芽孢杆菌的筛选1

芽孢杆菌的筛选 产淀粉酶 产蛋白酶 产酸 实验过程 实验目的实验原理实验材料和用具方法和步骤实验结果实验分析 实验目的 掌握用选择性培养基从土壤中分离芽孢杆菌的方法了解芽孢杆菌的特征将我们这一学期所学的微生物的几个基本实验运用熟练 实验原理 在养鸡场的土壤中有可能分布着产淀粉酶 产蛋白酶 产酸的芽孢杆菌 通过富集培养 加热土样悬液 杀死非芽孢杆菌 分离可获得细菌的单菌落 经革兰氏染色 可判断分离菌株是否为目的菌株 凡是具有产蛋白酶能力的芽孢杆菌水解酪素生产酪氨酸 在酪素平板上菌落周围出现透明的水解圈 具有产淀粉酶能力的芽孢杆菌 水解淀粉 在淀粉平板上菌落周围也会出现水解圈 但肉眼难以分辨 可通过滴加碘液鉴别 产酸的芽孢杆菌在溴钾酚紫培养基上会变黄 实验材料和用具 样品含有芽孢杆菌的培养液 1g养鸡场土壤 99ml无菌水 培养基及试剂普通肉汤培养基 配方 蛋白胨20 0g 牛肉膏5 0g Nacl5 0g 自来水1000ml PH7 2 7 4用法 称取上述用品30 0g 加热溶解于1000ml自来水 并不断搅拌 煮沸1min 分装三角瓶 121 高压灭菌15min 备用 淀粉琼脂培养基配方 可溶性淀粉20 0g KNO31 0g NaCl0 5g K2HPO4 3H2O0 5g MgSO4 7H2O0 5g FeSO4 7H2O0 01g 琼脂15 20g 自来水1000ml用法 先用少量冷水把可溶性淀粉调成糊状 用文火加热 然后再加水及其他药品 待各成分溶解后再补水至1000ml 酪素培养基 配方 酪素20g 氨水40ml 自来水1000ml用法 取酪素20g溶于水中 加氨水以助溶解 溴钾酚紫培养基 乳糖5g 蛋白胨5g 酵母膏3g 琼脂15 20g 0 5 溴钾酚紫溶液10ml 自来水1000ml用法 称取琼脂加热溶解后 再加入以称取好的乳糖 蛋白胨 酵母膏和溴钾酚紫充分溶解 混匀 染色液 草酸铵结晶紫染色液 卢歌尔氏碘液 95 乙醇 0 5 沙黄染色液材料 载玻片 香柏油 95 乙醇 乙醚 3 7 擦镜纸 吸水纸 培养皿 吸管 三角瓶 接种环 纱布 棉花 细线 酒精灯 方法步骤 富集培养 取菌液5ml接入普通肉汤培养基中 80 90 水浴加热10 15min 然后振荡培养24h 倾注分离 将培养液再经一次热处理后 可进行适当稀释 取一吸管以无菌操作法分别吸取10 4 10 5 10 6土壤稀释液1ml 加在空的无菌培养皿中 将淀粉琼脂培养基 溴钾酚紫培养基还有酪素培养基融化冷却至50 倾入各皿 立即摇匀 凝固后进行涂布平板 倒置培养24 48h 分离淀粉酶菌株时 可取碘液加在淀粉平板上的菌落周围 观察形成透明圈的情况 未产生淀粉酶的是蓝色 有淀粉酶产生的无色 分离产酸菌株时 可通过观察溴钾酚紫培养基的颜色变化 纯种鉴定 革兰氏染色 涂片 挑一环水于载玻片中央 再用接种环分别挑取少量菌与玻片上的水混合并形成薄的菌膜固定 涂片在空气中干燥 手执玻片一端 有菌膜的一面朝上 玻片在微火上来回通过3次 用手背面触摸玻片反面以不烫手为宜 待冷却后在加染料 染色 初染 将玻片置于玻片搁架上 加草酸铵结晶紫染色液 染色1min 倾去染色液 用自来水小心冲洗 媒染 滴加卢哥尔氏碘液 染色1min 倾去水洗 脱色 滴加95 乙醇摇晃倾去乙醇 重复2 3次至无颜色即可 立即水洗 终止脱色 复染 滴加沙黄染色液 染色1min 水洗 吸水纸吸干 菌种保存 实验结果 我们总共做了三次 第一次的时候 三种培养基上都是只有少量的霉菌 没有芽孢杆菌 跟老师讨论后 知道我们的菌悬液稀释的太稀了 于是 将菌悬液重新配了一下 5g养殖场鸡粪 20ml无菌水 也没有稀释 第二次的结果 淀粉琼脂培养基上长菌了 经碘液坚定 该菌能降解淀粉 酪素培养基上面也长菌了 但是没有降解圈 做了革兰氏染色 看不到形状 只能确定红色的 G 菌