实验二 总糖和还原糖的测定_第1页
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实验二总糖和还原糖的测定 3 5 二硝基水杨酸法 目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理学习用比色法测定还原糖的方法 实验原理 在NaOH和丙三醇存在下 3 5 二硝基水杨酸 DNS 与还原糖共热后被还原生成氨基化合物 在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色 在540nm波长处有最大吸收 在一定的浓度范围内 还原糖的量与光吸收值呈线性关系 利用比色法可测定样品中的含糖量 实验内容 葡萄糖标准曲线的制备 样品 藕粉 中还原糖的提取和含量测定 样品 藕粉 中总糖的水解和含量测定 1 葡萄糖标准曲线制作 1 取6支1 5cm 15cm试管 按下表加入1mg ml葡萄糖标准液和蒸馏水 2 分别加入2mlDNS试剂 沸水浴中加热2min进行显色 取出后用流动水迅速冷却 各加入蒸馏水9ml 摇匀 在540nm波长处测定光吸收值 3 标准曲线绘制 以葡萄糖含量 mg ml 为横坐标 光吸收值为纵坐标 绘制标准曲线 2 样品中还原糖的提取 准确称取1g藕粉 放在100ml烧杯中 先以少量蒸馏水调成糊状 然后加入40ml蒸馏水 混匀 于50 恒温水浴中保温20min 不时搅拌 使还原糖浸出 全部收集在50ml的容量瓶中定容 过滤出5ml 即为还原糖提取液 3 样品总糖的水解及提取 准确称取0 5g藕粉 放在大试管中 加入6MHCl5ml 蒸馏水8ml 在沸水浴中加热15min 取出1 2滴置于白瓷板上 加1滴I KI溶液检查水解是否完全 如已水解完全 则不呈现蓝色 水解毕 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂 以6MNaOH溶液中和至溶液呈微红色 定容到50ml 取5ml再次定容至50ml 过滤 取滤液用于总糖测定 4 样品中含糖量的测定 1 取7支1 5cm 15cm试管 分别按下表加入试剂 2 加完试剂后 于沸水浴中加热2min进行显色 取出后用流动水迅速冷却 各加入蒸馏水9ml 摇匀 在540nm波长处测定光吸收值 测定后 取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖含量 5 计算 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量 式中 C 还原糖或总糖提取液的浓度 mg mL V 还原糖或总糖提取液的总体积 mL m 样品重量 g 1000 mg换算成g的系数 思考题 1 比
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