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文档简介

耐酸耐热菌的测定（企业内控法）1、 适用范围 本方法仅适用于浓缩苹果清汁中耐酸耐热菌的测定。2、设备和材料21、广口三角瓶，250mL、1000mL。22水浴箱：80水浴。23、冰箱。24、量筒：50mL。25、灭菌镊子。26、酒精灯。27、培养箱： 501。28、玻璃铅笔。29、溶剂过滤器。2. 10、0.45m滤膜：50mm。211、真空泵。212、温度计。213、培养皿。214、高压蒸汽灭菌锅。3、培养基和试剂31、K氏培养基311、组成A：酵母浸膏 1.25g 蛋白胨 2.50g 葡萄糖 0.5g 琼脂 7.5g 吐温80 0.5mL 将上述各种试剂放入1L的三角瓶中,加入500mL的蒸馏水,在电炉上加热溶解后,在121高压灭菌20分钟。312、组成B：苹果酸 1.25g 将苹果酸用10mL的蒸馏水溶解,通过一次性无菌注射器和针头式过滤器连接,将苹果酸溶液过滤到已灭菌的培养基中,混匀。313、平板制作 当已酸化的K氏培养基温度降至50左右时，将其分装倒入已灭菌的培养皿中，待培养基凝固后，用牛皮纸包扎好，放入冰箱中保存，一般可保存60天。32、蒸馏水。4、检验程序： 检样 适当稀释 80水浴13分钟 无菌水膜过滤 检样膜过滤 膜放入平板培养基 培养 501 4天 菌落计数 报告5、操作步骤51、将装有150mL蒸馏水的三角瓶、0.45m的滤膜、50mL量筒、过滤装置于121灭菌15min。52、用已灭菌的50mL量筒取待检浓缩果汁50mL，加入已灭菌的盛有150mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，混匀。53将稀释的样品放入80的水浴中，同时放置一个带有温度计的控制样，做为温度控制。观察温度计，待温度升至80时开始计时，维持13min，将样品取出并迅速用自来水冷却。54、用已灭菌的0.45m的滤膜及真空抽滤装置过滤热处理后的果汁,移取抽滤装置的上部,将镊子在酒精灯上灭菌后,用镊子将滤膜移置于预先准备好的K氏培养基上,轻敲滤膜几次,使其与滤膜充分接触。同时还必须做空白对照（即用灭菌水代替检样）。注：每过滤一个样品，必须更换一个过滤装置上部的玻璃容器。55、将平板翻转放于501的培养箱中进行4天培养，并在培养箱底部放上盛有蒸馏水的烧杯，以保证培养基
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