤完毕的微孔滤膜滤过 根据溶剂性质选择合适的滤膜 过滤完毕 华润三九医药股份有限公司 CR Sanjiu Medical Pharmaceutical Co Ltd 第 2 页 总 6 页 后 置于样品盘上 记录样品所放的位置号 后 置于样品盘上 记录样品所放的位置号 5 2 开机开机 接通稳压电源 待电压稳定在接通稳压电源 待电压稳定在 220V 时 依次打开下列仪器的电源 高压泵 柱箱 系统时 依次打开下列仪器的电源 高压泵 柱箱 系统 控制仪 色谱工作站 接通控制仪 色谱工作站 接通 2695 分离单元后 约分离单元后 约 20s 仪器开始自检 约仪器开始自检 约 1min 后 显示主屏幕 后 显示主屏幕 此时继续各部件的初始化 待主屏幕上方标题区出现此时继续各部件的初始化 待主屏幕上方标题区出现 Idle 时 仪器进入待命状态 时 仪器进入待命状态 5 3 溶剂管理系统的准备溶剂管理系统的准备 5 3 1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂 按流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂 按 Menu Status 进入 进入 Status 1 屏幕 屏幕 5 3 1 1 湿启动湿启动 在在 Status 1 屏幕下 光标选屏幕下 光标选 Compomtion 中欲使用的流动相 输入流动相中欲使用的流动相 输入流动相 组成及比例 按组成及比例 按 Enter 再用光标选再用光标选 Degasser 中的中的 Normal 按 按 Enter 按 按 Direct Function 光标选 光标选 Wet Prime 输入流速及时间 输入流速及时间 按 按 OK 5 3 1 2 当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时 进行干启动 在当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时 进行干启动 在 Status 1 屏幕下 屏幕下 按按 Direct Function 光标选 光标选 Dry Prime 按 按 Enter 显示 显示 Dry Prime 屏幕 按欲启动的屏幕 按欲启动的 溶剂管路的屏幕键 如溶剂管路的屏幕键 如 OpenA 光标选 光标选 Duration 按数字键输入 按数字键输入 5min 按 按 Continue 待限定时间结束后 重复操作 使实验所需的各溶剂管路均启动 排气并充满流动相 待限定时间结束后 重复操作 使实验所需的各溶剂管路均启动 排气并充满流动相 5 4 样品管理系统的准备样品管理系统的准备 5 4 1 冲洗自动进样器在冲洗自动进样器在 Status 1 屏幕下 光标选屏幕下 光标选 Composition 输入流动相的组成 按 输入流动相的组成 按 Direct Function 光标选 光标选 PurgeInjector 按 按 Enter 显示 显示 Purge Injector 屏幕 输入屏幕 输入 Sample Loop Volumes 6 0 光标下移 光标下移 Compression Check 按任意数字键 按 按任意数字键 按 OK 5 4 2 冲洗进样针在主屏幕下 按冲洗进样针在主屏幕下 按 Diag 显示 显示 Diagnositcs 屏幕 按屏幕 按 Prime Ndl Wash 显 显 示示 Prime Needle Wash 屏幕 按屏幕 按 Start 30s 内应见溶剂从废液排放口流出 按内应见溶剂从废液排放口流出 按 Close Exit 5 4 3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下 按冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下 按 Diag 显示 显示 Diagnosities 屏幕 按屏幕 按 Prime Seal Wash 显示 显示 Prime Seal Wash 屏幕 按屏幕 按 Start 待排放口有水流出 按 待排放口有水流出 按 Halt Close Exit 5 4 4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置 打开样品仓门 显示装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置 打开样品仓门 显示 Door is Open 屏幕 屏幕 装入样品盘 按装入样品盘 按 Next 直至所有样品盘装毕 关仓门 直至所有样品盘装毕 关仓门 5 5Empower 色谱工作站操作色谱工作站操作 