药物分析-第十二章-1

高职高专系列教材配套电子教案,药物分析,高等教育出版社,高等教育电子音像出版社,主编 张骏 方应权,（第2版）,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第二节 水溶性维生素类药物的分析,维生素是机体维持正常生命活动所必不可少的一类有机物质。它们的结构不属于同一类物质，有些是醇、酚、酯，有些是醛、胺、酸，各自具有不同的理化性质和生理作用。一般按照溶解性将维生素药物分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。,本章主要内容,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,检查,含量测定,结构,性质,鉴别,维生素A,检查,含量测定,结构,性质,鉴别,维生素E,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,A2,A1,A3,维生素A-结构,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素A天然产品主要来自于鱼肝油，多为其各种酯类的混合物，主要为醋酸酯和棕榈酸酯。中国药典收载的维生素A指人工合成的维生素A1醋酸酯结晶加上精制植物油制成的油溶液。,维生素A-结构,返 回,第十二章 维生素类药物分析,溶解性,易氧化,与三氯化锑呈色,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,紫外吸收,维生素A-性质,返 回,维生素A-性质,第十二章 维生素类药物分析,溶解性,维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,维生素A-性质,第十二章 维生素类药物分析,易氧化,维生素A结构中有多个不饱和键，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，当被加热或与金属离子共存时更易氧化变质，生成无活性的环氧化合物，进一步氧化可生成相应的醛或酸。须注意贮存。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,维生素A-性质,第十二章 维生素类药物分析,与三氯化锑呈色,维生素A在氯仿中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色，可进行鉴别或用比色法测定含量。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素A-鉴别,三氯化锑反应（Carr-Price反应）,第十二章 维生素类药物分析,维生素A胶丸的鉴别:,维生素A-鉴别,供试品,内容物,1020单位/1ml,氯仿,25三氧化锑的氯仿溶液,2ml,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,即显蓝色，渐变紫红,三氯化锑反应（Carr-Price反应）,稀释,该液,1ml,返 回,维生素A-性质,第十二章 维生素类药物分析,紫外吸收,分子结构中有共轭体系，在紫外光区有吸收。维生素A常采用紫外吸收光谱法进行鉴别及含量测定。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,酸值,过氧化值,维生素A-检查,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素A制备和储存过程中，酯化不完全或水解，均可生成醋酸。酸度大，也不利于维生素A的稳定，故应控制酸度。,维生素A-检查,酸值,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素A-检查,酸值,乙醇,置锥形瓶中,乙醚,酸值应不大于 2.0,酚酞,5滴,15ml,15ml,氢氧化钠滴定液,0.1mol/L,至微显粉红色,供试品,2.0g,振摇使溶解,氢氧化钠滴定液,0.1mol/L,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素A结构中共轭双键，易被氧化成过氧化物，故应控制此类杂质。,维生素A-检查,过氧化值,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素A-检查,滴定至紫蓝色消失，空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L) 不得过1.5ml。,碘化钾饱和溶液,1ml,水,硫代硫酸钠滴定液,0.01mol/L,过氧化值,供试品,1.0g,冰醋酸-氯仿(6:4),30ml,振摇使溶解,振摇,1分钟,100ml,淀粉指示液,1ml,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法,高效液相色谱法,返 回,维生素A-含量测定,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,反应原理,测定及计算方法,注意事项,三点校正法,维生素A-含量测定,应用前提,波长选择,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-应用前提,维生素A-含量测定,维生素A具有共轭多烯醇侧链，有紫外吸收，可用于含量测定。但是，维生素A原料药中常混有多种杂质，包括其异构体、氧化降解产物（维生素A2、维生素A3、环氧化物、维生素A醛、维生素A酸等）、合成中间体、反应副产物等，这些杂质在维生素A的最大吸收波长附近也有吸收，干扰维生素A的测定。为消除杂质干扰，中国药典采用三点校正法测定维生素A含量。,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-反应原理,维生素A-含量测定,采用该法基于两点： 在310340nm范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸光度下降。 物质对光吸收呈加和性。,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-波长选择,维生素A-含量测定,三点校正法必须选择三个波长，一点选在维生素A的最大吸收波长处（1），其它两点选在1的两侧： 第一法（等波长差法）：使3max=max2。 中国药典规定，三个波长为max=328nm、2=316nm、3=340nm； 第二法（等吸收比法），使A2=A3=（6/7）A1。中国药典规定，三个波长为1=325nm、2=310nm、3=334nm。,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-测定及计算方法,维生素A-含量测定,扫描规定波长处吸光度，计算吸光度比值，判断吸光度是否需要校正，以及是否选用校正后吸光度计算效价； 确定用于效价计算的吸光度A后，由A计算吸收系数（单位g/100ml）； 由计算维生素A的效价（单位IU/g）； 由求得效价计算标示量百分含量（标示量）。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-测定及计算方法,维生素A-含量测定,扫描规定波长处吸光度，计算吸光度比值，判断吸光度是否需要校正，以及是否选用校正后吸光度计算效价； 确定用于效价计算的吸光度A后，由A计算吸收系数（单位g/100ml）； 由计算维生素A的效价（单位IU/g）； 由求得效价计算标示量百分含量（标示量）。