Flowjo 7.6.1使用方法

Flowjo 7 6 1 软件使用方法 1 在桌面上建立新的文件夹 将需要分析的样本复制到文件夹内 一个文件夹内放一个指标的所有样本 便于统一操作 2 运行软件 3 将桌面上的新建文件夹拖入 Flowjo 内 Drag Samples Here 4 两种方法处理 以 Th17 细胞 CD4 FITC IL 17A PE 为例 方法一 圈阳性细胞 更适用于两标记 方法一 圈阳性细胞 更适用于两标记 设置阴性对照样本设置阴性对照样本 双击阴性对照样本 一般编号为双击阴性对照样本 一般编号为 001001 出现以下窗口 出现以下窗口 4 14 1 依次单击依次单击 T UseT Use LogLog Axis Axis 横轴 纵轴同样操作 出现细胞横轴 纵轴同样操作 出现细胞 4 24 2 圈细胞 单击上面的正方形 或者椭圆或者四边形 在细胞圈细胞 单击上面的正方形 或者椭圆或者四边形 在细胞 上圈出较明亮的区域 无需更改命名 上圈出较明亮的区域 无需更改命名 4 34 3 双击以上所圈细胞 弹出另一窗口双击以上所圈细胞 弹出另一窗口 4 44 4 选通道选通道 1 1 依次单击纵轴 依次单击纵轴 Comp FL1 Comp FL1 FL1FL1 LogLog 1 1 通道 通道 依次单击横轴依次单击横轴 FS FSFS FS LinLin 出现以下窗口 出现以下窗口 4 54 5 圈圈 CD4CD4 T T 细胞细胞 用同样的方法在细胞群上方圈出细胞细胞 用同样的方法在细胞群上方圈出 CD4CD4 阳性区阳性区 域 并命名为域 并命名为 CD4CD4 如下 如下 4 64 6 圈圈 IL 17AIL 17A 阳性阳性细胞 双击以上所圈细胞 弹出另一窗口 用以细胞 双击以上所圈细胞 弹出另一窗口 用以 上同样的方法圈出上同样的方法圈出 IL 17AIL 17A 阳性的阳性的 T T 细胞 得到如下图细胞 得到如下图 以上便为阴性对照的设置过程 注 因此样本为阴性对照 须保证以上便为阴性对照的设置过程 注 因此样本为阴性对照 须保证 双阳 双阳 CD4CD4 IL 17AIL 17A 比率均小于 比率均小于 1 1 或 或 2 2 5 平行操作所有样本 将阴性对照的结果拖至上面的 All Samples 中 此时所有样本即被分析 如下 方法二 画象限方法二 画象限 设置阴性样本设置阴性样本 4 14 1 同上同上 4 24 2 同上同上 4 34 3 同上同上 4 44 4 选通道选通道 1 1 依次单击纵轴 依次单击纵轴 Comp FL1 Comp FL1 FL1FL1 LogLog 1 1 通道 通道 选通道选通道 2 2 依次单击纵轴 依次单击纵轴 Comp FL2 Comp FL2 FL2FL2 LogLog 1 1 通道 通道 出现以下窗口 出现以下窗口 4 54 5 画象限 如下画象限 如下 注 保证双阳性区域值注 保证双阳性区域值 Q2Q2 小于小于 1 1 或 或 2 2 5 平行操作所有样本 将阴性对照的结果拖至上面的 All Samples 中 此时所有样本即被分析 如下 注 拖的是第一个样本标记的指标 注 拖的是第一个样本标记的指标 CD4CD4 IL 17AIL 17A 而不是样本 而不是样本 编号 编号 若为三种标记如若为三种标记如 TregTreg 细胞 细胞 CD4 FITC CD25 APC Foxp3 PECD4 FITC CD25 APC Foxp3 PE 也应 也应 该用画象限的方法 先设置通道该用画象限的方法 先设置通道 1 1 双击阳性区域后 在弹出的新 双击阳性区域后 在弹出的新 窗口内设置通道窗口内设置通道 2 2 和通道和通道 4 4 这样就可以画象限找出三阳性区域了 这样就可以画象限找出三阳性区域了 6 保存 依次点击 Fil