5 5 1 登录登录 点击桌面上点击桌面上 Empower 图标 出现图标 出现 Empower 登录窗口 输入用户名和密码 然后单击登录窗口 输入用户名和密码 然后单击 确定确定 进入 进入 Empower 每次登录前必须输入用户名和密码 注 出厂设置的用户名为 每次登录前必须输入用户名和密码 注 出厂设置的用户名为 system 密码为 密码为 manager 5 5 2 项目管理项目管理 5 5 2 1 新建项目新建项目 双击 双击 配置系统配置系统 进入 按进入 按 新建项目向导新建项目向导 提示建立新项目 提示建立新项目 注 项目名中不能出现空格 可使用下划线注 项目名中不能出现空格 可使用下划线 分隔词 另外 名称不能以数字开头 项目是方法 分隔词 另外 名称不能以数字开头 项目是方法 结果 自定义字段 视图筛选器和原始数据的集合 由用户定义 该集合驻留在结果 自定义字段 视图筛选器和原始数据的集合 由用户定义 该集合驻留在 Empower 数据库数据库 中并在中并在 浏览项目浏览项目 中显示 项目是为了方便用户归类 管理和检索相应的数据 应根据实际情况中显示 项目是为了方便用户归类 管理和检索相应的数据 应根据实际情况 来决定是否建立 并不是每次开机都要创建 来决定是否建立 并不是每次开机都要创建 5 5 3 数据采集数据采集 华润三九医药股份有限公司 CR Sanjiu Medical Pharmaceutical Co Ltd 第 3 页 总 6 页 5 5 3 1 双击双击 运行样品运行样品 进入 在出现的页面的左框中选择欲存储采集数据的进入 在出现的页面的左框中选择欲存储采集数据的 项目项目 在右框中选择 在右框中选择 所需的色谱系统 然后单击所需的色谱系统 然后单击 确定确定 5 5 3 2 出现出现 运行样品运行样品 窗口后 选择窗口后 选择 单一单一 或或 样品样品 表单画面中的表单画面中的 创建方法组创建方法组 快捷键快捷键 出现新 出现新 方法组 选择仪器方法窗口 可以在现有的仪器方法中选择一个或者单击方法组 选择仪器方法窗口 可以在现有的仪器方法中选择一个或者单击 新建新建 来创建新的仪器方来创建新的仪器方 法 如果单击了法 如果单击了 新建新建 会出现仪器方法编辑器 会出现仪器方法编辑器 窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个 图标 选中不同的图标 即可编辑相应的仪器参数 请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体图标 选中不同的图标 即可编辑相应的仪器参数 请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体 参数 编辑仪器参数完成后单击参数 编辑仪器参数完成后单击 文件文件 另存为另存为 出现 出现 保存仪器方法保存仪器方法 对话框 输入仪器方法名 对话框 输入仪器方法名 单击单击 保存保存 保存该仪器方法 保存该仪器方法 关闭关闭 仪器方法编辑器仪器方法编辑器 窗口 窗口 新建的仪器方法出现在仪器方法列新建的仪器方法出现在仪器方法列 表中 选中所要的仪器方法 表中 选中所要的仪器方法 单击单击 下一步下一步 出现出现 选择缺省方法选择缺省方法 页 页 选择选择 处理方法处理方法 与与 报告报告 方法方法 如尚未建立合适的方法 则接受默认设置 如尚未建立合适的方法 则接受默认设置 单击 单击 下一步下一步 出现出现 命名方法组命名方法组 页 输入页 输入 方法组名 缺省设置成与刚建立的仪器方法名方法组名 缺省设置成与刚建立的仪器方法名 相同 相同 必要时输入注释后 单击 必要时输入注释后 单击 完成完成 回到运行回到运行 样品窗口 样品窗口 5 5 3 3 在在 方法组方法组 下拉菜单中选择欲使用的方法组 同时在下方的下拉菜单中选择欲使用的方法组 同时在下方的 仪器方法仪器方法 下拉菜单中 选择下拉菜单中 选择 欲使用的仪器方法 欲使用的仪器方法 监视器监视器 键键 单击单击 中中 监视器监视器 键 观察基线 键 观察基线 5 5 3 4 待系统平衡后 即可单击待系统平衡后 即可单击 停止停止 键 终止观察基线 随后等到系统空闲后 设定采集的参键 终止观察基线 随后等到系统空闲后 设定采集的参 数样品名 功能 样品瓶以及样品体积与运行时间 最后单击数样品名 功能 样品瓶以及样品体积与运行时间 最后单击 进样进样 或或 运行运行 开始采集数据 开始采集数据 进样时状态条会做出指示 色谱数据被采集并显示在进样时状态条会做出指示 色谱数据被采集并显示在 实时实时 图中图中 注 如果不知道运行时间 第一 注 如果不知道运行时间 第一 次进样应设长一些 如填次进样应设长一些 