甾体激素类药物分析(2)

第十五章甾体激素类药物的分析 AnalysisofSteroidHormonDrugs 学习要求 1 掌握甾体激素类药物分类 结构特征 理化性质及分析方法 以及他们之间的关系 掌握鉴别和含量测定方法 2 熟悉甾体激素类药物的有关物质与检查方法 3 了解甾体激素类药物的体内药物分析及应用 内容分布 基本结构与分类鉴别试验特殊杂质检查含量测定复习题 第一节基本结构与分类 一 肾上腺皮质激素adrenalcorticalhormone 氢化可的松hydrocortisone 醋酸地塞米松Dexamethasoneacetate 曲安西龙triamcinolone 地塞米松磷酸钠Dexamethasonesodiumphophate 共性 母核21个C原子 4 3 酮基C17 醇酮基 二 雄性激素及蛋白同化激素 甲睾酮methyltesterone 丙酸睾酮Testosteronepropionate 苯丙酸诺龙Nandrolonephenylpropionate 共性 雄性激素母核19个C原子蛋白同化激素母核18个C 4 3 酮基C17 羟基 三 孕激素progestogen 黄体酮progesrerone 醋酸甲地孕酮Megestrolacetate 炔诺酮norethisterone 炔诺孕酮norgestrel 共性 母核21个C原子18C 4 3 酮基C17 甲酮基乙炔基 四 雌性激素estrogen 雌二醇estradiol 炔雌醇ethinylestradiol 共性 母核18个C原子苯环 3 酚羟基C17 羟基 习题1 甾体激素中的分子结构中A环为苯环的是 A雄性激素B肾上腺皮质激素C雌激素D孕激素E蛋白同化激素 习题2 属于肾上腺皮质激素类药物特征的是 A 4 3 酮基BC17位有 醇酮基C母核有21个碳原子DC17位有甲酮基E有还原性 第二节理化性质与鉴别试验 一 性状特征 1 性状与溶解度2 熔点3 比旋度4 吸收系数 了解 一 与强酸的呈色反应 二 化学鉴别法 硫酸 1 C17 醇酮基的呈色反应 二 官能团的反应 皮质激素类药物 还原性 氧化试剂 碱性酒石酸铜 氨制硝酸银 四氮唑盐 醋酸泼尼松 取本品1mg 加乙醇2ml使溶解 加10 氢氧化钠试液2滴与氯化三苯四氮唑试液1ml 即显红色 2 酮基的呈色反应 C3 酮基 C20 酮基 羰基试剂 肼 现象 黄色 腙 氢化可的松 取样品约0 1mg 加乙醇1ml溶解后 加新配的硫酸苯肼试液8ml 70 加热15min 即显黄色 3 甲酮基的呈色反应 孕激素 试剂 亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚 芳香醛类 4 酚羟基的呈色反应 雌激素C3 OH 试剂 重氮苯磺酸现象 红色 5 炔基的沉淀反应 炔雌醇 炔诺酮 炔诺孕酮等 6 卤素的反应 F Cl取代的药物 氧瓶燃烧法 无机卤素原子 地塞米松磷酸钠 本品显有机氟化物的鉴别反应 7 酯的反应 C17 C21位羟基成酯 方法 先水解 产生相应的羧酸 再根据羧酸性质鉴别 醋酸地塞米松 取本品50mg 加乙醇制氢氧化钾试液2ml 水浴加热5min 放冷 加硫酸溶液2ml 缓缓煮沸1min 即产生醋酸乙酯的香气 三 紫外分光光度法 四 红外分光光度法 五 薄层色谱法 六 高效液相色谱法 习题3 黄体酮的专属性反应为 A与异烟肼的反应B与亚硝基铁氰化钠的反应C与硝酸银的反应D与四氮唑盐的反应 第三节特殊杂质检查 1 炔孕酮中有关物质的检查 一 薄层色谱法 一 有关物质的检查 2 醋酸去氧皮质酮中有关物质的检查 二 高效液相色谱法 三 残留溶剂的检查 二 硒的检查 四 游离磷酸盐的检查 第四节含量测定 根据甾体激素药物的官能团整个分子特征1 比色法2 紫外分光光度法3 荧光法4 气相色谱法5 高效液相色谱 一 高效液相色谱法应用于原料和制剂的含量测定反相内标法应用示例黄体酮的含量测定 二 紫外分光光度法甾体激素药物分子中有 4 3 酮基和苯环等共轭体系 4 3 酮基 在240nm有最大吸收苯环 在280nm有最大吸收这些特征吸收可用于含量测定 三 比色法 一 四氮唑比色法用于皮质激素药物的含量测定C17 醇酮基有还原性 可还原四氮唑盐成有色甲噆 用于比色法测定 1 四氮唑盐的种类 1 氯化三苯四氮唑 TTC 其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲噆 max在480nm 490nm 也称红四氮唑 2 蓝四氮唑 BT 还原产物为暗蓝色的双甲噆 formazan max在525nm左右 2 反应原理皮质激素C17 醇酮基 CO CH2OH 具有还原性 在强碱性溶液中能将四 氮唑盐定量的还原为有色甲噆 formazan 四氮唑盐得到2个电子 开环形成甲噆而呈色 以TTC为例 4 讨论 1 基团的影响C11 酮基的甾体反应速度快于C11 羟基的甾体 C21 羟基酯化后较其他母体羟基的反应速度慢 当酯化了的基团为三甲基醋酸酯 磷酸酯或者琥珀酸酯时 反应速度更慢 2 溶剂和水分的影响含水量大时会使呈色速度减慢95 乙醇无水乙醇醛具一定的还原性 会使吸收度增高 故一般采用无醛乙醇做溶剂 3 碱的种类及加入顺序的影响氢氧化四甲基铵 4 空气中氧及光线的的影响反应及产物对光敏感对氧敏感 5 温度和时间的关系呈色反应速度随温度增高而加快室温或30 恒温条件下中国药典 25 暗处反应40 45min 二 异烟肼比色法1 原理甾体激素C3 酮基及某些其他位置上的酮基能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合 生成黄色的异烟腙 在一定波长处具有最大吸收 反应式如下 2 测定方法以中国药典收载的倍他米松磷酸钠为例 对照品溶液的制备对照品20mg50ml量瓶供试品溶液的制备 供试品20mg50ml量瓶 测定法 本法主要用于甾体激素制剂的含量测定 如倍他米松软膏 倍他米松磷酸钠及其注射液的含量测定 3 讨论 1 溶剂的选择无水乙醇和无水甲醇 2 酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度酸与异烟肼的摩尔比为2 1时有最大吸收 3 水分 温度 光线和氧的影响溶剂中含水量增高时 吸收度随之降低 温度升高 水解加速 在具塞玻管中不致使溶剂挥发和吸收水分的情况下 光与氧不影响反应 4 关于反应的专属性具有 4 3 酮基的甾体激素定量与异烟肼反应 三 Kober反应比色法指雌激素与硫酸 乙醇反应呈色 在520nm附近有最大吸收 雌二醇 3 甲醚 作者认为 雌激素与酸作用的呈色反应中 在最初是通过去羟基 重排 及甲基由C13移到C17而形成产物 1 然后被硫酸氧化形成具有较长共轭双键的发色团的产物 3 及进一步生成了具有吸收红外光谱红移发色团的产物 四 非水溶液滴定法米非司酮 有碱性冰醋酸 结晶紫 高氯酸 第五节体内甾体激素类药物分析 药物代谢研究生物利用度研究违禁药物监测 专属性强灵敏度高 LC MSGC MS 1 四氮