动物制药实例

生物技术制药 第九节动物细胞产品的制造实例 类淋巴细胞干扰素组织型纤溶酶原激活剂东阿阿胶单克隆抗体其他 内容 干扰素 定义 由细胞产生并在同种细胞上具有广谱抗病毒作用的物质发现 1957年由英国科学家Issacs和Lindemann首次发现类别 IFN IFN IFN 作用 抗病毒抗肿瘤免疫调节 类淋巴细胞干扰素 简介 该干扰素是从Burkitt淋巴瘤患者获取的Namalva细胞的干扰素 首先由英国Wellcome公司的Fante和Finter等开发成功 1986年获准进入市场 商品名为 Wellferon 以后该技术被日本引进 商品名为 Sumiferon 1999年进入美国 类淋巴细胞干扰素 现将细胞逐级放大直至4000L或8000L罐 培养基用RPMI1640培养基 加10 小牛血清 培养方式主要是搅拌式批次培养 当细胞密度达1 106个每毫升时 加入2nmol L丁酸钠启动48小时 接着用仙台病毒 50HAU ml 诱生 18小时冷却至5 10度 收集培养液 连续离心分离细胞 对上清进行分离纯化 生产工艺 类淋巴细胞干扰素 分离方法 1 先用三氯乙酸 TCA 沉淀 再用超滤膜浓缩 接着用SephadexG75或UltrogelAcA 54凝胶过滤 最后用单克隆抗体或多克隆抗体亲和层析 2 单克隆抗体一步纯化法 有报道称仅一步纯化就可使比活度提高5000倍 类淋巴细胞干扰素 应用 临床治疗病毒性疾病 如乙型肝炎 丙型肝炎 以及多种肿瘤的治疗 如毛细胞白血病 Kapose肉瘤等 组织型纤溶酶原激活剂 组织型纤溶酶原激活剂 又称组织型纤溶酶原激活物 tissue typeplasminogenactivator t PA 或纤溶酶原激活因子 tissueplasminogenactivator 是体内纤溶系统的生理性激动剂 在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用 属于糖蛋白 丝氨酸蛋白酶类 是一种新型的血栓溶解剂 简介 组织型纤溶酶原激活剂 t PA的生理及生化特性 1 组织型纤溶酶原激活物 t PA 的免疫特性与心脏 子宫 肺等组织中的纤溶酶原激活物相似 主要由血管内皮细胞 VEC 分泌 许多因素如纤维蛋白 纤溶酶原 plg 都能刺激VEC释放t PA 2 t PA是一种丝氨酸蛋白酶 分子量 为70KD 由527个氨基酸组成 含有35个胱氨酸残基 3个糖化点 组织型纤溶酶原激活剂 3 t PA具有较强的特异性 能非常特异地作用于与纤维蛋白结合的纤溶酶原 4 t PA在体内有明显的活动周期 在9 00t PA的含量最高 15 00最低 主要作用 作为溶栓类药物主要用于心肌梗死的治疗 组织型纤溶酶原激活剂 组织型纤溶酶原激活剂 真实照片 东阿阿胶 来源 本品为马科动物驴EquusasinusL 及其他驴皮经煎煮浓缩制成的固体胶 用蛤粉炒成珠者称阿胶珠 产地及销售习惯 主产于山东聊城东阿 浙江杭州 宁波 以山东东阿所产最为著名 浙江产量最大 主销华东并出口 此外上海 北京 河北天津 湖北武汉 辽宁沈阳等地均有加工生产 东阿阿胶 化学成份 含明胶蛋白 glutin 等 药材性状 呈整齐的长方形块状 通常长约8 5厘米 宽约3 7厘米 厚约0 7或1 5厘米 表皮棕黑色或乌黑色 平滑 有光泽 对光照视略透明 质坚脆易碎 断面棕黑色或乌黑色 平滑 有光泽 气微弱 味微甜 以乌黑 光亮 透明 无腥臭气 经夏不软者为佳 东阿阿胶 药理作用1 对造血系统的作用 阿胶有明显的补血作用 疗效优于铁剂 2 抗休克作用 麻醉猫反复从股动脉放血造成严重出血性休克 静注5 6 阿胶溶液约8ml kg 能使极低水平之血压恢复至正常水平 且作用较为持久 3 对钙代谢的影响 能改善动物体内钙平衡 4 其他 阿胶有促进健康人淋巴细胞转化作用 东阿阿胶 功用 滋阴养血 补肺润燥 止血安胎 主治 阴虚心烦失眠 虚劳咳嗽 肺痈吐脓 吐血衄血 便血 崩带 胎动不安等症 其他作用 瘫缓偏风 手足不遂 腰膝无力 肺风喘促 老人虚秘 赤白简疾 肠胃气虚 冷热不调 不痢赤白 里急后重 腹痛 不便不利 肺损呕血 妊娠胎动 多年咳嗽 东阿阿胶 目前东阿阿胶构建了基因工程重组蛋白高效表达 动物细胞大规模培养 蛋白质药物高效纯化 蛋白质药物化学修饰 蛋白质药物制剂研究 蛋白质药物临床研究等系统完整的生物药研发技术平台 新工艺 新方法 单克隆抗体 概念 通过B细胞杂交瘤技术 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆 产生均一性的抗体 特点 理化性状高度均一 生物活性单一 与抗原结合的特异性强 便于人为处理和质量控制 并且来源容易 这些优点使它一问世就受到高度重视 并广泛应用于生物学和医学研究领域 单克隆抗体制备有两种方法 1 增量培养法 即将杂交瘤细胞在体外培养 在培养液中分离单克隆抗体 该法需用特殊的仪器设备 一般应用无血清培养基 以利于单克隆抗体的浓缩和纯化 2 小鼠腹腔接种法 选用BALB c小鼠或其亲代小鼠 先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射 一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去 通常在接种一周后即有明显的腹水产生 每只小鼠可收集5 10ml的腹水 有时甚至超过40ml 该法制备的腹水抗体含量高 每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平 单克隆抗体的应用 一 用作诊断试剂1 检测淋巴细胞表面分子 区分不同分化阶段的淋巴细胞 鉴别淋巴细胞 2 鉴定病原体 准确诊断传染病 3 用于肿瘤的诊断和分型4 激素类单抗用于测定体内激素含量 判断内分泌的功能状态 单克隆抗体的应用 二 用作研究工具1 纯化抗原2 分析和探查抗原结构3 分析抗原决定簇分子的功能 三 用于疾病的治疗1 抗细胞表面分子单抗 用于移植排斥反应的防治2 抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗3 抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗 单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题 单克隆抗体的特异性由于肿瘤特异性抗原较少 缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗 对正常组织有交叉反应异种抗体反应鼠源性单抗用于人体 导致异源性超敏反应