药物分析-第十三章-4

概述,四环素类抗生素（tetracyclines）的化学结构中均具有典型的氢化并四苯环中国药典（210年版）收载有盐酸四环素、盐酸多西环素、盐酸米诺环素、盐酸金霉素、盐酸美他环素,一、结构与性质关系分析,二、鉴别试验,目录,三、特殊杂质检查,四、含量测定,【课堂活动】,一、结构与性质关系分析,结构通式,常用药物结构,理化性质概述,【相关链接】,一、结构与性质关系分析,结构通式,四并苯或萘并萘的衍生物,药典常用药物结构,盐酸四环素（tetracycline hydrochloride）,药典常用药物结构,盐酸土霉素（oxyteracycline hydrochloride）,药典常用药物结构,盐酸米诺环素（minocycline hydrochloride）,药典常用药物结构,盐酸多西环素（doxycline hydrochloride）,药典常用药物结构,盐酸金霉素（chlortetracycline hydrochloride）,药典常用药物结构,盐酸美他环素（metacycline hydrochloride）,理化性质概述,性状 溶解性 酸性及碱性 稳定性 旋光性 紫外吸收 与金属离子的反应,性状,多为黄色结晶性粉末，无臭，味苦,返 回,溶解性,盐酸盐在水中易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷等有机溶剂中不溶可溶于酸或碱性溶液,返 回,酸性及碱性,C4二甲氨基，显弱碱性；C10有酚羟基，有弱酸性；酮式和烯醇基团共轭，显弱酸性；为两性化合物，可与酸碱成盐，多用盐酸盐,返 回,稳定性,在酸性、碱性、氧化剂存在下不稳定发生异构化及降解反应,返 回,旋光性,具有手性碳，药典规定应测定比旋度,返 回,紫外吸收,分子结构中含有共轭双键体系，在紫外光区具有吸收；在紫外光照射下可激发荧光，降解产物亦可产生荧光如四环素经降解后成黄色荧光金霉素经降解后产生蓝色荧光,返 回,与金属离子的反应,具有酚羟基、烯醇基等基团，可与金属离子形成不溶性盐或配合物如可与钙形成不溶性钙盐，与铁形成红色配合物,返 回,【相关链接】四环素的不稳定性,干燥的四环素类药物游离碱及盐均稳定，遇光颜色会变深溶液状态时，酸性、碱性等均会使四环素发生结构的改变,（1）pH26条件下的差向异构化反应,（2）pH2的酸性条件下的降解反应,（3）碱性条件下的降解反应,（1）pH26条件下的差向异构化反应,C4构型的改变，可逆反应，平衡时差向化合物含量可达到4060,差向异构体的急性毒性比四环素高一倍以上。四环素和金霉素易于发生差向化，使抗菌性能减弱甚至完全消失。,（1）pH26条件下的差向异构化反应,（1）pH26条件下的差向异构化反应,土霉素、多西环素、美他环素在B环C5位具有羟基，可与C4上的二甲氨基形成氢键稳定二甲氨基构型，不易发生差向异构化较稳定,返 回,（2）pH2的酸性条件下的降解反应,C环C6位具有羟基的四环素类药物，如盐酸四环素、盐酸金霉素，在pH2的溶液中，尤其是在加热的情况下可降解 原理 反应式,返 回,C5a氢脱水，生成脱水四环素和脱水金霉素进而发生C环的芳构化，双键数目增多，颜色加深，产物为橙黄色在435nm和445nm处有最大吸收，可用于此类药物的定量,（2）pH2的酸性条件下的降解反应,返 回,（2）pH2的酸性条件下的降解反应,返 回,（3）碱性条件下的降解反应,C环C6位具有羟基的四环素类药物，如盐酸四环素、盐酸金霉素，在碱性溶液中可降解 原理 反应式,返 回,（3）碱性条件下的降解反应,C6上的羟基可形成氧负离子向C11分子内亲核进攻，生成内酯结构的异构体该物质无活性，但在紫外照射下具有强烈的荧光,（3）碱性条件下的降解反应,返 回,二、鉴别试验,（一）呈色反应,（二）氯化物鉴别反应,（三）薄层色谱法,（四）高效液相色谱法,（五）光谱法,二、鉴别试验,（一）呈色反应,1. 硫酸反应2. 三氯化铁反应,1. 硫酸反应,可被浓硫酸氧化，生成有颜色的产物不同药物产生的颜色不同，可用于鉴别及区别中国药典（2010年版）对盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸土霉素的鉴别即采用此反应,返 回,四环素类药物的硫酸鉴别反应现象,四环素类药物的硫酸鉴别反应现象,返 回,2. 三氯化铁反应,D环具有酚羟基，可与三氯化铁试液呈色。如盐酸四环素为红棕色；盐酸金霉素为深褐色；盐酸土霉素为橙褐色；盐酸多西环素为褐色。