如填 60min 进样确认后 进第二针时再改回适合的时间 进样确认后 进第二针时再改回适合的时间 注 注 方法组方法组 栏中 默认会出现刚刚建立好的方法组的名称 如果需要选择其它已经建立过的适栏中 默认会出现刚刚建立好的方法组的名称 如果需要选择其它已经建立过的适 用的采集方法组 则可从此栏的下拉菜单中选中即可 用的采集方法组 则可从此栏的下拉菜单中选中即可 5 5 4 数据处理数据处理 5 5 4 1 单击鼠标左键进入单击鼠标左键进入 浏览项目浏览项目 选择欲浏览数据所在的项目 然后单击 选择欲浏览数据所在的项目 然后单击 确定确定 进入该项 进入该项 目 目 5 5 4 2 在在 通道通道 选项卡中 选中欲修改的标准品和样品信息选项卡中 选中欲修改的标准品和样品信息 注 在 注 在 Empower 进行处理时 只有进行处理时 只有 标样能够生成校正曲线 然后才能对未知样进行定量计算 如果在进样时没有正确设置样品类型 标样能够生成校正曲线 然后才能对未知样进行定量计算 如果在进样时没有正确设置样品类型 可在此窗口直接进行修改 也可针对具体情况 可在此窗口直接进行修改 也可针对具体情况 修改样品名称 样品重量以及稀释倍数 修改样品名称 样品重量以及稀释倍数 5 5 4 3 在在 通道通道 选项卡中选择欲处理的数据 单击 查看 打开 选项卡中选择欲处理的数据 单击 查看 打开 出现出现 查看 主窗口查看 主窗口 单击 单击 处理方法向导 处理方法向导 出现 出现 处理方法向导处理方法向导 对话框 选择对话框 选择 新建处理方法新建处理方法 然后单击 然后单击 确定确定 按向导提 按向导提 示完成处理方法的建立并保存 积分并保存全部结果 示完成处理方法的建立并保存 积分并保存全部结果 5 5 5 数据的打印数据的打印 5 5 5 1 单击鼠标左键进入单击鼠标左键进入 浏览项目浏览项目 选择欲打印数据所在的项目 然后单击确定 进入该项目 选择欲打印数据所在的项目 然后单击确定 进入该项目 在在 结果结果 选项卡中选择欲打印的结果 单击 预览出版 选项卡中选择欲打印的结果 单击 预览出版 注 如果在非注 如果在非 结果结果 选项卡 例如通道 中单击预览出版 则无法查看到积分结果 选项卡 例如通道 中单击预览出版 则无法查看到积分结果 5 5 5 2 出现出现 打开报告方法打开报告方法 对话框 选择对话框 选择 使用对选中的数据适用的报告方法使用对选中的数据适用的报告方法 或者在 或者在 使用以下使用以下 的报告方法的报告方法 下拉菜单中选择适当的报告方法 然后单击下拉菜单中选择适当的报告方法 然后单击 确定确定 此时若选择 此时若选择 峰综合报告峰综合报告 格式 格式 可计算峰面积可计算峰面积 保留时间的重现性等统计信息 如果只需要峰面积等信息 则可选择保留时间的重现性等统计信息 如果只需要峰面积等信息 则可选择 缺省单个报告缺省单个报告 5 5 5 3 在屏幕上即出现报告预览窗口 如预览后无误 单击 打印 在屏幕上即出现报告预览窗口 如预览后无误 单击 打印 打印报告 打印报告 华润三九医药股份有限公司 CR Sanjiu Medical Pharmaceutical Co Ltd 第 4 页 总 6 页 如果想批处理打印 可以在如果想批处理打印 可以在 项目项目 窗口中 点击窗口中 点击 结果结果 标签 用标签 用 键盘键盘 Ctrl 鼠标左键鼠标左键 选黑要出选黑要出 报告的样品 单击 打印 在随后出现的报告的样品 单击 打印 在随后出现的 后台处理及生成报告后台处理及生成报告 页面中 见下图 页面中 见下图 确认 确认 打印打印 方框方框 中打勾 中打勾 处理处理 和和 导出导出 方框中为空 选中方框中为空 选中 使用指定的报告方法使用指定的报告方法 在其下拉菜单中选择所需的报告 在其下拉菜单中选择所需的报告 方法 点击方法 点击 确定确定 即可 即可 5 6 关机关机 5 6 1 数据采集完毕后 关闭检测器电源开关 数据采集完毕后 关闭检测器电源开关 5 6 2 使用完毕 按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱 系统管路 自动进样器 进样针和柱塞杆密封垫 使用完毕 按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱 系统管路 自动进样器 进样针和柱塞杆密封垫 确保确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后 关闭电源开关 分离单元已彻底冲洗干净后 关闭电源开关 5 6 3 处理数据并打印报告后 关闭计算机和打印机电源开关 并做使用登记 处理数据并打印报告后 关闭计算机和打印机电源开关 并做使用登记 