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实验八大分子物质的水解实验及糖发酵实验 一 实验目的 1 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力的不同 从而说明不同微生物有着不同的酶系统 2 掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法3 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用4 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法 二 实验原理 微生物代谢重要特征之一 就是代谢类型的多样性 因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用 同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径 人们在微生物的分类鉴定工作中 常利用其生理生化反应作为重要依据 微生物对大分子的淀粉 蛋白质和脂肪不能直接利用 必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用 胞外酶主要为水解酶 通过加水裂解大的物质为较小的化合物 使其能被运输至细胞内 淀粉遇碘液会产生蓝色 但细菌水解淀粉的区域 用碘测定不再产生蓝色 表明细菌产生淀粉酶 明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质 在25 以下可维持凝胶状态 以固体形式存在 有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶 水解这种蛋白质 而使明胶液化 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应 在肠道细菌的鉴定上尤为重要 绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源 但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异 不同的细菌含有发酵不同糖 醇 的酶 因而发酵糖 醇 的能力各不相同 其产生的代谢产物亦不相同 如有的产酸产气 有的产酸不产气 三 实验材料 1 培养基 每组的量 由班长分发 灭菌培养皿 淀粉水解 3皿明胶液化培养基 4支葡萄糖发酵培养基 3支乳糖发酵培养基 3支淀粉培养基 1瓶 2组接种用具接种环 针 酒精灯 标签纸 试管架实验菌种枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 普通变形杆菌 金黄色葡萄球菌 四 实验内容 1 淀粉水解试验 1 将固体淀粉培养基溶化后冷却至50 无菌操作倒平板 2 将枯草 大肠分别在不同部分划线接种 划十字 并在平板的背面分别记下菌名 3 将接完种的平板倒置于37 恒温培养箱 培养24h 2 明胶液化试验 1 取4支明胶培养基试管 用接种针分别以穿刺接种法接种枯草 大肠 金葡 第4支不接种 作为对照 2 接种后置于20 恒温培养箱 培养2 5d 或37 培养 冰浴后观察结果 3 糖类发酵试验 1 取葡萄糖发酵培养基试管3支 分别接种大肠杆菌和变形杆菌 第3支不接种 作为对照 另取乳糖发酵培养基试管3支 同样分别接入大肠杆菌和变形杆菌 第3支不接种 作为对照 接种后 轻缓摇动试管 使其均匀 防止倒置的小试管进入气泡 2 将接种过和作为对照的6支试管置于37 恒温培养箱培养24h 实验结果 糖发酵实验 五 实验结果 1 大分子物质水解实验结果将结果填入下表 表示阳性 表示阴性注意 观察结果时 可打开皿盖 滴加碘液于平板上 轻轻旋转 使碘液均匀铺满整个平板 如菌苔周围出现无色透明圈 则说明淀粉已被水解 为阳性 透明圈的大小 说明该菌水解淀
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