中国药典（2010年版）对盐酸四环素鉴别采用此反应,返 回,二、鉴别试验,（二）氯化物鉴别反应,药典收载的四环素类药物均为盐酸盐中国药典（2010年版）采用氯化物的鉴别反应鉴别,二、鉴别试验,（三）薄层色谱法,中国药典（2010年版）对盐酸土霉素的鉴别采用了薄层色谱法 【实例分析】盐酸土霉素的薄层色谱法鉴别,【实例分析】盐酸土霉素的薄层色谱法鉴别,取本品与土霉素对照品，分别加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液；另取土霉素、盐酸四环素对照品，加甲醇制成每1ml含各含1mg的混合溶液，取4乙二胺四醋酸二钠溶液（pH7.0）5ml，加至乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（221）200ml中为展开剂，,【实例分析】盐酸土霉素的薄层色谱法鉴别,照薄层色谱法，吸取上述五种溶液各1l，分别点于同一薄层板上，展开，晾干用氨蒸气熏蒸后，置紫外光灯（365nm）下检视混合溶液应显示两个完全分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的荧光和位置应与相应的对照品溶液主斑点相同,【实例分析】盐酸土霉素的薄层色谱法鉴别,返 回,分析：试验薄层板为硅藻土载体；EDTA的加入是为了防止微量金属离子造成的斑点拖尾现象；氨蒸气熏蒸可降解四环素，从而在365nm激发下产生特定荧光，用以检出斑点，并与对照品对照进行鉴别。,二、鉴别试验,（四）高效液相色谱法,本类药物中国药典（2010年版）均采用HPLC法测定含量故鉴别中亦采用要求供试品溶液的主峰保留时间应与对照品溶液的主峰保留时间一致。色谱条件见含量测定,二、鉴别试验,（五）光谱法,1.红外吸收光谱法2.紫外分光光度法,1.红外吸收光谱法,药典对本类药物的鉴别大多采用了此法,返 回,2.紫外分光光度法,中国药典（2010年版）对盐酸多西霉素和盐酸美他环素的鉴别采用了紫外可见分光光度法。如盐酸美他环素的鉴别： 取本品，加水溶解并稀释成每1ml约含10g的溶液，照紫外-可见分光光度法，测定，在345nm、282nm和241nm的波长处有最大吸收，在264nm和222nm的波长处有最小吸收。,返 回,三、特殊杂质检查,（一）有关物质,（二）杂质吸光度,（一）有关物质,指在生产和贮存中由于酸性、碱性等条件所导致的药物的异构体杂质、降解产物（差向异构体、脱水产物）等。导致恶心、呕吐、酸中毒、蛋白尿、糖尿等副作用，需严格控制。中国药典采用高效液相色谱法控制有关物质限量,三、特殊杂质检查,（二）杂质吸光度,异构体、降解产物等杂质颜色均较四环素深，导致药品外观色泽变深。如脱水四环素为橙红色、异四环素为砖红色等中国药典（2010年版）规定了药物在一定溶剂中的吸光度的限量，用以控制此类杂质,【实例分析】盐酸美他环素中杂质吸光度检查,【实例分析】盐酸美他环素中杂质吸光度检查,取本品，加1mol/L盐酸溶液的甲醇溶液（1100）制成每lml中含10mg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定，其吸光度不得过0.20。主要控制差向异构体、脱水美他环素及其它有关杂质,返 回,四、含量测定,概 述,【实例分析】盐酸美他环素的含量测定,四、含量测定,概 述,中国药典（2010年版）对四环素类药物的含量测定均采用高效液相色谱法。此法可有效分离异构体、降解产物等杂质,四、含量测定,【实例分析】盐酸美他环素的含量测定,土霉素是盐酸美他环素中需要控制的有关物质 色谱条件与系统适应性试验 方法,色谱条件与系统适应性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液0.25mol/L醋酸铵0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠三乙胺（100101），用冰醋酸调节pH值至8.3 乙腈（8515）为流动相；柱温35；检测波长为280nm。,色谱条件与系统适应性试验,精密称取土霉素对照品、美他环素对照品适量，用0.01mol/L盐酸溶液溶解，并制成每1ml各含0.1mg的混合溶液，取20l注入液相色谱仪，记录色谱图土霉素峰与美他环素峰的分离度应大于6.0。,返 回,方法,取本品20mg，精密称定，用0.01mol/L盐酸溶液使溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液精密量取20l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取美他环素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面