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-测定及计算方法,维生素A-含量测定,第一法（等波长差法）：,=,IU/g供试品 = 供试品 1900,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,三点校正法-注意事项,维生素A-含量测定,应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。 如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，测定前必须校正波长。 测定的样品应不得少于两份。 测定应在半暗室中尽速进行。,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,高效液相色谱法,维生素A-含量测定,返 回,中国药典（2010年版）新增了高效液相色谱法作为维生素A含量测定的第二法。该法适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素E-结构,-生育酚 CH3 CH3, -生育酚 CH3 H, -生育酚 H CH3, -生育酚 H H,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素E为苯并二氢吡喃醇（色满醇）的衍生物，因其在苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故本类化合物又称生育酚。维生素E天然品为右旋体，合成品为消旋体。一般药用为合成品，故称消旋- 生育酚醋酸酯。,维生素E-结构,返 回,第十二章 维生素类药物分析,溶解性,易氧化,水解性,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,紫外吸收,维生素E-性质,维生素E-性质,第十二章 维生素类药物分析,溶解性,维生素E在无水乙醇、丙酮、乙醚或植物油中易溶，在水中不溶。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,维生素E-性质,第十二章 维生素类药物分析,易氧化,维生素E对氧敏感，遇光、空气可被氧化，其氧化产物为-生育醌和-生育醌二聚体。二者均须注意贮存。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,维生素E-性质,第十二章 维生素类药物分析,水解性,维生素E 有酯键，可水解，生成的生育酚极不稳定，是维生素E变质的重要原因。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,维生素E-性质,第十二章 维生素类药物分析,紫外吸收,分子结构中有共轭体系，在紫外光区有吸收。,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,返 回,返 回,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素E-鉴别,硝酸反应,三氯化铁-联吡啶反应,红外光谱法,返 回,第十二章 维生素类药物分析,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,维生素E-鉴别,硝酸反应,第十二章 维生素类药物分析,维生素E-鉴别,供试品,适量,振摇,溶解,无水乙醇,2ml,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,溶液显橙红色,硝酸反应,10ml,硝酸,摇匀,75加热,15分钟,返 回,第十二章 维生素类药物分析,维生素E-鉴别,供试品,约10mg,放冷,振摇，静置使分层,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,显血红色,三氯化铁-联吡啶反应,煮沸,5分钟,取乙醚液,2ml,乙醇制氢氧化钾试液,2ml,4ml,水,10ml,乙醚,2,2-联吡啶乙醇液(0.5100),数滴,三氯化铁的乙醇溶液(0.2100),数滴,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,酸度,生育酚,维生素E-检查,有关物质,返 回,残留溶剂正己烷,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素E-检查,酸度,乙醇,置锥形瓶中,乙醚,不得过0.5ml,酚酞,15ml,15ml,氢氧化钠滴定液,0.1mol/L,至微显粉红色,供试品,1.0g,溶解,氢氧化钠滴定液,0.1mol/L,0.5ml,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,维生素E中未酯化的游离生育酚是一种特殊杂质，其检查原理是利用游离生育酚具有还原性，可被硫酸铈定量氧化，以此控制游离生育酚限量。,维生素E-检查,生育酚,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,滴定，消耗滴定液不得过1.0ml,二苯胺试液,1滴,硫酸铈滴定液,0.01mol/L,供试品,0.10g,无水乙醇,5ml,溶解,维生素E-检查,生育酚,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,取本品，用正己烷稀释制成每1ml中约含2.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用正己烷定量稀释制成每1ml中含25mg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液ll注入气相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的30%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各ll，分别注入气相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，a-生育酚（相对保留时间约为0.87)的峰面积不得大于对照溶液主峰面积（1.0%)，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍(2.5%)。,维生素E-检查,有关物质,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,取本品，精密称定，加二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每lml中约含50mg的溶液，作为供试品溶液；另取正己烷，加二甲基甲酰胺定量稀释制成 每lml中约含50mg的溶液，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（第一法）试验，以5%苯基甲基聚硅氧烷为固定液（或极性相近的固定液），起始柱温为50，维持8分钟，然后以每分钟45的速率升温至260,维持15分钟。含正己烷应符合规定。,维生素E-检查,残留溶剂 正己烷,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,校正因子测定,气相色谱法,维生素E-含量测定,色谱条件与系统适用性试验,供试品测定,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2，或以HP-1毛细管柱(100二甲基聚硅氧烷)为分析柱；柱温265。理论板数按维生素E峰计算不低于500(填充柱)或5000(毛细管柱)，维生素E峰与内标物质峰的分离度应符合要求。,气相色谱法-色谱条件与系统适用性试验,维生素E-含量测定,返 回,第一节 脂溶性维生素类药物的分析,第十二章 维生素类药物分析,取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E