6 注意事项注意事项 6 1 更换溶剂时 若液体流路中有气泡 可用注射器抽吸 彻底排除气泡更换溶剂时 若液体流路中有气泡 可用注射器抽吸 彻底排除气泡 6 2 流动相禁止使用氯仿 三氯 代 苯 亚甲基氯 四氢呋喃 甲苯等 慎重使用四氯化碳 乙流动相禁止使用氯仿 三氯 代 苯 亚甲基氯 四氢呋喃 甲苯等 慎重使用四氯化碳 乙 醚 异丙醚 酮 甲基环己胺等 以免造成对柱塞密封圈的腐蚀 醚 异丙醚 酮 甲基环己胺等 以免造成对柱塞密封圈的腐蚀 6 3 柱温箱一旦发生报警 一定要及时找到原因 若实验室湿度太高 则需采取相应的除湿措实 柱温箱一旦发生报警 一定要及时找到原因 若实验室湿度太高 则需采取相应的除湿措实 若柱温箱中发生漏液现象 则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液 长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传若柱温箱中发生漏液现象 则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液 长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传 感器 感器 6 4 紫外检测器要紫外检测器要 晚开 早关晚开 早关 在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启 若不需要做样 可 在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启 若不需要做样 可 设置一个较低的流速 如设置一个较低的流速 如 0 05ml min 如果流动池中有气泡 则会提示漂移过大无法通过自检和校 如果流动池中有气泡 则会提示漂移过大无法通过自检和校 正 正 7 维护保养规程维护保养规程 7 1 检查检查 HPLC 的日常操作条件 的日常操作条件 7 1 1 检查温度 检查温度 10 30 7 1 2 检查相对湿度 检查相对湿度 80 7 1 3 检查稳压电源是否正常工作 检查稳压电源是否正常工作 7 1 4 检查线路连接是否正常 检查线路连接是否正常 7 2 泵的保养 泵的保养 7 2 1 泵的排气泵的排气 先拧松排气阀 用注射器将气泡抽出 反复进行直到气泡完全排出 先拧松排气阀 用注射器将气泡抽出 反复进行直到气泡完全排出 7 2 2 应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作 应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作 7 2 2 1 当泵出现压力明显高于正常值的情况 应先拆卸掉在线过滤器再连接好流路 观察泵压读数 当泵出现压力明显高于正常值的情况 应先拆卸掉在线过滤器再连接好流路 观察泵压读数 若泵压读数依然很高 则在线过滤器没有堵塞 预柱 分析柱同样处理 发现哪个部件有堵塞则拆若泵压读数依然很高 则在线过滤器没有堵塞 预柱 分析柱同样处理 发现哪个部件有堵塞则拆 卸掉超声清洗卸掉超声清洗 20min 再连接好流路 再连接好流路 7 2 2 2 当泵压力不稳定时 需要将单向阀拆卸掉用异丙醇超声清洗当泵压力不稳定时 需要将单向阀拆卸掉用异丙醇超声清洗 20min 7 2 3 溶剂过滤头要经常超声 清洗 每星期一次 溶剂过滤头要经常超声 清洗 每星期一次 7 2 4 泵本身没有在线自清洗功能 需要将注射器吸满泵本身没有在线自清洗功能 需要将注射器吸满 10 甲醇并连在泵的软管上对泵进行多次清甲醇并连在泵的软管上对泵进行多次清 洗 每星期清洗一次 洗 每星期清洗一次 7 3 柱的保养 柱的保养 7 3 1 新柱子在使用前一定要写上启用日期 新柱子在使用前一定要写上启用日期 7 3 2 分析测定结束后 要用适当的溶剂来清洗柱 分析测定结束后 要用适当的溶剂来清洗柱 华润三九医药股份有限公司 CR Sanjiu Medical Pharmaceutical Co Ltd 第 5 页 总 6 页 7 3 2 1 若流动相中不含盐 酸和碱则用纯甲醇冲柱若流动相中不含盐 酸和碱则用纯甲醇冲柱 30min 7 3 2 2 有盐 酸和碱则先用有盐 酸和碱则先用 10 甲醇至少冲甲醇至少冲 30min 再用纯甲醇冲再用纯甲醇冲 30min 7 3 3 在线过滤器要定时拆卸超声清洗 每月清洗一次 在线过滤器要定时拆卸超声清洗 每月清洗一次 7 3 4 预柱 保护柱 应拆卸超声清洗 也可在纯甲醇为流动相下低流速的反冲 一个月清洗一次 预柱 保护柱 应拆卸超声清洗 也可在纯甲醇为流动相下低流速的反冲 一个月清洗一次 7 3 5 长期不使用 应用适当有机